2型糖尿病肾病患者尿8-羟基脱氧鸟苷水平检测的意义

目的探讨酶联免疫吸附法(ELISA)检测尿8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平在糖尿病肾病(DN)中的意义。方法 ELISA法检测80例2型糖尿病(T2DM)患者和30例健康对照者尿8-OHdG水平。结果 DM组非DN、早期DN及临床DN亚组24h尿8-OHdG水平分别为(19.4±10.5)、(36.1±24.2)和(83.5±53.7)ng/mgCr,均高于健康对照组的(12.2±8.3)ng/mgCr,且与尿清蛋白排泄率(UAER)和糖化血红蛋白(HbA1c)呈正相关。结论 ELISA检测DN患者尿8-OHdG具有简便易行的优点;24h尿8-OHdG水平检测对于判断DN患者病情及预后有一定的意义。     

端粒酶活性在肺癌患者痰液脱落细胞中表达的临床价值研究

目的　探讨端粒酶活性在肺癌患者痰液中表达的临床意义。方法　运用端粒酶PCR 酶联免疫吸附测定法 (ELISA)检测了 45例肺癌、2 5例肺部良性疾病及 2例转移性肺癌患者痰液标本中的端粒酶活性。结果　肺癌患者痰液标本中端粒酶活性阳性率为 55.6 % (2 5/ 4 5) ,肺部良性疾病患者的痰液标本中端粒酶活性阳性率为 2 8.0 % (7/ 2 5) ,二者经统计学处理有显著性差异 (χ2 =5 .62 8,P <0 .0 5)。结论　检测肺癌患者痰液中端粒酶活性检测有助于肺部良恶性疾病的诊断和鉴别诊断。     

小儿哮喘患者T淋巴细胞亚群的变化

检测外周血T淋巴细胞亚群的变化可在一定程度上反映机体的免疫应答能力。本文利用T淋巴细胞亚群的单克隆抗体（McAb），采用SPA直接花环法检测了小儿哮喘患者外周血相应细胞的变化。目的是为了了解哮喘与T淋巴细胞亚群之间的关系。一、材料和方法1．检测对象按儿童哮喘诊断标准     

肺癌线粒体HV1基因突变的初步研究

目的探讨线粒体HV1基因突变与肺癌的相关性,同时评价痰液中检测HV1基因突变的诊断学意义。方法从38例肺癌患者的蜡块组织及痰液中提取DNA,同时以31例非肺癌(炎症或结核)患者的蜡块组织作为对照,采用聚合酶链反应产物单链构象多态性(PCR-SSCP)方法分析HV1基因突变。结果 38例肺癌患者的蜡块组织中发现21例存在异常迁移带,其中中央型肺癌16例,周围型肺癌5例;31例对照组织中发现8例存在异常迁移带;组织中存在异常迁移带的21例肺癌患者痰液中发现14例存在与组织相同的异常迁移带,中央型肺癌13例,周围型肺癌1例;16例中央型肺癌患者按肿瘤细胞分化程度分高、中、低分化3组,3组患者痰液中HV1基因突变阳性率分别为33.3%(1/3)、80%(4/5)和100%(8/8)。结论线粒体HV1基因突变与肺癌之间存在一定的相关性;肺癌患者痰液中HV1基因突变阳性率达66.7%(14/21),同时中央型肺癌患者痰液中HV1基因突变阳性率明显高于周围型,并且与肿瘤细胞的恶性程度呈正相关。     

急性丙型病毒性肝炎患者颗粒溶素在外周血中表达增高

目的 研究急性丙型病毒性肝炎患者外周血颗粒溶素（granulysin, GNLY）的表达水平及其临床意义。方法 收集30例急性丙型病毒性肝炎患者和30例体检健康者的全血和血清,分别行反转录聚合酶链反应（RT-PCR）测外周血单核淋巴细胞（PBMC）中GNLYmRNA的表达水平,酶联免疫吸附法（ELISA）法测血清中GNLY蛋白含量,并检测丙肝患者AST、ALT水平。结果 急性丙型病毒性肝炎患者组PBMC中GNLYmRNA表达水平（7.71±1.44）高于体检健康者（0.83±0.17）（P<0.01）;血清GNLY平均浓度(20.16 ± 6.03 ) ng/mL也高于体检健康者(9.94 ± 2.99)ng/mL (P<0.01)。PBMC中GNLYmRNA表达水平与血清HCV RNA表达水平呈负相关（r=﹣0.869,P<0.01）;血清GNLY含量与肝功能指标ALT呈正相关（r=0.522,P<0.01）,与AST呈正相关（r=0.661,P<0.01）。结论 急性丙型病毒性肝炎患者PBMC中GNLYmRNA表达和血清中GNLY蛋白含量显著高于健康人群,其表达水平的变化有助于了解患者机体细胞免疫状态,监测病情。     

颗粒溶素的克隆表达及活性分析

目的克隆人颗粒溶素基因并进行原核表达。方法体外分离并培养外周血单个核细胞,抽提总RNA,RT-PCR扩增人颗粒溶素的基因片段,并将其插入pMD18-T进行测序,鉴定正确后分别将目的基因亚克隆至pET32a(+),构建原核表达质粒pET-GNLY9K和pET-GNLY15K,将重组质粒转入大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE和Western-blot鉴定融合蛋白的正确性。MTT检测颗粒溶素融合蛋白的生物活性。结果成功构建了原核表达载体pET-GNLY9K和pET-GNLY15K,经诱导在原核表达系统中高效表达了相应分子质量约31和37ku的融合蛋白,重组颗粒溶素融合蛋白能特异地与抗颗粒溶素抗体结合,GNLY9K融合蛋白可以明显抑制A549细胞增殖,而GNLY15K融合蛋白对细胞增殖影响极低。结论利用原核表达体系成功地表达了不同分子质量的颗粒溶素融合蛋白,为颗粒溶素的后续研究奠定了基础。     

样本接力跟踪检测质量控制法的初步应用

目的 建立一种以"接力"模式选取批次样本作为"质控品"," 零成本"便捷开展室内质控的方法.方法 使用BC-5500五分类血细胞仪;通过预先监测统计,选定样本能在接力间隔期间(2～4℃,1～3 d)相对稳定的项目(WBC)开展质控;在仪器校准后立即开展第1批患者样本的检测(将此批检测假定为"0"偏差%、"0"偏差),从中选取1份最靠近校准品定值的样本作为"集中值质控品",在第2批(d)检测中带入复检,并在批次中选出第2份"集中值质控品",如此随日常检测批次不断延续;此编排可使"质控品"批次间的偏差%(表象偏差%)具备"交接性",以此为依据同步计算每份"质控品"的"累积差值(真相差值)",从而具备对"0"偏差的"跟踪性";根据累积差值的性质将其"移植"于s=√Σ(x-)2/n-1公式,得到"累积差值标准差公式":Sb=√Σ(0-Si)2/n-1,计算Sb,确定对累积差值的控制范围;统计偏差%组绝对值数据,确定对偏差%的控制范围;最后以L-J法图形表达方式同步控制"累积差值"和"偏差%".结果 WBC数据图形模型显示:接力法既控制"真相差值"又控制"表象偏差%",可以如L-J法一样显示检测系统误差变化.结论 接力法能赋予普通血样以"质控品"属性;累积差值"移植"于L-J法统计公式后,使接力法兼具统计学优点;相对于质量差的商品质控品项目(WBC),接力法更具效果和效益.     

肺癌痰液p53和K-ras基因及端粒酶联合检测的临床研究

目的:从肿瘤分子生物学角度探讨痰液多基因、多因素联合检测对肺癌早期诊断、病情预后及肿瘤防治方面的意义。方法:采用聚合酶链反应-单链构象多肽性分析(PCR-SS-CP)方法和聚合酶链反应-酶联免疫吸附测定法(PCR-TRAP-ELISA)检测55例经病检确诊的肺癌患者痰中p53和K-ras基因突变率及端粒酶活性。结果:55例肺癌患者痰中,p53、K-ras基因突变率和端粒酶阳性率分别为61·8%、40·0%和58·2%,且有11例三项指标均异常。23例肺良性病患者p53、K-ras基因突变率和端粒酶阳性率分别为21·7%、8·7%和30·4%,两组比较差异有统计学意义,P<0·01。三项指标异常与肿瘤组织类型、临床分期及是否化疗差异无统计学意义(P>0·05),与吸烟差异有统计学意义(P<0·05)。联合检测的检出率明显高于单因素变异的检出率,P<0·05。结论:联合检测可提高肿瘤早期诊断的敏感性和检出率,并对判断疾病的性质及病情预后有一定的指导意义。痰液检测无创、简便,患者依从性好。     

兰州地区慢性乙型肝炎与人类白细胞抗原-DRB1等位基因关系的初探

目的　探讨人类白细胞抗原(HLA) DRB1基因频率与乙型肝炎病毒感染的相关性。方法　用聚合酶 链反应/序列特异性引物法对兰州地区汉族健康者48例、慢性乙型肝炎患者53例和急性乙型肝炎感染者21例进行 HLA DRB1等位基因分型,并作相关性分析。结果　兰州地区慢性乙型肝炎组HLA DRB1 07X的频率明显高于健 康对照组和急性自限性感染组(P<0.05)。结论　HLA DRB1 07X可能与兰州地区汉族慢性乙型肝炎感染相关, 免疫遗传因素参与慢性乙型肝炎的发病机制。