L型钙通道在LQTl发病机制中作用的实验研究

目的 分析L型钙电流(IcaL)在犬三层心室肌细胞中的特点,探讨其在LQTl发病机制中的作用.方法 成年杂种犬14只,体重13～15 kg,雌雄不拘.分离犬三层心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录动作电位(AP)和ICaL,依次用Chromanol 293B(50ìμmoL/L)阻断慢激活延迟整流性钾电流(IKs)模拟LQTl,用异丙肾上腺素(100 nmo/L)激活13肾上腺素受体(β-AR),观察AP和,ICaL的变化.分三层取少量心室肌组织,采用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测各层L型钙通道a1C亚单位的mRNA含量.结果 正常情况下,犬三层心室肌细胞ICaL电流密度差异无统计学意义[外层(4.253±0.782)pA/pF,中层(4.392±0.714)pA/pF,内层(4.182±0.665)pA/pF,P＞0.05],而中层心室肌细胞动作电位时限(APD)较内层和外层的长[外层(721.48±26.59)ms,中层(911.80±31.24)ms,内层(783.52±25.27)ms,P＜0.05];阻断IKs后ICaL电流密度没有变化,而APD均明显延长[(外层(835.21±27.34)ms,中层(1089.21±30.55)ms,内层(830.64±27.12)ms,与阻断IKs前相比,P＜0.05)];β-AR兴奋使三层心室肌细胞ICaL显著增加,且三者变化差异无统计学意义[(外层(5.654±0.756)pA/pF,中层(5.458±0.702)pA/pF,内层(5.600±0.819)pAZpF,P＞0.05].但β-AR兴奋使外层和内层心室肌细胞APD缩短,中层心室肌细胞APD延长,三者变化差异有统计学意义[外层(792.63±26.71)ms,中层(1127.85±32.10)ms,内层(811.32±27.52)ms,P＜0.05].实时定量RT-PCR结果显示,三层心室肌细胞中alC亚单位的mRNA含量差异无统计学意义(外层0.112±0.019,中层0.077±0.018,内层0.109±0.012,P＞0.05).结论 L型钙通道在犬三层心室肌中的分布没有差异,在LQTl模型中,Iso使三层心室肌细胞,ICaL均匀增加,推测ICsL本身没有引起LQTl复极不稳定.     

抗HIV-1免疫基因的研究进展

人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV -1)是艾滋病(Acquired Immune DeficiencySyndrome,AIDS)的病原体.HIV感染使人体免疫系统中最重要的CD4+T淋巴细胞减少,从而破坏人的免疫系统,最终使免疫系统崩溃,丧失对各种疾病的抵抗能力而并发多种感染和肿瘤最终导致死亡.宿主的一些抗艾滋病免疫基因如载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G、正常T细胞表达分泌的调节活化蛋白等在抑制HIV感染和延缓感染者疾病进展中都起着非常重要的作用.文章主要综述人体内抗HIV病毒的部分免疫基因及其作用机制.     

FGF19调控肿瘤细胞增殖和自噬的生物学功能研究

目的 研究成纤维细胞因子19(FGF19)在调控肿瘤细胞增殖和自噬中的生物学功能.方法 采用不同浓度的FGF19重组蛋白处理肿瘤细胞,观察细胞的形态及生长情况.CCK-8检测经 FGF19重组蛋白处理后的细胞增殖情况.采用免疫印迹检测FGF19重组蛋白处理对肿瘤细胞内自噬体标志蛋白LC3以及自噬相关蛋白p62表达的影响.利用免疫荧光技术检测FGF19重组蛋白处理后细胞内自噬斑点的变化.结果 FGF19重组蛋白处理可以促进肿瘤细胞的增殖;免疫印迹结果显示,FGF19处理抑制肿瘤细胞内 LC3-II的表达;免疫荧光结果显示,经过FGF19重组蛋白处理后的肿瘤细胞内LC3斑点比对照组明显减少.结论 一定浓度的FGF19能促进肿瘤细胞的增殖,抑制其自噬.     

中青年缺血性肠炎93例临床特点分析

目的:探讨中青年(年龄26~60岁)缺血性结肠炎患者的临床特点。方法:对2013年10月—2017年10月在深圳市南山区人民医院确诊为缺血性肠炎的中青年住院患者的临床资料进行回顾性分析,并与同期收治的老年组(年龄≥60岁)患者相比较,观察两组患者的危险因素、临床表现、预后、实验室检查指标、病变部位及内镜特征、影像学检查(腹部电子计算机断层成像及血管成像:腹部CT及CTA)是否存在差异。结果:中青年组患者的主要危险因素为腹部手术史、高血压病及高脂血症;主要临床表现为腹痛和便血;C-反应蛋白和D-二聚体水平升高。血小板、纤维蛋白原水平低于老年组(P0.05),中青年组患者的病变范围小于老年组,多累及单一结肠段。96%(45/47)患者经中西医结合保守治疗后治愈和缓解。2例经外科手术治疗缓解。结论:中青年缺血性肠炎患者的病变范围小于老年患者,血小板、纤维蛋白原水平低于老年患者,而其它实验室检查指标、临床表现、预后及影像学表现与老年患者无明显差异。中青年缺血性肠炎患者的预后较良好。     

肠道/口腔微生物组、血液代谢物等与胃癌相关性

目的 比较胃癌患者与健康人肠道微生物、口腔微生物和血液代谢物的差异,寻找可能和胃癌相关的微生物。方法 收集研究组(5例胃癌患者)和对照组(5例健康人)的粪便、唾液和血液样本,从粪便和唾液样本提取DNA用于宏基因组测序和后续生信分析,对血液样本检测与胃癌相关的10个临床指标。结果 研究组肠道微生物和口腔微生物在属和种水平的Alpha多样性均低于对照组,但差异不具有统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,研究组在肠道微生物中,属水平的乳杆菌属(Lactobacillu)和种水平的唾液乳酸杆菌(Lactobacillus salivarius)、咽峡炎链球菌(Streptococcus anginosus)等相对丰度差异具有统计学意义(P<0.05);线性判别分析(LEfSe)发现,肠道微生物上述指标有显著差异(LDA分值大于3);口腔微生物在属水平的弯曲杆菌属(Campylobacter)和奈瑟菌属(Neisseria)、种水平的Campylobacter concisus等相对丰度有显著差异(LDA分值为3)。相关性分析发现,研究组肠道微生物和口腔微生物中的Lactobac...     

细胞穿膜肽融合蛋白PEP1-vMIP-Ⅱ促进血管增生研究

 目的 构建细胞穿膜肽PEP-1与vMIP-Ⅱ融合基因的表达质粒,原核表达、纯化并鉴定PEP1-vMIP-Ⅱ融合蛋白,鉴定该蛋白的穿膜功能,研究其对血管增生相关基因表达的影响。方法 将化学合成的细胞穿膜肽PEP1和vMIP-Ⅱ基因克隆到原核表达载体pET15b,构建pET15b-pep-1-vMIP-Ⅱ质粒。表达纯化后,Western-blot 鉴定蛋白,荧光共聚焦显微镜观察融合蛋白的穿膜功能。Real time PCR检测该蛋白作用对HMEC-1细胞内血管增生相关基因表达的改变。结果 DNA测序和酶切结果鉴定了pET15b-PEP1-vMIP-Ⅱ载体构建正确,Western blot鉴定纯化的融合蛋白PEP1-vMIP-Ⅱ与所预测相对分子质量相符。激光共聚焦显微镜检测到该蛋白能够进入细胞,在HMEC-1细胞内上调了促血管增生基因VEGFA和VEGFC的表达。结论 成功构建了pET15b-PEP1-vMIP-Ⅱ载体,表达纯化的PEP1-vMIP-Ⅱ融合蛋白具有穿透细胞膜的功能,且能显著上调促进血管增生基因VEGFA和VEGFC的表达。     

芳香烃受体与肿瘤发生和发展的关系

芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)又名二噁英受体,是一种配体激活性转录因子,当与多环芳烃、卤代芳烃等配体结合后,可调控一系列基因的表达。AhR除了参与外源化合物的代谢外,还参与调控许多重要的生物学过程,包括个体发育、细胞分化、癌变等。AhR高表达于乳腺癌、肺癌、胰腺癌和胃癌等多种肿瘤中,可调控肿瘤细胞的增殖、周期、凋亡,以及细胞迁移和侵袭,并且在不同的细胞、不同的环境所起的作用不同。AhR的某些配体(3,3’-吲哚甲烷,tranilast等)显示有抑制肿瘤细胞生长、预防肿瘤发生的作用,因此AhR有望成为肿瘤治疗的新靶点。     

丹酚酸A 对食管癌细胞增殖与凋亡的影响及其机制

目的： 探讨丹酚酸A(salvianolic acid A,SalA)对食管癌细胞KYSE-150 增殖、凋亡的影响及其相关的作 用机制。方法： 将细胞随机分为对照组、10 μmol/L SalA 组、25 μmol/L SalA 组、50 μmol/L SalA 组。采用细胞计数 试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡;采用蛋白质印迹 法检测细胞增殖标志物Ki-67,细胞周期素D1(cyclin D1),细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase, CDK4),CDK6,B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2),Bcl-2 相关X(Bcl-2 associated X,Bax),活化半胱氨酸 天冬氨酸蛋白酶(cleaved-caspase-9,cl-caspase-9),cl-caspase-3,磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K),磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,P-Akt)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的表达水平。结果： 与对照组相比,SalA 各浓度组细胞增殖活性均显著降低(均P<0.01);处于G1 期的细胞显著增加,S期细胞显著减少(均P<0.01);细胞凋亡率均显著升高(均P<0.01);SalA 各浓度组细胞中Ki-67, cyclin D1,CDK4,CDK6,Bcl-2,PI3K,p-Akt 和mTOR 的表达水平均显著降低;而p21,Bax,cl-caspase-9 和clcaspase- 3 的表达水平均显著上升,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论： SalA 能抑制食管癌细胞KYSE-150增殖, 诱导细胞G1期阻滞和细胞凋亡,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR通路的激活有关。     

犬三层心室肌细胞的分离和鉴别

目的探讨有效分离和鉴别犬三层心室肌细胞的方法。方法用带有左室前降支的犬心肌组织块灌流分离心室肌细胞,得到的心肌细胞先根据解剖部位大致分成三层,再采用膜片钳技术,在电流钳模式下,随机选择各层15个细胞记录动作电位(AP),根据AP的形态、时程、频率依赖性进一步判断是否为相应层的心室肌细胞。结果经左室前降支插管灌流心肌组织块,可以得到数量多、状态好的心肌细胞。在15个心室肌细胞中,能准确判断其层次的有:外层7个、中层5个、内层8个。结论经冠状动脉插管灌流分离犬心室肌细胞是可行的,结合解剖部位和动作电位特点,能有效鉴别不同层的心室肌细胞。