免疫组化ABC法的改进

免疫组化ＡＢＣ法的改进亓学惠１孔霞２孔灵玲３梁桂华３崔文３张波４范连杰３指导（１山东省邮电学校卫生所２济宁医学院第一教学医院３济宁医学院４北京医科大学Ｐ５３抑癌基因是迄今为止人体肿瘤组织中突变率最高和最广泛的肿瘤相关基因。检测Ｐ５３基因突变已成为肿瘤...     

HSV-2感染可增加侵袭性宫颈癌的风险

一项汇总病例对照研究结果显示,单纯疱疹病毒2(HSV-2)在宫颈癌发展过程中可能是人乳头状瘤病毒(HPV)的协同因子。并清楚地显示出性传播疾病和癌症之间的关系。     

医疗事故赔偿中的多数药物不良反应事件是可以预防的

美国波士顿Brigham和妇女医院的研究人员Dr.Jeffrey M.Rothschild及其同事撰文指出,因药物不良反应而导致的医疗事故赔偿通常是严重、昂贵且可以预防的。     

硫酸化甲壳质对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖和周期的影响

目的　探讨硫酸化甲壳质对鼻咽癌CNE - 2Z细胞增殖和周期的影响。方法　MTT法检测增值抑制率和IC50 ,流式细胞术分析细胞周期。结果　不同浓度的硫酸化甲壳质分别处理细胞 2 4h、4 8h、72h时 ,抑制率随浓度的增加和时间的延长而增加 ,其IC50 分别为 (0 5 2 9± 0 0 39)、(0 0 4 8± 0 0 2 7)、(0 389± 0 0 2 7)mg/ml,各IC50 间的差异有非常显著性意义 (P <0 0 1)。 0 2mg/ml,0 4mg/ml,0 6mg/ml硫酸化甲壳质分别处理细胞 12h、2 4h、4 8h时 ,G0 /G1期细胞明显下降 ,G2 /M期细胞明显升高 ,随时间的延长变化更明显 (P <0 0 1)。结论　硫酸化甲壳质对CNE - 2Z细胞具有增殖抑制作用 ,并呈剂量和时间依赖性 ;阻滞细胞于G2 /M期 ,也呈时间依赖性 ;一定剂量的硫酸化甲壳质可能通过阻滞CNE - 2Z于G2 /M期而抑制其增殖。     

调补脾肾为主治疗2型糖尿病例析

近年来 ,笔者以调补脾肾为主 ,结合辨病治疗 2型糖尿病 ,取得满意疗效 ,现报告如下 :1　病因病机糖尿病属中医消渴病的范畴 ,主要病理为气阴两虚 ,脏腑功能失调。脏腑功能衰退是发病的重要因素。经云 :“五脏皆柔弱者 ,善病消瘅。”病变的脏腑主要累及肺脾肾 ,而以脾肾为主。糖尿病患者多有神疲气短、虚胖乏力、腰膝酸软、日渐消瘦等症 ,多由脾失健运 ,精气不升 ,生化无源之故。脾为后天之本 ,气血生化之源 ,主运化水谷精微。脾气虚弱 ,运化失职 ,津液不能上输于肺而滋养五脏则肺燥阴虚 ,胃失濡润 ,肾失滋源而见口渴多饮之证。正如李东垣 :…     

细胞穿透肽YARA介导增强型绿色荧光蛋白转导入人结直肠癌细胞的实验研究

目的 构建原核表达载体pET15b-YARA EGFP,表达并纯化出融合蛋白YARA-EGFP,观察其穿透人结直肠癌细胞的情况.方法 用分子克隆技术构建出表达型载体pET15b-YARA-EGFP,在E.coli BL21(DE3)中表达融合蛋白YARA-EGFP,将鉴定和纯化后的融合蛋白加入体外培养的人结直肠癌细胞.结果 得到纯化的融合蛋白YARA-EGFP,能高效地转导入体外培养的人结直肠癌细胞,并表现出剂量和时间依赖性,MTT法检测在其高浓度时仍对细胞无毒性.结论 YARA-EGFP融合蛋白能高效地转导入体外培养的人结直肠癌细胞.     

间充质干细胞成血管因子受体表达特征及其意义

目的:探讨间充质干细胞成血管因子受体表达特征及其意义。方法:采用经典的全骨髓贴壁法培养骨髓源间充质干细胞(MSC),通过成骨、成脂肪等多向诱导分化以及流式细胞分析其表面标记(CD34、CD90、CD29)等鉴定MSC特征;以P1-P17MSC为实验材料,利用RT-PCR的方法检测PDGFR、VEGFR和NRP1的表达。利用Transwell体外迁移体系初步探索VEGF在MSC迁移中的作用,同时利用MTT法评价VEGF对MSC增值的作用。结果:培养的MSC呈现出CD90、CD105强阳性,具有成骨、成脂肪等多向分化能力;强表达PDGFR-β和NRP1、不表达VEGFR(Flk1和Flt1)和PDGFR-α,VEGF促进了MSC的增殖和迁移。结论:VEGF可能通过PDGFR-NRP1促进了MSC的增值和迁移。     

药物性肝损伤124例

药物性肝损伤（DILI）是指应用治疗剂量的药物时,肝脏受药物毒性损害或发生变态反应而引起的疾病。其临床表现各异,实验室检查缺乏特异性,容易误诊。本文分析了2002年1月至2009年12月在我院门诊或住院诊断的124例药物性肝损伤患者的病因及临床特点以期提高临床医师对此病的认识。     

PEP-1-SOD1融合蛋白转导入大鼠心肌组织的能力及其酶活性

目的:研究PEP-1-SOD1融合蛋白转导进人大鼠心肌组织的能力,并测定转导的目的蛋白酶活性.方法:实验分为SOD1组和PEP-1-SOD1组,分别经大鼠尾静脉注射500 μg纯化后的SOD1及500μg纯化后的PEP-1-SOD1融合蛋白入大鼠体内,于注射后0.5,1,2,4,8,24 h时间点取心脏(n=6,每组,每个时间点),经40 g/L多聚甲醛溶液固定6 h后行冰冻切片,通过免疫组织化学方法检测PEP-1-SOD1进入大鼠心肌组织的能力和分布情况.黄嘌呤氧化酶法测定心肌组织SOD1活性.结果:PEP-1-SOD1组注射后0.5 h时,大鼠心肌组织中即出现均一的明亮红色荧光信号,分布于细胞浆及细胞核,具有时间依赖性的特点,荧光强度最强点为1 h时间点,而SOD1组未见到红色荧光信号.于注射后0.5 h时SOD1活性开始升高PEP-1-SOD1组为(85.37±1.67),SOD1组为(52.23±0.67),两组相比较,差异具有统计学意义(P<0.01);注射后1 h时SODl活性可达高峰,PEP-1-SOD1组为(119.16±1.37),SOD1组为(53.47±1.02),两组相比较,差异具有统计学意义(P<0.01),2～24 h逐步下降;SOD1组各时间点间相比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:PEP-1-SOD1融合蛋白能以天然活性形式迅速高效的转导人大鼠心肌组织,并保持酶活性达24 h.     

腺病毒介导的人内皮型一氧化氮合酶基因和增强型绿色荧光蛋白基因在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达

目的:研究腺病毒载体介导人内皮型一氧化氮合酶(human endothelial nitric oxide synthase,heNOS)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)在体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymalstem cells,MSCs)的表达。方法:体外培养、扩增大鼠骨髓间充质干细胞,并对培养的细胞进行成骨、成脂肪诱导分化和细胞免疫表型鉴定;用Pme I线性化后去磷酸化的pShuttle-heNOS-EGFP转化含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态BJ 5183,使其在细菌内发生同源重组,获得阳性重组质粒pAdEasy-heNOS-EGFP。重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定正确后经PacⅠ酶切,转入AD 293细胞,包装成重组腺病毒Ad-heNOS-EGFP。用重组腺病毒Ad-heNOS-EGFP对MSCs进行转染,并用荧光显微镜及免疫荧光染色法观察转染细胞内EGFP和heNOS蛋白质的表达。结果:pShuttle-heNOS-EGFP与pAdeasy-1在BJ 5183中成功地发生了同源重组,得到了重组腺病毒质粒pAdEasy-heNOS-EGFP。重组质粒在AD 293细胞中包装成重组腺病毒Ad-heNOS-EGFP。经基因转染的MSCs中高表达heNOS和EGFP。结论:采用腺病毒载体可以将外源性的heNOS基因转染至MSCs中,并得到有效表达,且携带的EGFP标记可以直观地检测靶细胞感染和外源基因的表达情况,这将为勃起功能障碍的细胞治疗提供一条新的途径。