pcDNA3.1/hIL-18真核表达载体的构建及表达

目的 :构建重组真核表达质粒pcDNA3.1/IL 18,并在哺乳动物细胞COS 7和Rlc310中进行瞬时和稳定性表达。方法 :从含hIL 18基因的中介载体 pGEM TEasy( pGEM T/hIL 18)中 ,以限制性内切酶酶切方法获得目的片段 ,克隆入真核表达质粒 pcDNA3.1( )中。以脂质体法转染COS 7和Rlc310细胞 ,用RT PCR检测IL 18mRNA的水平 ,免疫组化染色法检测蛋白表达。结果 :构建了hIL 18基因的重组真核表达质粒pcDNA3.1/IL 18,并可在哺乳动物细胞中瞬时、稳定表达 ,获得了可稳定表达hIL 18基因的Rlc310细胞株。结论 :pcDNA3.1/IL 18的构建及表达 ,为IL 18抗肿瘤作用的研究奠定了基础     

年龄和性别对人铜的吸收,生物半衰期和状态的影响

本文对年龄２０～８３岁（１２７人）健康、自由生活的男女进行了研究，旨在确定年龄和性别对人的铜（Ｃｕ）吸收、生物半衰期（ＢＨ）和状态的影响。２０～５９岁的妇女铜吸收（７１％）显著大于男子（６４％）（Ｐ＝０．０２），６０～８３岁男女间无差异。＾６７Ｃｕ的ＢＨ范围为１３～３３天，２０～５９岁男女间有差异。（Ｐ＝０．００６），６０～８３岁男女间无差异。血浆铜、酶促血浆铜蓝蛋白（Ｃｐ）和免疫反应（ＲＩＤ）…     

ICOS／B7H2的功能研究进展

1　ＩＣＯＳ Ｂ7Ｈ2的分子生物学特征1.1　ＩＣＯＳ　ＣＤ2 8家族两个成员ＣＤ2 8和ＣＴＬＡ - 4是免疫系统重要的调节分子　 1999年 ,Ｈｕｔｌｏｆｆ等[1]发现了ＣＤ2 8家族第三个成员ＩＣＯＳ(ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｃｏ -ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ)分子 ,该分子在静息Ｔ细胞上不表达 ,只有通过诱导Ｔ细胞预激活或活化后 ,Ｔ细胞才能表达这种分子。ＩＣＯＳ分子为Ⅰ型跨膜糖蛋白 ,是由氨基酸序列一致分子量为 2 7ＫＤ和 2 9ＫＤ ,两条肽链经二硫键连接组成的同源二聚体。ＩＣＯＳｍＲＮＡ的ＯＲＦ(ｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ)编码一个含 1…     

热不稳定大肠杆菌肠毒素B亚单位免疫调节功能的实验研究

目的：探讨大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位(LTB)的免疫调节功能及其可能的机制。方法：用SephacrylS—100凝胶柱层析纯化LTB蛋白。选用BALB／c小鼠，以鸡溶菌酶(HEL)为抗原，经鼻黏膜单独免疫，或以不同剂量的LTB为佐剂与HEL共免疫。用ELISA法检测血清和肠分泌液中HEL特异性抗体的水平。用^3H—TdR掺入法，体外测定LTB蛋白对刀豆蛋白A(ConA)及同种异体抗原介导的淋巴细胞增殖反应的影响。结果：HEL单独免疫组血清中仅有弱的抗HEL IgG，末检测到抗HEL IgA，且其肠分泌液中亦末见HEL特异性IgA抗体。但加用LTB佐剂的3个组，其血清中抗HEL IgG、IgA的水平及肠分泌液中抗HELIgA的水平均显著高于HEL单独免疫组(P＜0．001)。体外实验显示，LTB可明显抑制ConA及同种异体抗原介导的淋巴细胞增殖反应。结论：我们制备的LTB蛋白对免疫系统具有双向的调节功能，既可作为有效的黏膜佐剂，辅佐外来抗原刺激机体产生黏膜免疫应答，又具免疫抑制效应，有效地抑制淋巴细胞活化。LTB免疫调节功能的发挥，可能与其作用于机体的途径有关。     

重组LTB蛋白在水弧菌VSP60中的高效表达与纯化

目的 优化重组大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位(rLTB)工程菌(VSP60)高效表达的条件。方法 以UVP凝胶照相系统扫描以及改良Lowry’s法检测rLTB表达量并分析各种因素对其影响。利用Sephacry1 S-100凝胶层析纯化rLTB蛋白。结果 工程菌30℃振荡培养至吸光度(A600)值达0．2-0．3时加IPTG(终浓度为0．5mmol/L)，诱导培养18-22h为rLTB蛋白表达的最佳条件。Sephacryl S-100凝胶柱一步层析后。rLTB蛋白纯度可达98．1％。结论 本研究所用的培养和纯化工艺简单易行。可获得高产量、高纯度的rLTB蛋白。     

富含硒玉米对低硒大鼠血硒和GSH-Px活性的影响

为了研究富含硒玉米对低硒粮饲料喂养大鼠血硒状态的影响 ,观察了补充富含硒玉米或亚硒酸钠时和停止补硒后大鼠血硒水平和谷胱甘肽过氧化物酶 ( GSH- Px)活性的变化。结果显示 :1两种补硒形式均可有效地增高血浆、红细胞的硒水平和红细胞的 GSH- Px活性 ;2富含硒玉米增高和维持血浆和红细胞硒水平作用与亚硒酸钠相同 ;3富含硒玉米升高红细胞 GSH- Px活性的作用低于亚硒酸钠 ,但停止补硒后两者维持 GSH- Px活性作用相似。表明富含硒玉米能有效地改善低硒大鼠的血硒状态     

富硒小麦与富硒玉米对大鼠组织硒状态影响的比较

目的 :比较富硒小麦和富硒玉米的补硒作用。方法 :给低硒大鼠补充富硒小麦或富硒玉米 ,观察大鼠组织硒水平和组织谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH- Px)活性的变化。结果 :两种补硒方式均能升高肾脏、肝脏、心肌的硒水平和心肌的 GSH- Px活性 ;富硒小麦升高和维持肾脏、肝脏和心肌硒水平的作用与富硒玉米相同 ;富硒小麦升高心肌 GSH- Px活性作用在补硒 6周和停止补硒 3周时显著高于富硒玉米。结论 :富硒小麦的补硒作用优于富硒玉米。     

Expression of E. coli heat-labile enterotoxin B subunit in transgenic tobacco plants

Objective ： To construct plant transformation vector containing Escherichia coli heat-labile enterotoxin B subunit （LT-B） gene and generate LT-B transgenic tobacco plants. Methods： The LT-B coding sequence was amplified from pMMB68 by PCR, subcloned into middle vector pUCmT and binary vector pBI121 to obtain plant expression vector pBI-LTB, in which LT-B expression was controlled under the Cauliflower mosaic virus （CaMV） 35S promoter. The tobacco plants （Nicotiana tobacum L. Cuttivar Xanthi） were transformed by co-cultivating leaf discs method via Agrobacterium tumefaciens LBA4404 harboring the plant expression vector. The regenerated transgenic tobacco plants were selected by kanamycin and confirmed by PCR, Southern blot, Western blot and ELISA. Resuits： LT-B gene integrated in the tobacco genomic DNA and were expressed in 9 strains of transgenic tobacco plants. The yield was varied from 3. 36-10. 56 ng/mg total soluble tobacco leaf protein. Conclusion： The plant binary expression vector pBI-LTB was constructed successfully, and transgenic LT-B tobacco plants was generated, and confirmed by Southern blot. The protein LT-B expressed by engineered plants was identified by Western blot analysis and had the expected molecular weight of LT-B pentamer protein. This result is an important step close to developing an edible vaccine and supplying a mucasal immunoajuvant, which will contribute to the preven- tion of mucosaroute evading pathogen.     

白血病细胞内SOD及GSH-Px活性研究

观察了29例白血病患者白血病细胞内超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化酶(GSH—Px)活性及血清脂质过氧化物(LPO)水平。研究结果表明:①白血病细胞内SOD活性明显升高,GSH—Px活性显著降低,血清LPO水平增高;②白血病细胞内SOD及GSH—Px活性分别与外周血白血病细胞百分数呈正负相关;③与单核细胞白血病(M_4,M_5)及淋巴细胞白血病相比,粒细胞白血病(M_1,M_2,M_3)细胞内SOD活性相对较高,GSH—Px活性相对较低;④白血病细胞内SOD活性在白血病缓解与复发过程中无显著性差异,而GSH—Px活性则在缓解后回升,复发时又重新降低。上述结果提示,白血病细胞自身存在有明显的过氧化物损伤,给予白血病患者抗氧化治疗是必要的,白血病细胞GSH—Px活性可作为白血病活动的观察指标。