基于λ Red重组系统敲除鼠伤寒沙门菌yejE基因

目的采用改良的λRed同源重组技术,以减毒沙门菌TT-16(ΔclpP TT-1)为前体菌,构建敲除yejE基因的减毒沙门菌TT-54(ΔclpPΔyejE TT-1),为后续研究yejE基因的功能奠定基础。方法 (1)将重组质粒PKD46导入减毒沙门菌TT-16(ΔclpP TT-1),获得一次重组受体菌TT-51(ΔclpP PKD46 TT-1);(2)通过PCR扩增获得yejE基因的一次同源重组打靶片段,将其导入TT-51(ΔclpP PKD46 TT-1),利用四环素平板筛选,获得重组菌TT-52(ΔclpPΔyejE::tetRA TT-1);(3)将重组质粒PKD46导入重组菌TT-52,获得同源重组受体菌TT-53(ΔclpPΔyejE::tetRA PKD46 TT-1);(4)将PCR扩增获得的yejE基因二次同源重组打靶片段导入TT-53(ΔclpPΔyejE::tetRA PKD46 TT-1),通过四环素敏感平板筛选,获得敲除了yejE基因的减毒沙门菌TT-54(ΔclpPΔyejE TT-1)。结果通过两轮(一次和二次)λRed同源重组,减毒沙门菌TT-16...     

ClpXP蛋白复合物对沙门氏菌囊泡结构稳定性的影响初探

目的 初探ClpXP蛋白复合物是否会对沙门氏菌囊泡(Salmonella-containing vacuole,SCV)结构稳定性产生影响.方法 (1)将表达绿色荧光蛋白的质粒(pGEX-6P-l-sf-GFP)通过电转化方式导人野生型鼠伤寒沙门氏菌TT-l(Wild-type)及敲除了clpP基因的鼠伤寒沙门氏菌TT...     

成都市部分大学生对HPV预防性疫苗认知态度影响因素调查

目的了解成都市大学生对人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)及其预防性疫苗的认知态度,分析影响其对HPV疫苗接受程度的因素。方法采用方便抽样法,对成都市3所高校的大学生进行问卷调查,回收有效问卷294份,对问卷数据进行统计分析。结果 79(26. 9%)名大学生听说过HPV,71(24. 1%)名大学生听说过HPV预防性疫苗。179(62. 2%)名大学生表示愿意接种疫苗,225(76. 5%)名会鼓励伴侣/将来的伴侣接种。不愿接种疫苗的理由中,担心疫苗的安全性占73. 4%(80/109)。多因素Logistic回归分析显示,女性较男性的接种意愿高,知道HPV感染与宫颈癌等疾病有关的大学生接种意愿更高。结论大学生对HPV及其预防性疫苗的认知度较以往有所提高,接种意愿受对该疫苗认知程度的影响。建议政府以疫苗安全性为重点开展健康教育,制定高危人群倾斜性政策。同时建议国产疫苗加快研发并在本调查基础上制定合理的价格,从而在大学生中得以推广。     

鼠伤寒沙门氏菌yejE基因缺失对沙门氏菌囊泡结构完整性的影响

目的 沙门氏菌囊泡（Salmonella-containing vacuole, SCV）是沙门氏菌进入宿主细胞后产生的一种类似于吞噬体的结构。SCV结构完整性一旦被破坏,其内包裹的沙门氏菌将进入细胞质并通过MHC-I途径激活宿主CD8 + T细胞免疫应答。有研究表明沙门氏菌yejE基因能够影响宿主CD8 + T细胞免疫应答,但具体机制尚不明确。本研究将观察并计算yejE基因缺失后鼠伤寒沙门氏菌的SCV逃逸率,探讨沙门氏菌yejE基因是否通过改变SCV的结构稳定性,影响宿主的CD8 + T细胞免疫应答。方法 （1）采用Red同源重组技术或P22噬菌体转导技术,在减毒沙门氏菌TT-16（ΔclpP TT-1）的基础上构建缺失了sifA、yejE基因或二者同时缺失的减毒沙门氏菌,随后导入质粒pGEX-6P-1-sf-GFP,获得一系列能够在IPTG诱导下表达绿色荧光蛋白的减毒沙门氏菌;（2）用构建好的菌株分别感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,于感染后2h和6h进行免疫荧光染色;（3）采用激光共聚焦显微镜观察并计算各菌株的SCV逃逸率。结果 感染后2h和6h,鼠伤寒沙门氏菌yejE和sifA单缺失株的逃逸率均显著高于亲本株,且sifA与yejE双基因缺失株的逃逸率与yejE或sifA单缺失株的SCV逃逸率相比无显著差异性。结论 鼠伤寒沙门氏菌yejE基因能通过改变SCV的结构完整性,影响宿主CD8 + T细胞免疫应答;此外,sifA与yejE基因可能通过相同的途径影响SCV的结构完整性。