库普弗细胞条件培养基对原代培养肝细胞的细胞毒性

目的 探讨内毒素血症时库普弗细胞激活对肝细胞损伤的作用机制.方法 用链霉蛋白酶和胶原酶原位灌流,Percoll密度梯度离心分离、纯化SD大鼠肝细胞和库普弗细胞,制备内毒素(LPS)刺激的库普弗细胞的条件培养基(KCCM)并作用于肝细胞,检测肝细胞培养基丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测KCCM对大鼠原代肝细胞活性的影响.结果 KCCM作用于肝细胞2 h后,肝细胞培养基中ALT、AST及LDH含量均明显升高(P＜0.05),在2～4 h内随时间延长ALT、AST及LDH含量均逐渐增加,呈明显的时间-效应关系;MTT结果显示,KCCM作用后12 h、24 h时间点对肝细胞具有明显损伤作用(P＜0.05).结论 内毒素诱导库普弗细胞释放的可溶性因子作用一定时间后可直接对肝细胞造成损伤.     

病毒性肝炎患者内毒素血症及外周血单核细胞Toll样受体4基因表达的研究

目的研究病毒性肝炎患者内毒素血症及外周血单核细胞内Toll样受体4(TLR4)mRNA的表达。方法采用鲎试剂法测定86例肝炎患者和11例对照组的血浆脂多糖(LPS)浓度,外周血单核细胞TLR4mRNA的表达用RT-PCR法检测。结果肝炎患者血浆LPS浓度均有不同程度的升高,高于对照组(P<0.05),重型肝炎组升高最显著,与其他各型肝炎比较差异有显著性(P<0.05);重型肝炎组单核细胞TLR4mRNA的表达升高最明显,与其他各型肝炎及对照组比较差异有显著性(P<0.05),其他各型肝炎与对照组比较差异不明显(P>0.05)。结论各型肝炎均存在内毒素血症,以重型肝炎最为显著,且重型肝炎患者外周血单核细胞内TLR4mRNA的表达水平最高,可能与肝细胞损伤相关。     

21例人埃里希体病临床诊断的回顾性分析

目的 研究人埃里希体病的流行病学和临床特点.方法 回顾性分析21例人埃里希体病临床诊断病例的流行病学、临床表现、实验室检查、治疗以及预后.结果 本次人埃里希体病流行地区位于湖北、河南两省交界区,疫区蜱活动性高.病例均为农民,年龄最大69岁,最小19岁,中位数为50岁,男女比约为2∶3.病例均无类似病例接触史,3例在起病前1周有明确蜱咬史.常见症状包括发热、腹泻、咳嗽、恶心呕吐、腹痛和咳痰;并发症包括出血、中毒性脑病、急性肾功能不全、继发感染和呼吸衰竭.常见实验室异常包括PLT减少,嗜酸粒细胞减少,血清乳酸脱氢酶、肌酸激酶和转氨酶升高,WBC减少,蛋白尿.9例患者行外周血涂片检查,其中1例中性粒细胞胞质中发现包涵体;17例行血清学检查,其中埃里希体抗体阳性5例.经多西环素和对症支持治疗,痊愈14例,病死7例,死亡病例平均年龄56岁.结论 人埃里希体病是一种蜱传急性自然疫源性疾病,可累及多器官,高龄病例易发生并发症,预后较差.     

血浆置换中不同血管通路对重型肝炎治疗的影响

目的：探讨应用两种不同血管通路进行血浆置换治疗重型肝炎的疗效，及两种方法对治疗的影响。方法：将86例重型肝炎患者在常规内科治疗基础上随机分成2组，分别采取股静脉插管(插管组)和前臂动、静脉穿刺(穿刺组)建立血管通路。观察两组患者进行血浆置换后治疗的有效率、感染发生率，以及对血液总胆红素、丙氨酸转氨酶、血氨、凝血酶原时间、补体等指标的影响。结果：插管组和穿刺组治疗有效率分别为75．56％和78．05％，感染发生率分别为15．56％和4．88％；血浆置换后血液总胆红素、丙氨酸转氨酶、血氨、凝血酶原时间、补体C3均得到显著改善，除总胆红素降低幅度在穿刺组更加明显外，其余各值在两组间差异均无显著性。结论：血浆置换治疗能有效改善重型肝炎患者体内各主要异常血液指标；与插管法相比，穿刺法在降低血液总胆红素方面具有更多的优势。     

库普弗细胞对急性肝衰竭模型鼠TLR4表达的影响

目的:探讨抑制库普弗细胞对急性肝衰竭模型鼠Toll样受体4(Toll-like receptor 4.TLR4)表达的影响.方法:80只SD雄性大鼠随机分为正常对照组、氯化钆(gadolinium chloride,GdCl3)组、内毒素(LPS)组、GdCl3+LPS组.免疫组化检测EDl表达,观察GdCl3对库普弗细胞的抑制程度,并检测血清ALT、TNFα、IL-1β的水平,Western blot分析肝组织TLR4的表达.结果:GdCl3组肝组织中EDl免疫反应阳性细胞与正常对照组相比明显减少(P＜0.05),LPS组EDl阳性细胞数量最多,GdCl3+LPS组EDl阳性细胞数少于LPS组(P＜0.05).GdCl3+LPS组AIJT、TNFct、IL-1β水平高于正常对照组,但低于LPS组(P＜0.05).GdCl3+LPS组大鼠肝脏TLR4表达与LPS组相比较弱(P＜0.05),与正常对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论:抑制库普弗细胞激活可减少肝组织11LR4的表达,库普弗细胞在急性肝衰竭中发挥重要作用.     

沉默调节蛋白6-谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白的克隆表达

目的 构建含有人沉默调节蛋白6(hSIRT6)基因的重组原核表达载体,获得高效表达hSIRT6蛋白的基因工程菌,以及较高产量的SIRT6蛋白.方法 取205 ng HEK293细胞总RNA逆转录后合成的cDNA为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增hSIRT6的编码序列,并克隆至原核表达载体pGEX-4T-3中,构建重组的质粒pGEX-4T-3/SIRT6;将重组质粒pGEX-4T-3/SIRT6转化感受态细菌BL21( DE3),在含100 mg/L氨苄西林的LB平板37℃培养过夜,以pGEX-4T-3空载体作为对照,在相同条件下转化并异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶(GST)蛋白.产物经SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定.结果 PCR产物大小及双酶切鉴定证明所克隆的基因是hSIRT6,DNA测序进一步证实与GeneBank序列完全一致.获得高表达及纯化的SIRT6-GST融合蛋白,该可溶蛋白的相对分子质量为72×103,经Western blot鉴定证实为目的蛋白.结论 成功构建了基因重组体pGEX-4T-3/hSIRT6,并制备出可溶性SIRT6-GST融合蛋白.     

生长抑素对脂多糖刺激的大鼠库普弗细胞抑制作用的观察

目的探讨生长抑素（SST）对脂多糖（LPS）刺激的原代培养大鼠库普弗细胞NO、TNFα和5-脂氧合酶（5-LO）表达的影响。方法分离培养SD大鼠库普弗细胞,分为对照组、LPS刺激组、SST干预组;于12、24、48h收集不同实验组细胞培养上清液,硝酸还原酶法测定NO水平,ELISA法检测TNFα含量,半定量RT-PCR法检测细胞5-LO mRNA的表达。结果分离的库普弗细胞产生低水平的NO、TNFα和5-LO mRNA,LPS刺激后各时间点NO、TNFα和5-LO mRNA含量均明显高于对照组（P〈0.05）;SST干预后各时间点NO、TNFα和5-LO mRNA含量低于LPS刺激组（P〈0.05）,其中NO、TNFα含量在各时间点均高于对照组（P〈0.05）,5-LO mRNA表达在12、24h时间点高于对照组（P〈0.05）,而在48h时间点与对照组相比,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论生长抑素能抑制LPS诱导的库普弗细胞NO,TNFα和5-LO的表达。     

RNAi及其与丙型肝炎基因治疗的研究进展

RNA干扰(RNAi)是通过双链RNA被核酸酶切割形成21—25nt的干扰性小RNA,即siRNA,由siRNA介导识别并靶向切割同源性靶mRNA分子而实现的基因沉默。最近有若干将RNAi技术应用于丙型肝炎基因治疗的研究,证实其不仅对丙型肝炎病毒RNA的复制和蛋白表达具有明显抑制作用,还能通过抑制Fas基因的表达,减轻肝细胞凋亡引起的损伤。