pcDNA3．1（＋）／NspA真核表达载体的构建及鉴定

目的构建pcDNA3.1( )淋病奈瑟菌外膜蛋白—奈瑟菌表面蛋白A(Neisseria surface Protein A,NspA)基因真核表达载体,为研制淋病奈瑟菌核酸疫苗奠定基础。方法根据淋病奈瑟菌NspA基因序列,设计合成一对引物,用PCR方法从淋病奈瑟菌基因组DNA中扩增出NspA基因片段,将扩增的产物连接于测序载体pUCm-T上,并构建重组体pcDNA3.1( )/NspA,进行酶切、PCR及测序鉴定。结果NspA基因体外扩增产物大小约为525 bp。所构建的pcDNA3.1( )/NspA重组体经双酶切及PCR鉴定,与预期片断的大小相符;测序结果与GenBank中收录的NspA全长序列一致,表明pcDNA3.1( )/NspA真核表达载体构建正确。结论成功地构建了淋病奈瑟菌真核重组表达载体pcD-NA3.1( )/NspA,为NspA蛋白的功能研究和淋病奈瑟菌核酸疫苗的研制提供了物质基础。     

衡阳地区支原体临床分离株对抗生素耐药性监测

目的比较四环素类、大环内酯类和喹诺酮类三类抗菌药物对解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)的抗菌作用,为临床用药提供参考依据。方法采用直接肉汤药盘法测定了临床标本中195株Uu和118株Mh对三类抗菌药物中的8种抗生素的敏感性。结果195株Uu对四环素、多西环素、米诺环素、罗红霉素、阿齐霉素、交沙霉素、氧氟沙星、司帕沙星的敏感率分别为21.0%、48.2%、39.5%、79.0%、88.7%、74.9%、28.2%和64.6%。118株Mh对四环素、多西环素、米诺环素、罗红霉素、阿齐霉素、交沙霉素、氧氟沙星、司帕沙星的敏感率分别为5.1%、33.9%、26.3%、0.0%、0.0%、89.8%、70.3%和64.4%。960例混合感染的Uu Mh,对交沙霉素最敏感(79.2%)。结论泌尿生殖道支原体的耐药性监测对指导临床治疗具有重要意义。     

淋病奈瑟球菌表面蛋白A基因疫苗的构建及其诱导小鼠的免疫应答

目的构建淋病奈瑟球菌表面蛋白A（NspA）基因疫苗，并接种小鼠，评价其诱导的体液和细胞免疫应答。方法将NspA基因插入到真核表达载体pcDNA3．1（＋）中，构建重组真核表达质粒pcDNA3．1（＋）／NspA，并经PCR、双酶切及测序鉴定。反转录一聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学法分别检测NspA基因转染细胞后mRNA和蛋白的表达。以pcDNA3．1（＋）／NspA重组质粒免疫45只雄性BALB／c小鼠，试管凝集法检测免疫小鼠抗体滴度，ELISA检测IFN-γ水平，四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测脾淋巴细胞增殖。提取接种部位股四头肌总DNA，PCR检测BALB／c小鼠肌细胞内NspA基因。结果成功构建pcDNA3．1（＋）／NspA基因疫苗，能在真核细胞中转录和表达。pcDNA3．1（＋）／NspA免疫组的抗体滴度达1：640，pcDNA3．1（＋）和PBS免疫组均无特异性抗体检出。空载体pcDNA3．1（＋）组IFN-γ为（23．79±11．85）pg／mL，pcDNA3．1（＋）／NspA免疫组为（169．71±30．52）pg／mL（P〈0．01）；脾淋巴细胞增殖的刺激指数（SI）分别为1．05±0．30和1．94±0．74（P〈0．01）。并证实NspA基因可在小鼠肌细胞中稳定存在。结论构建淋病奈瑟球菌NspA基因疫苗，将其免疫BALB／c小鼠可诱导特异性体液和细胞免疫应答，为进一步用于淋病预防奠定了基础。     

余甘子中水溶性鞣质的抗动脉粥样硬化作用机制研究

目的在细胞水平证实中药余甘子(Phyllanthus Emblica L.)的两个可溶性鞣质成分Phy-13(beta-1-O-galloyl-3,6-(R)-hexahydroxydiphenoyl-d-glucose)和Phy-16(1,6-di-O-galloyl-beta-d-glucose)是否具有抗动脉粥样硬化作用。方法人脐动脉内皮细胞ECV-304经ox-LDL(50 mg/l)诱导,MDA试剂盒检测Phy-13和Phy-16作用后内皮细胞培养上清液中丙二醛(MDA)的水平,MTT法检测动脉血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖,细胞计数仪计数单核细胞和内皮细胞的黏附。结果Phy-13和Phy-16能减少内皮细胞MDA的生成,减少ox-LDL诱发的单核细胞和内皮细胞黏附,并能对抗ox-LDL诱导的动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖。结论Phy-13和Phy-16能够对抗ox-LDL诱导的动脉粥样硬化,这可能是余甘子治疗动脉粥样硬化相关疾病的重要机制之一。     

性高危人群泌尿生殖道支原体感染状况调查

目的探讨泌尿生殖道支原体在性高危人群中的感染状况.方法采用培养法对468例按摩妇女、95例性乱者和212例性病伴侣进行解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)的检测.结果按摩妇女、性乱者和性病伴侣泌尿生殖道支原体感染率分别为64.7%、35.8%和39.1%,与健康人群(13.5%)比较差异有显著性(x 2=162.14、20.91、37.98,P＜0.005).按摩妇女支原体感染率与性乱者和性病伴侣比较,差异有显著性(x 2=27.55、38.93,P＜0.005),性乱者和性病伴侣之间比较,差异无显著(x 2=0.31,P＞0.05).Uu感染率(21.0%)与Mh(4.1%)比较,前者明显高于后者(x 2=100.67,P＜0.005).女性支原体感染率(63.0%)明显高于男性(24.5%),差异有显著性(x 2=74.55,P＜0.005.男性Uu感染率(9.0%)与女性(24.0%)比较,女性明显高于男性(x 2=16.79,P＜0.005.Uu和Mh混合感染率(30.2%)明显高于Uu(21.0%)或Mh(4.1%)的单独感染(x 2=17.06、185.17,P＜0.005).结论 Uu和Mh在按摩妇女、性乱者和性病伴侣中流行广、感染率高,在性病的防治和监测工作中应加以重视.     

性病患者及性病高危人群解脲脲原体和人型支原体感染状况分析

目的 探讨泌尿生殖道支原体在STD患者及性病高危人群中的感染状况。方法 采用培养法对421例STD患者、84例性乱者和185例性病伴侣进行解脲脲原体（Uu）和人型支原体（Mh）的检测。结果 STD患者、性乱者和性病伴侣泌尿生殖道支原体感染率分别为42．28％、35．71％和40．0％．与健康人群（13．48％）比较，差异有显著性（X^2=56．61，19．44，38．16，P〈0．005）；前三者之间比较，差异无显著性（X^2=1．25，0．28，0．45，P〉0．05）。Uu感染率（15．22％）与Mh（5．22％）比较，前者明显高于后者（X^2=37．61，P〈0．005）。男性Uu和Mh感染率（分别为8．57％、2．08％）与女性（分别为23．61％、9．18％）比较，女性明显高于男性（X^2=29．82，17．36，P〈0．005）。Uu和Mh混合感染率（20．43％）明显高于Uu（15．22％）或Mh（5．22％）的单独感染（X^2=6．41，71．45，P值分别为P〈0．05，P〈0．005）。结论 Uu和Mh在STD患者、性乱者和性病伴侣中流行广、感染率高，在性病的防治和监测工作中应加以重视.     

淋病奈瑟菌表面蛋白A真核表达载体的构建及表达

目的构建淋病奈瑟菌外膜蛋白———奈瑟菌表面蛋白A(neisseria surface protein A,NspA)的真核表达载体并使其在真核细胞中表达。方法用PCR方法扩增NspA基因,将扩增的产物连接于测序载体pUCm-T上,并构建重组体pcDNA3.1(+)/NspA。以脂质体法转染RAW264.7和COS-7细胞,用RT-PCR检测NspA mRNA的水平,免疫组化染色法检测蛋白表达。结果扩增的目的基因包括了全段NspA基因,长度约525bp。以脂质体转染RAW264.7和COS-7细胞后,用RT-PCR和免疫组化染色法检测表明,细胞可转录和表达NspA。结论成功构建了重组真核表达载体pcD-NA3.1(+)/NspA,并在真核细胞中得到表达,为研究此蛋白的免疫原性以及淋病基因疫苗的研制提供了物质基础。     

HIV-1感染者抗病毒治疗后耐药突变与影响因素分析

目的 对河北地区治疗失败HIV-1感染者体内获得性耐药基因的突变情况进行调查，分析其影响因素。方法 收集河北省2019年1—12月抗病毒治疗后病毒载量≥1000 CPs/mL HIV-1感染者的人口社会学信息及血浆标本，通过巢式反转录聚合酶链反应扩增HIV-1 pol基因序列，将测序结果与美国斯坦福大学HIV耐药数据库比对，分析HIV-1感染者耐药基因突变情况及影响因素。结果 获得性耐药发生率为76.47%(104/136),其中94.23%(98/104)对非核苷类逆转录酶抑制剂耐药，EFV(依非韦伦)和NVP(奈韦拉平)耐药率高且多呈现高度耐药，主要突变位点为K103N、V106M和Y181C;68.26%(71/104)对核苷类逆转录酶抑制剂耐药，3TC(拉米夫定)和FTC(恩曲他滨)高度耐药最严重，主要突变位点为M184V/I。患者多选择一线药物为治疗方案(68.38%,93/136),非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTIs)和核苷类逆转录酶抑制剂(NRTIs)的耐药差异有统计学意义(P<0.05)。Logistics回归分析显示民族和传播途径是影响耐药发生的独立危险因素，...