邵阳医专2009级新生乙型病毒性肝炎普查结果分析

目的 了解我校新人学大、中专生乙型肝炎病毒感染情况,为我校的预防保健提供依据.方法 对2009级全部大、中专新生共计3486人,进行乙肝五项及肝功能测定.结果 HBsAg阳性者244人(阳性率为7%);感染模式以"大三阳"、"小三阳"为主(阳性率为25.82%、47.13%);丙氨酸转氨酶升高8例(增高率为3.28%),男女增高率有统计学差异(P<0.05).结论 应加强新生乙型肝炎病毒及丙氨酸转氨酶的检测,并采取相应的综合防治措施,以预防和控制HBV在我校内传染.     

肺炎支原体GrpE蛋白的生物信息学分析、纯化及多克隆抗体的制备北大核心CSCD

目的利用生物信息学方法分析肺炎支原体GrpE蛋白的生物学特性,纯化MpGrpE蛋白并制备多克隆抗体。方法从NCBI网站获得肺炎支原体GrpE蛋白的氨基酸序列,并将其与大肠埃希菌、结核分枝杆菌、解脲脲原体、生殖支原体、鸡毒支原体和龟支原体的GrpE蛋白进行序列比对。利用生物信息学软件分析预测MpGrpE蛋白的信号肽、跨膜区、细胞定位、磷酸化和糖基化修饰、二级结构、三级结构、B细胞表位和作蛋白等生物学特性。将重组质粒pET28a-MpGrpE转化大肠埃希菌,诱导表达后通过Ni亲和层析纯化重组MpGrpE蛋白。用重组蛋白免疫小鼠,获得抗血清并测定抗体滴度。结果MpGrpE蛋白与生殖支原体GrpE蛋白同源性为73%。MpGrpE蛋白共有217个氨基酸,分子式CHNOS,理论分子质量为24.7ku,理论等电点为7.7,为不稳定的疏水性蛋白。MpGrpE蛋白无信号肽,无跨膜区,定位在胞质。该蛋白含有8个丝氨酸、4个苏氨酸和2个酪氨酸磷酸化位点,无糖基化位点。其二级结构中α螺旋占69.12%,β折叠占8.29%,无规卷曲占18.89%,β转角占3.69%。MpGrpE蛋白83.2%的三级结构为最佳状态。MpGrpE蛋白含有4个连续的B表位和4个非线性表位。MpGrpE蛋白的的互作蛋白有DnaK、GroS、GroL等。通过Ni亲和层析获得了较高纯度的MpGrpE蛋白,用该蛋白免疫小鼠能够诱导产生IgG抗体。结论生物信息学分析MpGrpE蛋白是定位在肺炎支原体胞质的一种疏水性蛋白,克隆表达的MpGrpE蛋白具有良好的免疫原性,为肺炎支原体的致病机制以及疫苗研发提供了实验基础。     

邵阳地区肺炎支原体大环内酯类耐药株的研究

目的了解邵阳市肺炎支原体对大环内酯类抗生素耐药的情况.方法收集2009~2011年邵阳地区感染肺炎支原体的患者的Mp (Mycoplasma pneumonia)临床株,药敏实验初步筛选对大环内酯类抗生素耐药株,并通过提取耐药株DNA,PCR扩增及基因测序鉴定突变发生的情况.结果共收集134支临床肺炎支原体株,筛选出的12支临床耐药株中有4株发生了突变(占8.2﹪)突变为:A2063G,此突变在其他国家的相关研究中也经常发生.结论长期使用大环内酯类抗生素可引起Mp耐药并引起基因突变的情况发生,对此应该引起临床在用药方面的重视.     

肺炎克雷伯菌FimA的表达纯化及多克隆抗体的制备

目的表达及纯化肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)菌毛FimA蛋白并制备多克隆抗体。方法在Clustal Omega网站上比对不同细菌FimA蛋白的同源性。设计特异引物,PCR扩增肺炎克雷伯菌FimA基因,双酶切后将其连接到表达质粒pET28a,构建重组质粒pET28a-FimA。将pET28a-FimA转化表达菌BL21 star(DE3)后培养,使用IPTG诱导FimA蛋白表达。使用IEDG在线网站分析FimA蛋白的B细胞表位,然后用层析纯化的重组FimA蛋白免疫小鼠,获得免疫血清,ELISA检测IgG、IgG1、IgG2a和IgA.结果肺炎克雷伯菌的FimA与其他FimA蛋白同源性较低,为23.6%?30.6%。构建的重组质粒PET28a-FimA在大肠埃希菌中能表达21.6×10^3的重组FimA蛋白,经亲和层析后得到单一电泳条带的高纯度目的蛋白。用FimA蛋白免疫小鼠,获得高滴度的IgG和IgA,且IgG2a的A450值高于IgG1.结论成功构建了表达质粒pET28a-FimA,获得高纯度的重组蛋白FimA。FimA具有免疫原性,用该蛋白免疫小鼠获得高滴度的多克隆抗体。     

耐头孢西丁肺炎克雷伯菌AmpC酶的检测及耐药性基因分析

目的对耐头孢西丁肺炎克雷伯菌AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)进行检测及其耐药基因进行分析,探讨产AmpC酶基因对其耐药表型的影响。方法采用头孢西丁三维试验检测AmpC酶,采用双纸片确诊试验测定ESBLs,PCR扩增AmpC酶与ESBLs基因及其序列测定确定其基因型。结果 72株耐头孢西丁肺炎克雷伯菌中AmpC酶阳性有45株,阳性率为62.5%(45/72),3株为CMY-2型,43株为DHA-1型,其中在1株菌株中同时存在CMY-2和DHA-1两种基因;45株AmpC酶阳性肺炎克雷伯菌中33株检测出ESBLs,检出率为73.3%(33/45),23株携带CTX-M基因,15株携带SHV基因,19株携带TEM基因。结论 AmpC阳性肺炎克雷伯菌菌株中ESBLs检出率高,加强监测高产AmpC酶耐头孢西丁肺炎克雷伯菌,治疗相关菌感染以亚胺培南和美罗培南为首选,合并产AmpC酶和ESBLs肺炎克雷伯菌比单产AmpC酶菌株对亚胺培南和美罗培南的耐药率低。     

邵阳地区金黄色葡萄球菌临床株的耐药性分析

目的通过对金黄色葡萄球菌常用抗菌药物的耐药情况的分析,指导临床合理使用抗生素。方法应用WALKAWAY-40系统分离鉴定出326株金黄色葡萄球菌并检测β-内酰胺酶阳性和耐苯唑西林的菌株。结果β-内酰胺酶阳性金黄色葡萄球菌的分离率为95.4%,对抗生素的耐药性高于β-内酰胺酶阴性菌;耐苯唑西林的金黄色葡萄球菌分离率为70.2%,除万古霉素外对其他抗生素均为高度耐药,与苯唑西林敏感金黄色葡萄球菌比较,差异具有显著性意义(P<0.05)。结论326株金黄色葡萄球菌耐药性分析,其耐药性需引起临床医师的高度关注,应根据分离株耐药特点选用不同的治疗方案。