促甲状腺素吖啶酯化学发光免疫分析方法的建立

目的 建立一种定量检测人血清促甲状腺素(TSH)的方法.方法 根据双抗体夹心法实验原理,分别用吖啶酯和生物素标记两株不同的单克隆抗体,链霉亲和素包被微粒,通过链霉亲和素-生物素系统分离固相和液相完成检测.结果 本方法的最低检测限为0.01 μIU/mL,线性范围0.3～60μIU/mL,批内变异为1.9％ ～2.3％,总变异为6.4％ ～8.6％,与ROCHE公司的促甲状腺素检测试剂盒(电化学发光法)比对,相关系数r=0.9935.结果 本方法的各项指标均能满足临床检测的要求,可以临床推广应用.     

化学发光磁微粒免疫分析法定量检测HBsAg

摘要：目的：建立定量检测HBsAg的化学发光磁微粒免疫分析法。 方法：2株抗HBs单克隆抗体分别标记吖啶衍生物和生物素化,生物素化的抗HBs通过链霉亲合素包被到磁珠上形成致敏磁珠。将待测标本加入吖啶标记的抗HBs（吖啶-抗HBs）与致敏磁珠的体系中,形成致敏磁珠-HBsAg-吖啶标记抗HBs夹心复合物,磁性分离清洗。重复加样1次,磁性捕获分离后激发吖啶衍生物发光,用化学发光分析仪检测光强度,计算标本中HBsAg的浓度。 结果：该法线性方程为Y=0.919X+4.28,相关系数r²为0.99,线性范围为0.019 7~250.00 IU/mL。灵敏度可达0.020 7 IU/mL。0.1、3.2和40 IU/mL样本各重复测定10次的变异系数（CV）值分别为2.70%、4.40%和2.70%。与Abbott公司HBsAg定量检测试剂盒(化学发光微粒子免疫检测法) 检测40份标本浓度的线性相关方程为Y=0.980 8X+0.209 9,r²=0.99,两法结果差异无统计学意义（t=1.519,P＞0.05）。以10、50、100和200 IU/mL作为检定点,各检定点相对偏差分别为0.18%、1.50%、1.71 %和1.81%。 结论: 建立的方法有较高的灵敏度、合适的线性,同时具备良好的可重复性,与Abbott公司试剂盒检测结果高度相关。     

HCV单克隆抗体的制备及其应用的初步研究

目的:丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)感染已成为全球公认的健康难题,目前并没有很好的疫苗和特效药,尽早检出HCV感染者是实现丙型肝炎早期诊断、阻断传播的重要途径。方法:研究通过免疫Core-NS4B融合重组蛋白,制备抗HCV单克隆抗体,并获得5H5和4E7-HRP最优的抗体配对组合,检测120例血清,同时与HCV-RNA检测做比较。结果:阴性血清均未测出阳性,HCV阳性标测出23例阳性,检出率77%,HCV-RNA测出26例,检出率87%;HCV可疑标本测出15例阳性,HCV-RNA测出17例;单项ALT增高的标本测出2例阳性,HCV-RNA测出1例。结论:研究所获得的抗体能够用于HCV抗原检测,具有巨大的潜力,为建立HCV抗原检测试剂盒奠定了基础,为临床检测提供了实验依据。     

25-羟基维生素D化学发光定量免疫分析方法的建立

目的 建立一种竞争法定量检测人血清血浆中25-羟基维生素D[25-(OH)D]的免疫分析方法.方法 本研究以磁颗粒-链酶亲和素-生物素为固相分离系统,样本中加入解离剂使维生素D结合蛋白(vitamin D binding protein,VDBP)变性而使25-(OH)D游离出来,用生物素标记25-(OH)D,用吖碇酯...     

人胱抑素C基因的克隆和原核表达

目的：研究人胱抑素c（Cycstatin C,cysC）的原核重组表达及纯化。方法：通过RT-PCR扩增得到人CysC的cDNA序列,并将其构建到pET-32a（＋）的表达载体中。通过转化人BL21（DE3）表达宿主茵及表达条件的优化,摸索其最佳表达条件。通过镍柱纯化以及DEAE—sepharoseFF离子交换层析的方法纯化得到重组的人cysC蛋白。结果：通过RT-PCR扩增的方法得到的cDNA序列通过测序证明与预期一致。通过优化表达,CysC的表达水平达到了160mg／L,约占总可溶蛋白的20％,表达产物通过两步纯化后获得了纯度为95％的重组Cys C。结论：成功构建cy8C原核表达系统和蛋白纯化系统,为下一步制备多克隆抗体以及开发Cysc的免疫诊断试剂奠定了基础。     

测定癌胚抗原的吖啶酯化学发光免疫分析方法的建立

目的建立一种定量测定血清中癌胚抗原（CEA）含量的检测方法。方法根据双抗体夹心法实验原理,利用吖啶酯化学发光免疫分析技术-结合生物素-亲和素磁颗粒分离技术。结果方法的最低检测限为0.2ng/mL,线性范围为2.2~360ng/mL,批内变异为1.9%~2.2%,总变异为6.5%~8.1%,与ROCHE公司的癌胚抗原检测试剂盒（电化学发光法）测定结果的拟合方程为Y=0.9969X＋0.6168,相关系数为r=0.9921。结论本方法的各项指标均满足临床检测的要求,适合临床推广应用。     

丙型肝炎病毒抗体双抗原夹心法化学发光检测的应用

目的 探讨丙型肝炎病毒抗体双抗原夹心法化学发光检测的应用.方法 利用重组融合HCV抗原分别标记生物素及吖啶酯,建立起双抗原夹心法化学发光检测试剂盒,与间接法同时检测了866例阴性标本,440例阳性标本,3套BBI阳转血清盘.结果 双抗原夹心法与间接法灵敏度分别为100％、100％,特异性分别为99.9％、98.7％,特异性差别1.2％(95％可信区间:0.5％～2.1％),BBI阳转血清相对敏感性系数为-1.33.结论 双抗原夹心法特异性及早期感染检测能力优于间接法,将会成为丙型肝炎病毒抗体检测的主要方法.     

自制鳞状细胞癌抗原单克隆抗体芯片的临床诊断效能评价

鳞状细胞癌抗原（Squamous Cell Carcinoma Antigen，SCC），是从宫颈鳞癌组织中分离得到的糖蛋白，属于丝氨酸蛋白酶抑制剂家族，由两个相似的约45KDa的蛋白质组成，即SCC1和SCC2，两者高度同源，在食道、肺、头颈、肛门和子宫颈的鳞癌患者血清中均可检测到高水平的SCC。SCC水平监测已成为判断恶性肿瘤进展、复发或好转的辅助指标。临床上多使用酶标AGSCCEIA检测总SCC，     

人心肌肌钙蛋白Ⅰ质控品的制备及应用

目的：制备出性能稳定、均匀性良好、互通性较好，具有良好免疫反应的人心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)，可以用作cTnⅠ定量检测系统的质控品。方法：利用购自Hytest的天然复合抗原作为主要原料，使用经过处理的天然血清作为主要稀释基质，制备成质控品，同时考察该质控品的稳定性、均匀性、互通性。结果：购自Hytest的天然复合抗原与目前IFCC发布的标准参考物质SRM2921所使用的原料相同，且制备的质控品与SRM2921具有相同的免疫反应，且该质控品具有良好的稳定性、均匀性和互通性。结论：制备的冻干cTnⅠ质控品使用方便、结果稳定，可以满足室内质控和室间质评的要求，适用于cTnⅠ定量试剂盒的质量控制。