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1.
目的:研究重组杆状病毒(baculovinus)载体介导β—半乳糖苷酶基因(LacZ)对体外培养虹膜色素上皮(IPE)细胞的转染和表达情况。方法:将质粒pCMV—β中的CMV—LacZ表达盒插入杆状病毒表达栽体pFast BacI的Eco RI/Hind Ⅲ位点,构建重组质粒pBac—β,并利用Bac—to—Bac表达系统在Sf9细胞中产生出重组杆状病毒BV—β。将MOI为200的BV—β感染经酶消化加显微法分离培养的IPE细胞,24h后进行X-gal染色。在显微镜下观察IPE中LacZ表达阳性的情况,记录阳性细胞所占的百分比。结果:限制性酶切分析及测序结果表明,我们已成功构建表达质粒pBac—β及重组杆状病毒BV—β。X-gal染色证实杆状病毒介导LacZ在细胞中的表达呈蓝色,弥漫于整个胞浆。感染后24h时表达阳性率达85%。结论:重组杆状病毒可有效介导报告基因在体外培养的IPE细胞中表达,为利用杆状病毒构建可供移植的基因工程化虹膜色素上皮细胞提供了实验依据。 相似文献
2.
3.
4.
应用神经轴突示踪技术研究人类视觉神经通路胚胎发育 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 :应用神经轴突示踪方法 ,研究人类视觉神经通路在胚胎期 12w时的发育情况。方法 :取 12w胎龄的胚胎 ,浸泡在 4 %的甲醛缓冲液中固定后 ,分别在视束、上丘臂和视皮质下植入DiI染料 (DiI,1,1’ dioctadecyl 3,3,3’ ,3’ tetramethylin docarbocyanineperchlorate)。于室温下放置 4w ,待DiI晶体充分扩散后 ,根据神经轴突方向切片 ,通过共焦激光扫描显微镜观察并记录结果。结果 :大体标本观察可见到 ,视网膜神经纤维投射已到达外侧膝状体、上丘。切片观察发现 :外侧膝状体处尚未出现分层现象 ;上丘处 ,来自视网膜的神经纤维位于上丘臂的背侧 ;视皮质下已存在板层结构 ,板层内神经元呈多种形态。结论 :通过神经轴突示踪技术发现 ,12w时视网膜的神经纤维投射已经到达外侧膝状体和上丘 ,视皮质下存在板层结构。这说明人类视觉神经通路发育存在“等待期”。 相似文献
5.
碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子-β在实验性近视中的研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
bFGF(碱性成纤维细胞生长因子,basic fibmblast growth factor)和TGF-β(转化生长因子-β,transfbmling growth factor-β)是体内分布广泛、具有多种生物学功能的两种细胞因子。近年的研究发现,实验性近视发生发展过程中视网膜及巩膜的bFGF和TGF-β含量发生改变,而外源性的bFGF和TGF-β也可影响近视的形成,表明bFGF和TGF-β与近视具有密切的关系。其可能的机制为:在异常的视觉环境中,视网膜上的hFGF和TGF-β含量发生变化,作为信号,传递到巩膜,进而影响巩膜细胞的增殖及细胞外基质的降解,使巩膜重新塑形,眼轴过度延长,形成近视。本研究就这两种生长因子和近视的相关研究做一论述。 相似文献
6.
目的: 检测血管活性肠肽受体2(Vipr2)敲除小鼠多巴胺(DA)等神经递质含量和视网膜电生理, 明确Vipr2敲除对视网膜功能的影响。方法: 实验研究。利用RT-PCR检测血管活性肠肽(Vip)、Vipr2在4周龄雄性C57BL/6J小鼠眼球组织中的表达水平。通过CRISPR-Cas9基因编辑技术构建Vipr2敲除(Vipr2-KO)小鼠, 然后在4周龄时检测Vipr2-KO和Vipr2野生型(Vipr2-WT)小鼠视网膜中DA等神经递质含量及视网膜电生理功能。Vipr2-KO小鼠与Vipr2-WT小鼠DA等神经递质含量比较采用独立样本t检验, 而2种小鼠视网膜电生理数据比较采用双因素重复测量方差分析。结果: Vip和Vipr2 mRNA在小鼠视网膜、脉络膜+视网膜色素细胞、角膜和巩膜中均有表达;在虹膜和晶状体中Vipr2呈低表达, 未检测到Vip表达。与Vipr2-WT小鼠相比, Vipr2-KO小鼠表现为近视(t=2.51, P=0.017), 视网膜DA、3, 4-二羟基苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)含量均明显升高(t=3.42, P=0.001;t=2.15, P=... 相似文献
7.
采集50例乙型肝炎未并发消化道出血患者的血液和粪便标本,采用酶联免疫法检测粪便和血清中乙肝病毒标志物( HBVM ), QIAmp DNA Stool kit 试剂盒法提取粪便总DNA,巢式 PCR 定性检测粪便中乙肝病毒 DNA ( HBV-DNA),实时荧光定量PCR( FQ-PCR)定量检测血清和粪便中HBV-DNA。根据血清HBVM 阳性的不同组合(感染模式)将50例患者分成3组,粪便乙肝表面抗原( HBsAg)阳性37例,血清HBsAg阳性46例,两者检出率差异有统计学意义(P<0.05),1例血清阴性者,粪便中HBsAg阳性。 FQ-PCR定量检测血清和粪便HBV-DNA含量分别为4.35±1.49和4.50±1.59。血清HBV-DNA检测,30例阳性(60%),粪便中HBV-DNA共检测出31例阳性(62%)。 相似文献
8.
甲状腺相关性眼病研究治疗新进展 总被引:7,自引:6,他引:7
甲状腺相关性眼病(TAO)是眼眶病中最常见的疾病,大部分与甲状腺疾病相关,属于自身免疫性疾病。部分TAO有自愈倾向,尽管大多数TAO球后组织都有特征性的改变,但临床上只有30%~50%的患者出现明显眼部症状,3%~5%的患者视力累及。TAO具体的发病机制尚未明确。目前认为细胞因子,特别是TNF-α,是疾病主要的调节因子。而眼眶内成纤维细胞抗原的表达,是发病的关键因素。经过长期的临床研究,根据疾病活动性和严重程度,已经总结出相应有效的治疗方案。通过免疫学、病理学、分子生物学的研究,可以进一步明确TAO的发病机制。为指导各种有效新药物的开发,找到更合理、更有效的治疗开辟道路。 相似文献
9.
目的探讨不同浓度阿托品滴眼液对单眼形觉剥夺幼年豚鼠的屈光发育的影响,并分析阿托品抑制近视的可能作用位点和机制。方法实验研究。将80只3周龄体质量在100 g左右的豚鼠随机分至5组:单眼形觉剥夺4周组(8只)、形觉剥夺加点药同时进行4周组(每个浓度各8只)、形觉剥夺2周后再加点药2周组(每个浓度各8只)、单纯点药4周组(每个浓度各6只)、空白对照组(6只)。阿托品粉剂溶于单蒸水配制成3个浓度的阿托品滴眼液:0.2%、1.0%、3.0%。每天早上8∶30-9∶00间点药。在实验前、实验2 周、实验4 周时测量各组豚鼠屈光力、角膜曲率、眼轴长度等相关生物学参数。实验4周结束后取豚鼠眼视网膜做冰冻切片,免疫荧光法标记豚鼠视网膜上表达胰高血糖素的细胞。采用配对样本t检验和重复测量的双因素方差分析进行数据分析。结果单纯形觉剥夺组,实验2周后实验眼屈光度较自身对照眼往近视方向发展,同时伴有玻璃体腔加深、眼轴延长,差异有统计学意义(t=-11.09、7.89、3.73,P<0.05);4周后,差异更显著。形觉剥夺加点药同时进行的3个浓度组,实验2周后实验眼与自身对照眼的各屈光参数差异均无统计学意义,而2眼差值与单纯剥夺组比较,屈光度、玻璃体腔深度、眼轴长度差异均有统计学意义(F=26.335、6.479、6.910,P<0.05);4周后,3个浓度组实验眼屈光度与自身对照眼比较均开始往近视方向发展,差异有统计学意义(t=-4.67、-7.54、-2.78,P<0.05),同时玻璃体腔加深,眼轴延长,而2眼差值与单纯剥夺组比较,各屈光参数的差异仍有统计学意义(F=16.962、5.193、6.882,P<0.05);但3个浓度组的组间两两比较显示,各参数实验前后差异无统计学意义。形觉剥夺2周后再加点药2周组,实验4周后各浓度组2眼差值与单纯剥夺4周组比较,各屈光参数差异均无统计学意义。各组豚鼠视网膜上均未标记出胰高血糖素表达阳性的细胞。结论在3%的浓度范围内,阿托品滴眼液能通过抑制玻璃体腔加深、眼轴延长从而部分抑制豚鼠形觉剥夺性近视的发生,且作用效果没有明显的浓度依赖性。但在近视形成后运用阿托品,并不能抑制近视的进展。胰高血糖素能途径没有参与阿托品对豚鼠近视发生发展的作用过程。 相似文献
10.
目的对两个中国Leber遗传性视神经病变(Leber’shereditary optic neuropathy,LHON)家系的临床和分子遗传学特征进行分析。方法眼科临床检查发现在这两个家系中只有先证者1人出现视力障碍,发病年龄分别为10岁和17岁。对这两个家系先证者使用24对有部分重叠的引物进行线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)全序列扩增分析。结果没有发现mtDNAG11778A、G3460A和T14484C3个常见的突变位点,而发现了与LHON相关的ND4G11196A同质性突变位点的存在,在167名正常对照只发现1例G11696A突变。结论线粒体DNA全序列分析发现两个家系呈现独特的mtDNA多态性,都属于东亚单体型D4。不完全外显率和正常对照频率(1/167)表明G11696A突变本身不足以导致LHON的发生,说明其它因素在这两个LHON家系的表型表达中也起一定的作用。在这些家系mtDNA中缺乏影响重要功能突变位点的存在,排除了线粒体背景对LHON临床表型的影响。因此,核修饰基因、环境因素可能对两个中国G11696A突变家系的外显率和发病严重程度起促进作用。 相似文献