盆腔纤维瘤患者术后免疫学炎症指标的变化及意义

目的:探索盆腔纤维瘤手术对患者炎症反应以及免疫功能的影响。方法:收集2006年1月至2018年1月郑州大学第二附属医院收治的经手术治疗的盆腔纤维瘤患者22例,测定术前及术后1 d、3 d、7 d的血清白介素(IL)–6,肿瘤坏死因子(TNF)–α及C反应蛋白(CRP)水平。应用流式细胞仪手段来测定T淋巴细胞亚群CD8+、CD4+、CD3+,计算CD4+/CD8+比值。结果:患者术后24 h IL–6、TNF–α、CRP水平显著高于术前,CD3+、CD4+、CD8+,CD4+/CD8+显著低于术前,术后72 h炎症及免疫指标变化程度减轻,但较术前仍有统计学差异,术后7 d接近术前水平。术后炎症及免疫水平的变化程度与出血量明显相关,且出现严重并发症的病例上述指标变化最为明显。结论:盆腔纤维瘤患者术后短期内免疫水平有所降低,炎症水平升高,免疫及炎症水平的变化程度可能与并发症严重程度有关。     

整合素β1阳性卵巢癌细胞具干细胞样属性和间质属性分析

目的:检测和分选人卵巢癌细胞系SKOV3及原代卵巢癌细胞中整合素β1(ITGβ1)阳性细胞,鉴定其是否具有肿瘤干细胞生物学特性。方法:从临床卵巢癌患者腹水中成功分离卵巢癌细胞后,采用流式细胞技术检测SKOV3及原代卵巢癌细胞中ITGβ1和干细胞标志CD133的阳性率;流式分选得到ITGβ1(+)和ITGβ1(-)两群细胞后,采用qRT-PCR比较卵巢癌干细胞相关基因(CD44、CD133、ALDH1、OCT)及上皮间质化(EMT)分子(E-cadherin、N-cadherin、Vimentine、MMP2、MMP9)表达情况,采用悬浮成球试验观察两者干细胞潜能。最后通过免疫缺陷小鼠体内的有限稀释成瘤试验对比ITGβ1(+)/ITGβ1(-)细胞的成瘤能力、自我更新和自我分化能力。结果:SKOV3细胞中可检测到少量的CD133(+)细胞,其比率为(0.91±0.12)%,腹水原代细胞中CD133(+)比率为(2.38±0.34)%;ITGβ1检测SKOV3中ITGβ1(+)比率为(1.95±0.24)%,原代卵巢癌细胞中含量为(3.78±0.28)%;流式分选得到的ITGβ1(+)细胞较ITGβ1(-)细胞表达更高的干细胞基因(CD133、CD44、ALDH1、OCT4)(P<0.05)、更低的上皮标志E-cadherin(P<0.05)和更高的间质标志(N-cadherin、Vimentine、MMP2、MMP9)(P<0.05);悬浮成球试验结果显示:SKOV3细胞和原代卵巢癌细胞中ITGβ1(+)细胞较ITGβ1(-)细胞成球数量明显增多,球体体积也明显大于ITGβ1(-)细胞(P<0.05);体内成瘤试验结果显示:在SKOV3细胞系或原代卵巢癌细胞中102个ITGβ1(+)细胞即可成瘤,成瘤比率分别为1/5和2/5,成瘤时间分别为64天和54天;而至少需要104个ITGβ1(-)细胞SKOV3细胞系才有成瘤现象,至少需要103个ITGβ(-)细胞原代卵巢癌细胞才有成瘤现象,成瘤比率均为1/5,成瘤时间分别为78天和68天;ITGβ1(+)细胞的成瘤能力至少为ITGβ1(-)细胞的100倍。结论:卵巢癌细胞中ITGβ1(+)细胞高表达间质属性和干细胞基因,具备自我分化、自我更新和体内成瘤能力,ITGβ1(+)表型可考虑作为分选卵巢癌干细胞的新方法。     

长链非编码RNA MEG3靶向Rac1抑制宫颈癌细胞增殖、迁移的实验研究

目的 检测长链非编码RNA MEG3在宫颈癌细胞中的表达，检测MEG3表达对HeLa细胞增殖、迁移的影响及可能分子机制。方法 采用荧光定量PCR（QPCR）检测正常宫颈上皮细胞HcerEpic和宫颈癌细胞系C-33A、C4-1、Caski、SiHa和HeLa中MEG3的表达； MEG3过表达质粒（MEG3）、阴性对照质粒（NC组）、MEG3+Rac1过表达质粒（MEG3+Rac1组）分别转染HeLa细胞，MTT法检测细胞增殖情况， Transwell实验检测细胞迁移能力，Western blotting检测PCNA、E-cadenin、N-cadenin、Vimentin、Rac1 蛋白表达。结果 QPCR结果显示，C-33A、C4-1、Caski、SiHa和HeLa细胞中MEG3表达水平分别为0.37±0.044、0.65±0.075、0.41±0.071、0.71±0.053和0.42±0.081，均低于HcerEpic细胞的1.02±0.064，差异具有统计学意义（P＜0.05）。MTT法结果显示MEG3组HeLa细胞增殖活力显著低于NC组； MEG3组的迁移细胞数为385±14，显著低于NC组的594±16（P＜0.05）；与NC组比较，MEG3组PCNA、N-cadenin和Vimentin表达下调，E-cadenin表达上调。与MEG3组比较，MEG3+Rac1组显著上调Rac1蛋白表达，上调HeLa细胞增殖活力，增加迁移细胞数。结论 LncRNA MEG3可能通过靶向Rac1信号通路抑制宫颈癌细胞增殖、迁移。     

内质网功能状态对卵巢癌细胞顺铂敏感度的影响

目的 探讨内质网应激（endoplasmic reticulum stress, ERS）功能状态对卵巢癌细胞顺铂（DDP）敏感度的影响。方法 卵巢癌细胞系SKOV3接受40 μmol/L DDP处理24 h后, qRT-PCR检测ERS相关基因改变;同时内质网示踪染料（ER-tracker）观察内质网形态变化;分别用ERS稳定剂牛磺熊去氧胆酸钠（tauroursodeoxycholate, TUDCA）或ERS诱导剂毒胡萝卜素（thapsigargin, TG）预处理SKOV3,再接受DDP处理,应用流式细胞术检测细胞凋亡率;应用Western blot法检测内质网应激相关蛋白GRP78和CHOP是否表达;从临床卵巢癌患者腹水中分离与培养原代卵巢癌细胞后,采用流式细胞术比较TUDCA及TG预处理对原代卵巢癌细胞DDP敏感度影响,Western blot法检测凋亡相关蛋白PARP和Caspase-3的变化。结果 顺铂处理卵巢癌细胞系SKOV3后能够引起明显的ERS,ERS相关蛋白明显上调,内质网形态呈现颗粒化;TUDCA可以显著下调DDP引起的杀伤作用（P<0.05）,显著降低GRP78和CHOP蛋白水平;TG可以显著上调DDP引起的杀伤作用（P<0.05）、GRP78和CHOP蛋白水平;在卵巢癌腹水原代细胞中TUDCA亦可显著抑制DDP引起的杀伤作用（P<0.05）,TG亦可显著上调DDP引起的杀伤作用（P<0.05）。结论 改变ERS的功能状态能够影响卵巢癌细胞对顺铂的敏感度。     

卵巢癌患者血清miR-210、miR-126与临床病理特征及预后关系探讨

目的:研究卵巢癌患者血清微小RNA-210(miR-210)和微小RNA-126(miR-126)表达水平及其与患者临床病理特征及预后的关系。方法:选取102例本院确诊的卵巢癌患者作为观察组,另选取同期本院健康体检的女性志愿者102例为对照组。采用qRT-PCR法检测两组血清miR-210、miR-126相对表达量,根据检测中位值将miR-210、miR-126分为高表达组与低表达组,观察其与患者临床病理特征的关系,受试者工作特征曲线(ROC)法分析miR-210、miR-126表达对卵巢癌的预测价值,Kaplan-Meier分析卵巢癌患者生存,logistic多元回归分析影响卵巢癌发生的危险因素。结果:与对照组相比,观察组血清miR-210表达水平升高,miR-126表达水平降低(P0.05);miR-210、miR-126均与患者淋巴结转移、FIGO分期、分化程度及糖类抗原125水平相关,且miR-210与组织类型相关(P0.05);miR-210、miR-126的曲线下面积分别为0.789、0.836,敏感度分别为96.6%、67.8%,特异度分别为51.2%、95.4%;miR-210低表达组无生存进展期(PFS)、总体生存时间(OS)均高于高表达组,miR-126高表达组PFS、OS均高于低表达组(P0.05);miR-210、miR-126均为影响卵巢癌发生的独立危险因素。结论:卵巢癌患者的血清miR-210上调表达, miR-126下调表达,均与卵巢癌发生发展有关,均可能作为临床诊断、监测病情及评估预后的重要指标。     

CD90作为卵巢癌干细胞标志物的相关研究

目的 研究 CD90 作为分选卵巢癌干细胞标志物的可行性。方法 选择笔者实验室制备的人卵巢癌顺铂耐药细胞株 SKOV3-MD3,采用 CD90 单抗染色,应用流式细胞仪分选获得 CD90⁺ 细胞及 CD90-细胞。体外实验检测两个不同亚群细胞的体外悬浮球形成能力(自我更新能力)、分化潜能、表达干细胞标志物的差异,体内动物实验检测不同亚群细胞皮下成瘤能力是否有差异。结果 人卵巢癌细胞 SKOV3-MD3 中存在具有干性特征的 CD90⁺ 细胞,CD90⁺ 细胞比CD90- 细胞具有更高的体外悬浮球形成能力(自我更新能力)及分化潜能,表达更高水平的干细胞标志物,以及具有更强的皮下成瘤能力,差异有统计学意义。结论 CD90 可能是分选卵巢癌干细胞的分子学标志物。