δ-氨基乙酰丙酸脱水酶基因多态性对职业铅接触工人血铅和锌原卟啉的影响

[目的 ]研究δ 氨基乙酰丙酸脱水酶 (ALAD)基因多态性对职业铅接触工人血铅 (PbB)和锌原卟啉 (ZPP)的影响。 [方法 ]采集 170名上海市某蓄电池厂职业铅接触工人外周静脉血样 ,多聚酶链式反应 (PCR)和限制性内切酶 (MspⅠ )限制性片段长度多态性 (RFLP)方法进行ALAD基因分型分析 ,用PE 80 0型原子吸收分光光度计和ZPP 3 80 0型血液锌原卟啉测定仪分别测定PbB和ZPP含量 ,并分析其与基因型的关系。 [结果 ]①ALAD11纯合子基因型者有 15 4名 ,占90 5 9% ;ALAD12杂合子基因型者有 16名 ,占 9.41% ;未检出ALAD2 2纯合子基因型者 ;②ALAD1和ALAD2等位基因分布频率分别是 95 .2 9%和 4.71% ;③在同等外暴露条件下 ,ALAD12杂合子基因型组工人血铅水平 ( 1.0 4± 0 .48μmol/L)明显高于ALAD11纯合子基因型组工人血铅水平 ( 0 .78± 0 .3 4μmol/L) ,且差异有统计学意义 ;④ALAD12基因型工人锌原卟啉(ZPP)含量比ALAD11基因型者稍低 ,但差异没有统计学意义 ,前者为 ( 0 .42± 0 .2 4) μmol/L ,后者为 ( 0 .46± 0 .41) μmol/L。[结论 ]ALAD2等位基因频率与文献报道的亚洲人群的结果相近 ,符合Hardy Weinberg平衡 ,在同样职业铅暴露环境下 ,具有ALAD2等位基因的工人血铅水平增高 ,ALAD2等位基因可加重工人体内的铅     

放射性配体受体结合实验方法介绍

放射性配体受体结合(Radioligand receptor bindingassays,RRA)实验广泛用于测定受体的密度和亲和力,但是对初学者来说,要在本实验室建立RRA系统时,由于没有关于实验实际操作方面详细的介绍而倍感苦恼,现根据我们实验室多年的经验,将部分内容方法操作步骤报道如下,以供同行参考     

063 有机磷酸酯类化合物暴露对神经行为功能的影响

由于有机磷农药的长期广泛使用,使得有机磷暴露可能引起的长期健康效应越来越受到人们关注.在神经发育时期接触有机磷化合物、急性有机磷中毒或者长期低剂量接触有机磷都可能通过胆碱能毒作用机制和非胆碱能毒作用机制引起动物神经行为功能的长期改变.     

乐果亚慢性染毒对大鼠谷氨酸递质系统和学习记忆的影响

目的探讨有机磷农药乐果亚慢性染毒对大鼠学习记忆功能的影响及对中枢兴奋性氨基酸神经递质系统的可能作用。方法48只成年雄性SD大鼠随机分成4组，每组12只。对3个实验组以乐果经口灌胃（5、10和20mg／kg），每周5d，每天1次，共13周；对照组给予等体积的生理盐水。染毒结束，每组随机取6只大鼠在Morris水迷宫中检测动物学习记忆功能的改变情况；其余大鼠断头处死进行生化测定。使用硫代乙酰胆碱一二硫代双硝基甲酸（Asch．DTNB）法测定海马中乙酰胆碱酯酶（AChE）活力；用反相高效液相色谱荧光法测定海马中谷氨酸含量；用配体受体结合实验测定N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA）受体的Bmax和Kd值。结果大鼠定位航行实验中，随着训练期的增加，各组动物逃避潜伏期明显缩短；中、高剂量乐果染毒组的潜伏期比对照组长，差异有统计学意义（P〈0．05）。空间探索实验中，高剂量组与对照组相比，穿越平台位置的次数明显减少，差异有统计学意义（P〈0．05）。动物染毒后，低、中、高染毒组大鼠海马AChE活力分别为对照组的77．9％、62．8％和42．1％，差异有统计学意义，存在剂量一效应关系（P〈0．01）。中、高剂量组大鼠海马分区谷氨酸含量与对照组相比增加134．5％、132．9％．差异有统计学意义（P〈0．05）；中、高剂量组NMDA受体Bmax值与对照组相比降低21．2％、23．2％，差异有统计学意义（P〈0．05）；各剂量组受体Kd值增加22．2％-33．1％，且高剂量组与对照组比较，差异均有统计学意义（P〈O．05）。大鼠的空间记忆能力下降与海马中NMDA受体的亲和力下降在统计学上有相关关系（P〈O．05）。结论乐果亚慢性染毒可引起大鼠中枢兴奋性氨基酸神经递质含量及NMDA受体密度和亲和力的改变，并在降低大鼠的学习记忆功能中可能发挥一定的作用。     

乐果对大鼠皮层神经元氧化损伤及兴奋性氨基酸递质含量的影响

目的 观察乐果染毒对原代培养的大鼠皮层神经元的的毒性作用及损伤机制.方法 体外原代培养SD大鼠皮层神经元6 d后,加入终浓度为1、5、10、50、100 μmol/L的乐果,于染毒后48 h收获细胞,取匀浆上清液用于氧化损伤及细胞内兴奋性氨基酸递质的测定,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 染毒48 h后,乐果浓度在5、10、50、100 μmol/L时,超氧化物歧化酶(SOD)活力[(1.04±0.02)、(0.99±0.02)、(0.96±0.02)、(0.91±0.02)U/mg pro]即明显降低,谷胱甘肽(GSH)含量[(219.35±6.79)、(205.6±6.29)、(194.06±2.63)、(93.68±7.56)mg/g pro]明显降低,丙二醛(MDA)含量[(21.22±0.29)、(24.01±0.34)、(27.15±1.02)、(32.91±1.39)nmol/mg pro]明显升高,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);10、50、100 μmol/L剂量组天冬氨酸含量明显升高,1、5、10、50、100μmol/L剂量组谷氨酸含鼍明显升高,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);1、10、100 μmol/L染毒组乐果对神经无细胞凋亡影响明显.乐果染毒后,神经元内MDA含量与兴奋性氨基酸(天冬氨酸、谷氨酸)含量呈正相关,相关系数分别为0.937和0.759;而与GSH含量呈负相关,相关系数分别为-0.868和-0.801,有统计学意义(P<0.01).结论 乐果可引起神经元氧化损伤及兴奋性氨基酸递质含量变化,共同参与神经元的凋亡过程.     

有机磷酸酯类化合物暴露对神经行为功能的影响

由于有机磷农药的长期广泛使用,使得有机磷暴露可能引起的长期健康效应越来越受到人们关注。在神经发育时期接触有机磷化合物、急性有机磷中毒或者长期低剂量接触有机磷都可能通过胆碱能毒作用机制和非胆碱能毒作用机制引起动物神经行为功能的长期改变。     

乐果对大鼠纹状体和血清中多巴胺-β-羟化酶活性的影响

 目的 观察乐果染毒对大鼠大脑纹状体和血清中多巴胺-β-羟化酶(dopamine-β hydroxylases,DβH) 活性变化的影响,对乐果中毒机制作进一步的探讨。方法 56只雄性SD大鼠随机分为对照组(生理盐水,n=8)和乐果染毒低(38.9 mg/kg,n=8)、中(83.7 mg/kg,n=8)和高(180 mg/kg,n=32)3个剂量组,腹腔一次注射染毒。高剂量组大鼠分别在给药后0.5、2、8、24 h断头处死取血制备血清待测,并分离脑组织纹状体,生理盐水匀浆待测。其他组动物在给药后2 h断头处死,同样方式取样供分析。利用DβH将酪胺代谢为真蛸胺原理检测DβH活性。另取正常大鼠血清和纹状体匀浆,体外乐果染毒,观察其对DβH抑制状况。结果 给予不同剂量乐果对大鼠纹状体和血清DβH活性均有抑制作用,并随剂量增加而加深,存在剂量 效应关系(r=-0.996 7, P<0.05)。乐果高剂量(180 mg/kg)染毒后大鼠大脑纹状体和血清中DβH活性与对照组相比,在不同时程观察点差异均有统计学意义(P<0.05),随时程增加抑制也加深,24 h内时程效应关系(P<0.05)明确。体外乐果对纹状体和血清DβH活性均有抑制作用,并随剂量增加而加深,有剂量 效应关系(r=-0.891 2, P<0.05),但在高浓度有饱和现象。结论 大鼠大脑纹状体和血清中DβH水平有随染毒剂量和时程的增加而抑制加深的趋势,存在剂量效应和时程效应关系。     

亚急性乐果染毒对自发性高血压大鼠心血管系统的影响

[目的]观察14d乐果染毒对自发性高血压大鼠(SHR)心血管系统的影响,探讨钙离子稳态在该影响中的作用。[方法]雄性SHR,灌胃染毒,染毒剂量分别为0、12.5、25和50mg/kg,每天1次,连续14d。尾袖法测定大鼠血压,第15天处死动物,无机磷酸根法和RT-PCR检测酶活力和基因表达。[结果]25mg/kg以下乐果染毒大鼠血压升高,当剂量达到50mg/kg,大鼠血压没有显著升高的变化。染毒结束后,25mg/kg染毒组大鼠心肌Ca2 -ATPase活力显著升高,达到(2.32±0.33)μmolPi/(mg蛋白·h);50mg/kg组大鼠心肌Ca2 ATPase活力和Na -K -ATPase均显著升高,分别为(2.36±0.62)和(2.74±0.52)μmolPi/(mg蛋白·h)。Ca2 -ATPase基因表达随染毒剂量的增加而逐渐上调,剂量>25mg/kg时,表达值为(1.24±0.11),差异有显著性(P<0.05);50mg/kg乐果可诱导兰尼碱受体(RyR)的mRNA表达显著高于对照组(P<0.05),表达值分别为(1.49±0.27)和(0.96±0.16)。[结论]乐果引起自发性高血压大鼠血压的变化规律与接触剂量有关,一定剂量范围的可以升高。钙离子的代谢紊乱可能是乐果引起的心血管毒作用的机制之一。     

有机磷农药接触工人酯酶活力特征及基因多态对酶活力的影响

目的 研究接触有机磷农药对丁酰胆碱酯酶（BchE）、羧酸酯酶（CarbE）、对氧磷酶（PonE）和乙酰胆碱酯酶（AChE）活力的影响,并探讨酯酶基因多态性对长期接触有机磷农药工人酯酶活力的影响.方法 241名长期接触有机磷农药的生产工人为直接接触组,151名农药厂后勤人员为间接接触组,160名无有机磷农药接触的外厂工人为对照组.检测各组4种酯酶活力;用ABI 7900基因序列检测系统和基因芯片技术确定PON192、PON55和BchE基因型.结果对照组CarbE、BchE和PonE活力无年龄、性别差异.直接接触组、间接接触组的CarbE和BchE活力均明显低于对照组;直接接触组PonE活力明显低于对照组;直接接触组AChE活力明显低于间接接触组,差异均有统计学意义（P＜0.01）.直接接触组BchE基因型（UU、UK、KK）频率分别为74.3%、24.1%和1.6%;等位基因频率BCHE＊U=0.863、BCHE＊K=0.137.PON192基因型（AA,AB,BB）频率分别为15.0%、45.5%和39.5%;等位基因频率PON＊A=0.378、PON＊B=0.622.PON55基因型（MM、LM、LL）频率分别为96.2%、3.8%和0%;等位基因频率PON＊M=0.981、PON＊L=0.019.PON192和PON55不同基因型PonE活力差异有统计学意义（P＜0.01和P＜0.05）.结论 长期接触有机磷农药在不同程度上抑制4种酯酶的活力,PON192和PON55基因多态性影响有机磷接触工人PonE活力.     

高效液相色谱法测定多巴胺-β-羟化酶活性

目的 建立一种通过高效液相色谱法测定酶促反应的产物真蛸胺(Octopamine)的量来确定大鼠血清及脑组织中多巴胺-β-羟化酶活性的方法.方法 采用ODS柱,流动相为缓冲液(0.02 mol/L柠檬酸三钠和0.05 mol/L磷酸氢二钠) ∶甲醇=85 ∶ 15的溶液,流速1.0 mL/min.结果 待测物真蛸胺标准溶液的保留时间和峰面积的RSD分别在0.29～0.67之间和0.09～0.36之间,重现性好;回收率在85.3%～95.4%之间,检测限1.58 pmol/mL;真蛸胺的线性范围在10～160 pmol/mL之间,相关系数为0.999 6.结论 该方法为神经毒理学、药理学等研究提供了一个简单灵敏、稳定可靠的方法.