一起小规模群体肺炎链球菌感染流行的报告

目的明确一次小规模不明原因发热疫情的病因。方法常规提取6例发热患者和11例密切接触者咽拭子DNA和RNA,采用荧光定量PCR法检测15种病原体,取扩增产物进行测序鉴定,并与常规培养结果比对;采用荚膜肿胀试验检测肺炎链球菌血清型。结果在17例咽拭子中培养出肺炎链球菌阳性11例(64.7%),血清型鉴定为6群6A型,未分离到其他病原菌;在17例咽拭子标本中,检出13例(76.5%)肺炎链球菌DNA阳性2,例(11.8%)嗜肺军团菌DNA阳性,3例(17.6%)肺炎支原体阳性,1例(5.9%)乙型流感病毒RNA阳性;在其中5例中3,例肺炎链球菌与肺炎支原体同时阳性,1例肺炎链球菌与乙型流感病毒同时阳性,另1例密切接触者同时检出肺炎链球菌与嗜肺军团菌;对所有CT值小于35的咽拭子DNA经普通PCR扩增后测序,并经NCBI基因库比对,结果与相应病原体的基因组序列相符。结论肺炎链球菌为引起此次疫情流行的主要病因。     

尿酸氧化酶的表达纯化及活性形式鉴定

目的:在大肠杆菌内表达具有活性的黄曲霉尿酸氧化酶。方法:用重叠PCR从黄曲霉(Aspergillusflavus)3.1398中钓取了尿酸氧化酶(urateoxidase,UO,EC1.7.3.3)基因,克隆到原核表达载体pET22b中,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选到高表达的重组转化子菌株。经乳糖诱导目的蛋白表达,阴离子交换柱纯化,获得纯品。SDS PAGE分析样品纯度。用尿酸缓冲液测定酶活性,用戊二醛交联结合质谱法测定相对分子质量。结果:目的蛋白为胞内可溶性表达,表达量达菌体总蛋白的35%,纯化后的样品纯度达99%,其酶比活力可达35U/mg。经质谱测定重组UO单体的相对分子质量为34×103。交联后相对分子质量为160×103。结论:黄曲霉尿酸氧化酶可在大肠杆菌中可溶表达,并具有活性,其活性形式为四聚体。     

新兵急性呼吸道疾病病原体检测结果分析

目的调查入伍新兵急性呼吸道疾病的常见病原体,为预防控制呼吸道传染病提供科学依据。方法留取40例老兵、204例新兵和40例急性呼吸道疾病新兵咽拭子,提取DNA和RNA,检测15种病原体的核酸,并留取急性呼吸道疾病新兵双份血清检测抗病原体抗体。结果老兵组咽拭子流感病毒、肺炎支原体和肺炎链球菌核酸的检出率分别为32.5%、25.0%和15.0%,高于新兵组的2.5%、2.5%和2.9%(P<0.05);在40例散发的患有急性呼吸道疾病的新兵中,甲型和乙型流感病毒核酸阳性率分别为5.0%和55.0%,肺炎支原体、肺炎链球菌和嗜肺军团菌的阳性率分别为20.0%、7.5%和15.0%,与老兵组(分别为25.0%、15.0%和17.5%)或新兵入营时(分别为2.5%、2.9%和7.4%)相比,差异均无统计学意义(均有P>0.05);对患有急性呼吸道疾病的新兵急性期和恢复期双份血清检测发现,乙型流感病毒感染发生率为65.0%(26/40),甲型流感病毒感染率为5.0%(2/40),无甲型流感病毒H5N1等感染病例发生。结论入伍新兵在入训期间散发的急性呼吸道疾病以流感病毒感染为主。     

一起青年学员急性传染性肺炎暴发的病因学探究

目的从血清学和基因水平探究一起青年学员急性传染性肺炎暴发的病因。方法采用ELISA法检测常见呼吸道病原体抗体;提取血清DNA/RNA,采用PCR法检测病原体核酸;采用非选择性高通量扩增测序法直接查找病原体核酸,对扩增产物通过Solexa分析系统直接测序分析。结果在71例患者的急性期和恢复期血清中检测到抗肺炎支原体IgM和/或IgG阳性,能诊断肺炎支原体感染者16例(22.5%);特异性检测甲、乙型流感病毒和支原体核酸均阴性;在非选择性扩增出的582750条带中,未见特征病毒序列出现;与限定物种数据库比对,不存在人流感病毒A型、肺炎支原体和鼻病毒等呼吸道相关病原体的基因片段。结论利用血清学和分子生物学手段未能明确本次疫情的病因,与在疫情早期未能收集到呼吸道分泌物标本有一定的关系。     

骨保护素的研究进展

骨保护素(osteoprotegerin，OPG)是1997年发现的肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)受体家族的新成员，也称破骨细胞抑制因子(osteoclast inhibitory factor，OCIF)或称为树枝状细胞受体1(dendritic cell derived receptor-1，FDCR-1)，它是骨代谢一个重要的负调控因子。OPG是核因子KB受体活化因子(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand，RANKL)、     

某部2008-2010年入伍新兵急性呼吸道疾病发病情况调查

目的 调查某部入伍新兵急性呼吸道疾病(ARD)的发病率及常见的感染病因.方法 收集某部2008-2010年入伍新兵的咽拭子及外周静脉血标本,采用荧光定量PCR法检测15种呼吸道疾病常见病原体;采用间接免疫荧光法检测抗嗜肺军团菌抗体;采用ELISA法检测血清抗肺炎支原体-IgM和IgG及抗流感病毒抗体.结果 182名20...     

15种呼吸道病原体的实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

目的 建立15种呼吸道常见病原体的实时荧光定量PCR检测方法,用于新兵发热病因的快速检测.方法 根据生物信息学分析结果选定15种常见呼吸道病原体的检测靶基因,建立实时荧光定量PCR方法.采用15种病原体的培养物和正常人的基因组对检测方法的敏感性和特异性进行测试,并对健康和发热新兵各50例的咽拭子进行检测.结果 所建立的荧光定量PCR方法的有效检测线性范围为1×102～1×109拷贝/ml,最低检测限为5～50拷贝/ml,敏感性和特异性均较高.在50例发热新兵咽拭子中,24.0%嗜肺军团菌阳性,30.0%乙型流感病毒阳性,24.0%肺炎支原体阳性,8.0%甲型流感病毒阳性,对照组上述病原的阳性率依次为20.0%、6.0%(P<0.05)、22.0%和0.0%,而腺病毒、麻疹病毒、SARS相关冠状病毒、人冠状病毒、流行性腮腺炎病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒H5N1、风疹病毒、猪链球菌、肺炎衣原体和肺炎链球菌均阴性.18例(36%)流感病毒感染者急性期血清IgM和IgG阳性率分别为88.9%(16/18)和72.2%(13/18),在恢复期则分别为16.8%(3/18)和100%(18/18).健康新兵的两次血清抗体检测无临床意义.在咽拭子嗜肺军团菌及肺炎支原体阳性个体,发热期和恢复期血清抗体阳性率分别为8.3%和8.3%、&3%和16.7%.结论 成功建立可同时进行15种呼吸道病原体早期诊断的实时荧光定量PCR方法,该方法检测结果表明此次新兵营集训新兵发热病因以流感病毒感染为主.