氯化镉引起线粒体分裂诱导小鼠精母细胞GC-2 spd凋亡

目的探讨镉诱导小鼠精母细胞(GC-2 spd)凋亡的作用机制。方法于2021年3月, 分别用5和10 μmol/L氯化镉(CdCl2)染毒GC-2 spd细胞24 h, 分别为CdCl2 5 μmol/L染毒组(CdCl2低剂量组)和CdCl2 10 μmol/L染毒组(CdCl2高剂量组), 以未染毒的GC-2 spd细胞作为对照组。采用Mito-Track Red CMXRos线粒体荧光探针染色细胞检测线粒体形态, 流式细胞术结合JC-1荧光探针检测线粒体膜电位的变化;使用细胞线粒体分离试剂盒和RIPA裂解液分别提取GC-2 spd细胞的线粒体蛋白、细胞浆蛋白和细胞总蛋白, Western blot检测线粒体稳态调节蛋白[分裂蛋白(FIS1)和融合蛋白(OPA1)]及细胞凋亡相关蛋白(Cytochrome c和cleaved Caspase-3)的表达。结果与对照组细胞比较, CdCl2低剂量组和高剂量组细胞中JC-1红色/绿色荧光信号相对比值均明显降低(0.740±0.071、0.570±0.028), 差异有统计学意义(P=0.017、0.004);线粒体形态由长管状变为点状,...     

SPAG6促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨抑制精子相关抗原6（sperm-associated antigen 6,SPAG6）对卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:体外培养正常卵巢上皮细胞（NOE-71）和卵巢癌细胞（SKOV-3、OVCAR-3）,采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）实验检测细胞中SPAG6基因的表达。将4种潜在抑制SPAG6基因表达的“SPAG6-shRNA”质粒分别转染到SKOV-3细胞,RT-qPCR和Western blot实验筛选有效抑制SPAG6基因表达的细胞株;采用细胞计数法和平板克隆实验检测抑制SPAG6基因表达对卵巢癌细胞增殖的影响;运用细胞划痕实验和Transwell实验检测抑制SPAG6基因表达对细胞迁移和侵袭能力的影响;流式细胞实验检测抑制SPAG6基因表达对细胞周期的影响;免疫荧光实验和Western blot检测在SKOV-3细胞中抑制SPAG6表达对p27kip1分布的影响。结果:SPAG6基因在卵巢癌细胞SKOV-3和OVCAR-3中的表达均显著高于正常卵巢上皮细胞NOE-71,且在SKOV-3细胞中表达最强。RT-qPCR和Western blot实验显示2种“SPAG6-shRNA”质粒能够有效抑制SKOV-3细胞中SPAG6基因的表达;与对照组细胞相比,抑制SPAG6基因表达能够降低SKOV-3细胞的增殖,差异有统计学意义（P＜0.01）;平板克隆实验显示抑制SPAG6基因表达能降低SKOV-3细胞的克隆形成率,差异有统计学意义（P＜0.01）;细胞划痕实验和Transwell实验显示抑制SPAG6基因表达能够降低卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力（P＜0.01）;流式细胞实验显示抑制SPAG6基因表达能使细胞G0/G1期显著上调,S期显著下调(P＜0.01)。SKOV-3细胞中抑制SPAG6表达可降低细胞质中p27kip1的水平而增加细胞核中p27kip1的水平。结论:SPAG6促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

Spag6L基因表达抑制对小鼠精母细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨Spag6L基因在小鼠精子发生中的表达情况以及抑制其表达对GC-2 spd精母细胞增殖和凋亡的影响.方法:提取出生后第8、16、20、28、42天的小鼠睾丸组织RNA,采用逆转录PCR和实时荧光定量PCR(qPCR)检测分析Spag6L基因的表达情况;制备干扰Spag6L基因表达的慢病毒并转染GC-2 spd...