血液处理过程中的红细胞溶血

输注的红细胞制品中红细胞发生溶血已有报道,这对于需要输血的病人具有重要的临床意义。因为游离血红蛋白将裂解成二聚体与结合珠蛋白结合,进而通过网状内皮系统清除,一旦超出结合珠蛋白的结合能力,将会发生血红蛋白血症。溶血是指红细胞破坏后释放出血红蛋白并引起血浆颜色改变。红细胞异常溶血由许多因素引起,包括在血液处理过程中操作不当、保存条件不当、细菌性溶血、抗体激活补体的溶血、红细胞膜的缺陷及献血者异常等。溶血的程度常用红细胞比容校正后的整个血红蛋白中游离血红蛋白的百分率来表示。北美尚未建立可被接受的溶血范围,但是1％溶血标准目前用于评估血液贮存材料的生物相容性,而欧洲委员会将标准定为0.8％。本文强调要对全血制备红细胞的全程进行充分的监控,从而减少溶血的发生。仔细评估血液制备过程将降低因溶血而废弃的红细胞量。     

3种进口第四代人类免疫缺陷病毒检测试剂检测性能评价

目的通过对比分析3种进口第四代人类免疫缺陷病毒(HIV)抗原抗体诊断试剂检测HIV抗体和P24抗原的特异性及敏感性,评价这3种HIV检测试剂在临床实际应用中的意义。方法用HIV抗体阴性样品1 075份、HIV抗体阳性样品164份、BBI阳转血清盘(PRB92901-07)和7种不同稀释度的P24抗原阳性对照血清等,对3种进口第四代HIV检测试剂的敏感性和特异性进行分析。结果方法1、2、3检测HIV抗体特异性分别为92.9%、99.4%和99.3%,经统计处理,方法2特异性高于方法1,差异有统计学意义(χ2=59.7,P<0.01),方法3特异性高于方法1,差异有统计学意义(χ2=57.3,P<0.01),方法2和方法3特异性差异无统计学意义;3种试剂检测HIV抗体的敏感性一致,皆为100.0%;但其检测P24抗原的敏感性不同,方法3检测P24抗原的敏感性最高,可检出最高稀释度为1∶32的P24抗原阳性对照血清;而方法1和方法2检测P24抗原敏感性较低,只能检出最高稀释度为1∶16的P24抗原阳性对照血清;3种试剂检测BBI阳转血清盘AD第18天的HIV抗体检测结果为阳性,而第三代HIV抗体检测试剂检测血清盘第21天的HIV抗体检测结果为阳性。结论 3种进口第四代抗原抗体检测试剂敏感性均高于第三代检测试剂,能检出HIV感染窗口期的样品;3种试剂检测HIV抗体的敏感性一致,但检测P24抗原的敏感性和HIV抗体的特异性不一致,方法1检测HIV抗体的特异性较低,而方法3检测P24抗原的敏感性最高。     

Delta模块HLA配型检测方法的建立

为了建立delta模块配型的检测方法，采用盐析法提取DNA，PCR技术扩增delta模块。GeneScan模式检测PCR产物。结果表明，在104份随机样本中，PCR扩增出的delta模块具有高度多态性。DNA片段长度范围在81-393bp，片段数目为6-32个；片段长度集中在81-118bp，140-175bp，217-301bp，340-393bp4个区域。结论：建立的delta模块配型技术是可行的，可以用于造血干细胞移植供者的筛选。首次获得了中国汉族人群delta模块的数据资料。     

HLA-B新的等位基因B*5136的确认和分析

目的研究HLA-B新的等位基因B＊5136的分子机理。方法先证者为浙江省脐带血造血干细胞捐献者。盐析法抽提样本DNA，常规PCR反应扩增先证者HLA-B基因第2～4外显子的编码序列，PCR产物经TOPO试剂盒克隆转染到质粒载体中，分离其两个等位基因，对所得的克隆用第2、3、4外显子引物进行双向测序分析。结果先证者HLA-B基因经TOPO克隆后得到两个等位基因，一个为HLA-B＊4601，另一个经BLAST HLA验证为新的等位基因，其序列已递交GenBank（AY601729，AY610730，AY601731）。新的等位基因与最接近的B＊5108等位基因比较，在第3外显子上有4个核苷酸的差异：第527位T→A，导致第177位氨基酸Val→Glu；第583位C→T，导致第195位氨基酸His→Tyr；在第559位C→A和第560位T→C，导致第187位氨基酸Leu→Thr。结论该脐血捐献者的HLA-B为新的等位基因，被世界卫生组织HLA命名委员会正式命名为HLA→B＊5136。     

杭州口岸出入境留学人员麻疹抗体监测结果分析

目的了解出入境留学人员麻疹免疫状况,为加强口岸麻疹监管提供依据。方法收集2011年杭州口岸出入境留学人员健康体检资料,采用ELISA法检测了部分人员的麻疹IgG抗体水平,并对监测结果进行流行病学分析。结果受检出境和入境留学人员麻疹IgG抗体GMC分别为432.89IU/L、569.63IU/L,抗体阳性率为90.4%、88.0%,抗体保护率为13.6%、35.4%。各年龄组GMC和抗体保护率均为入境〉出境,19~岁和23~岁组间差异有统计学意义（P〈0.05）;抗体阳性率差异无统计学意义（P〉0.05）。来自非洲地区留学人员抗体阳性率和保护率均明显低于其他区域。结论出入境留学人员主要集中在高中和大学年龄段,对麻疹的免疫率低于WHO建议水平,属麻疹易感人群,应加强监管。     

PVP荷载雷丸蛋白诱导人胃癌细胞MC-4的凋亡作用

目的:研究雷丸蛋白对人胃癌细胞MC-4凋亡的诱导作用。方法:以聚乙烯吡咯烷酮(PVP)为溶剂提取雷丸饮片蛋白质,BCA法测定蛋白浓度后以DMEM培养液稀释到180mg.mL-1,120mg.mL-1,90mg.mL-1,60mg.mL-1和45 mg.mL-1,体外作用于胃癌细胞MC-4,37℃、5%CO2条件下培养18h后,光镜检查作用结果。以Hoechst 33258染色后于荧光显微镜下观察细胞凋亡情况,以Annexin V-PI双染色后以流式细胞仪检查细胞的死亡和凋亡情况。结果:随着蛋白质用量的增加,MC-4细胞死亡率与剂量间呈现量效关系,180mg.mL-1时达最高值29.6%。凋亡率和剂量间呈现较好的剂量-效应曲线,120mg.mL-1时凋亡率最高,可达29.4%,聚乙烯吡咯烷酮无作用。结论:PVP荷载雷丸蛋白对人胃癌细胞MC-4有很好的杀伤作用和诱导凋亡作用,杀伤机理和凋亡机理有待深入研究。     

新的HLA-B*4061等位基因的核苷酸序列分析

本研究探讨HLA新的等位基因HLA-B＊4061的分子基础。采用盐析法抽提样本DNA，利用PCR方法扩增先证者HLA-B基因的第1-8外显子，PCR产物直接经TOPO克隆到质粒载体中得到单链，对所得克隆进行HLA-B基因第2、3、4外显子双向测序分析。应用PCR-SSP方法证实测序所发现的突变。结果表明：先证者样本克隆测序得到2个等位基因，其中1个等位基因为B＋4601，另1个经blast验证其为新的等位基因，新的等位基因序列已递交GenBank（DQ089628，DQ089629，DQ089630）。与最接近的B＊400101等位基因序列相比，新的等位基因仅在第2外显子上有1个核苷酸不同，即第272位C→A，导致第67位氨基酸Ser→Tyr。结论：HLA-B＊4061等位基因为新的HLA-B等位基因，已荣获世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名。     

HLA相合亲缘供受者自然杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因的分析

本研究分析HLA相合亲缘关系供受者自然杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）基因分布情况并探讨其KIR相合的可能性。采用Luminex流式技术和测序方法检测HLA—A，-B，-Cw和-DRBl位点；利用序列特异性引物PCR法（PCR．SSP）检测KIR基因。结果表明：在HLA—A，-B，-Cw和-DRBl等8个位点相合的27对亲缘关系供受者样本中检出17个KIR基因，其中KIR3DL3、KIR3DPI、KIR2DL4和KIR3DL2基因存在于所有个体；检出20种KIR基因型和12种单倍体。常见基因型为2，2。频率为29．6％；最常见单倍体是2，频率为53、0％，样本以A型单倍体为主，频率为67．2％；12对（44、4％）供者KIR与受者KIR基因型和单倍体完全相同，13对（48、1％）供者KIR与受者KIR存在1个单倍体相同，2对（7．4％）供者KIR与受者KIR基因型和单倍体完全不同；1对供者KIR2DLl与受者HLA—Cw（Lys80）配基完全相合，17对供者KIR2DL2／2DL3与受者HLA—Cw（Asn80）配基完全相合，5对供者KIR3DLl与受者HLA—B（Bw4）配基完全相合。结论：HLA相合亲缘关系供受者KIR匹配的错配率比较高。     

复合探针荧光定量PCR检测土拉弗朗西斯菌

目的:建立检测土拉弗朗西斯菌复合探针荧光定量PCR方法。方法:对土拉弗朗西斯菌的FopA基因设计引物和探针,用荧光定量PCR检测,并对特异性、灵敏度和重复性进行评价。结果:本方法对所试验的土拉弗朗西斯菌纯培养物的最低检测浓度为100 CFU/ml,定量的检测变异系数小于5%。在模拟的污染血液样品中的检出限为1×103 CFU/ml。结论:本文建立的复合探针荧光定量PCR方法能高效、敏感、特异地检测土拉弗朗西斯菌。     

复合探针荧光定量PCR法检测鼠疫耶尔森氏菌的实验研究

目的建立用复合探针荧光定量PCR快速检测鼠疫耶尔森氏菌的方法。方法研究根据鼠疫耶尔森氏菌pla基因的核苷酸序列设计特异引物,通过PCR法的特异性、灵敏度和重复性研究,建立了复合探针荧光定量PCR检测鼠疫耶尔森氏菌的方法,用于鼠疫的筛选和诊断。结果该检测方法的特异性为100%,最低可检出10个拷贝的质粒DNA分子,可对1×101~1×106拷贝范围内的模板进行定量,最低可检测至1×102cfu/ml细菌。该方法的精密度好,阳性质控品和阴性质控品不同时间测定3次及同一时间5次重复实验结果Cv值均<5%。结论本研究建立的复合探针实时荧光定量PCR检测鼠疫耶尔森氏菌的方法,可对鼠疫耶尔森氏菌进行快速检测、准确辨别和早期诊断,对鼠疫的早期快速诊断具有重要意义。