成骨诱导双基因共表达腺病毒载体的构建

目的 探讨用一条Link序列T2A连接骨形态发生蛋白-2(BMP-2)基因与碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因构建含目的 基因的腺病毒载体的可行性.方法 先从cDNA中扩增得到全长BMP-2和bFGF基因片段,再接于Link序列T2A的两端.通过T2A Peptide的互补.延伸得到BMP2-T2A-bFGF的全长PCR产物,利用上游引物的Bgl Ⅱ酶切位点和下游引物的EeoRV酶切位点将其插入到pShuttle-IRES载体中,酶切、测序鉴定;利用同源重组技术将目的 基因表达框从穿梭质粒转移到腺病毒载体,鉴定阳性克隆;将PacI线性化后的腺病毒载体转染到293A细胞,观察GFP表达,PCR鉴定后进行大量扩增,并用CsCl梯度离心法进行纯化;测量A260,计算病毒感染滴度.结果 克隆得到的BMP-2与bFGF基因测序正确.经BglⅡ和EeoR Ⅴ双酶切得到的BMP2-bFGF 2个基因全长序列完全克隆到穿梭质粒和重组腺病毒载体质粒中;转染293A细胞2周后观察到明显的GFP聚集表达,即病毒包装成功,扩增纯化后滴度为3.6×1011 VP/ml.结论 经酶切鉴定BMP-2与bFGF双基因共表达腺病毒载体构建成功.     

成人骨髓间充质干细胞的体外分离培养与鉴定

目的 对成人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)进行体外分离培养与鉴定,研究其生物学特性.方法 将密度梯度离心法获得的单个核细胞,用贴壁培养法分离纯化、扩增获得大量hBMSCs,观察细胞形态,分析细胞生长特性,并经流式细胞仪检测细胞表面抗原、细胞周期,和进行成骨诱导鉴定.结果 经密度梯度离心和贴壁培养法可成功分离纯化、扩增得到大量hBMSCs,其细胞形态、分化特性和表型均符合干细胞特点,在特定培养条件下能向成骨细胞分化.结论 骨髓间充质干细胞分离扩增容易,细胞增殖能力和成骨性能好,是骨组织工程理想的种子细胞.     

两种微创手术治疗极外侧型腰椎间盘突出症的近期疗效及术后神经源性疼痛发生情况比较

神经病理性疼痛( neuropathic pain, NP )指由躯体感觉神经系统的损伤或疾病引起的疼痛,是脊柱手术后常见的不适症状[1].椎间孔(外)型腰椎间盘突 出 症 [ foraminal ( extraforaminal ) lumbar disc herniation,FEFLDH]属极外侧型腰椎间盘突出,...     

单纯型轴后多趾一家系的基因突变筛查

目的：探讨一个中国汉族单纯型轴后多趾家系患者是否存在GLI3和ZNF141基因突变。方法收集家系中2例患者的临床资料，并采集2例患者及4例家系正常成员的外周血，提取基因组DNA，采用PCR扩增GLI3和ZNF141基因的全部外显子及外显子与内含子交界区域，用直接双向测序、BLAST比对进行突变分析。结果此家系中2例患者临床诊断为单纯型轴后多指（趾） A型；在GLI3和ZNF141基因中发现了6个变异序列，所有序列变异均存在于患者及其正常亲属中，与疾病表型无共分离现象。结论 GLI3和ZNF141基因外显子突变与该家系单纯型轴后多趾的发病无关。     

PFLCP与PFNA治疗老年不稳定性转子间骨折的疗效比较

目的：对比分析股骨近端解剖锁定钢板（PFLCP）与股骨近端防旋髓内针（PFNA）治疗老年不稳定性股骨转子间骨折的疗效。方法2010.01～2012.10间我科采用PFLCP治疗老年不稳定性转子间骨折30例,采用PFNA治疗34例,随访观察其愈合过程及功能恢复情况。结果所有患者均获随访,时间12～36个月,平均28.1个月。两组患者在手术时间、术中出血量、手术失败率方面差异有统计学意义（P〈0.05）,在骨折愈合时间、髋关节功能方面差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：在老年不稳定性股骨转子间骨折的治疗中,PFNA具有操作简单、手术时间短、出血量少、术后并发症少等优点,可作为优先选择的内固定材料。