内皮素-1对人肺腺癌SPC-A1细胞内游离钙离子的影响及机制

背景与目的 既往的研究发现内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)与肺腺癌细胞生长关系密切,其促肺腺癌细胞生长作用可能与细胞内游离钙离子增加有关.本研究探讨ET-1对人肺腺癌SPC-A1细胞内游离钙离子(Intracellular free calcium,[Ca2 ]i)的影响及其机制.方法采用Fura-2/AM荧光技术测[Ca2 ]i浓度,检测ET-1对SPC-A1细胞[Ca2 ]i的影响.应用钙离子通道阻滞剂、内皮素受体(Endothelin Receptor,ETR)拮抗剂及其细胞内信号传导通路阻滞剂,研究ET-1对SPC-A1细胞[Ca2 ]i影响的细胞学机制.结果 ET-1(1×10-15-1×10-8)mol/L呈浓度依赖性地促进SPC-A1细胞[Ca2 ]i升高,ETAR特异性拮抗剂BQ123(1×10-7mol/L)可完全抑制ET-1(1×10-10 mol/L)的促[Ca2 ]i升高作用(P<0.05),而ETBR特异性拮抗剂BQ788(1×10-7mol/L)无此作用(P>0.05);细胞外无钙离子或用Nifedipine(1×10-6mol/L)阻断钙离子内流后ET-1(1×10-10 mol/L)促[Ca2 ]i升高作用明显减弱(P<0.05);Ryanodine(50×10-6mol/L)抑制细胞内钙离子释放后ET-1(1×10-10 mol/L)促[Ca2 ]i升高作用减弱(P<0.05);磷脂酶C抑制剂U73122(1×10-5 mol/L)可以抑制ET-1(1×10-10mol/L)促[Ca2 ]i升高作用(P<0.05);U73122的无活性同分异构体U73433不能抑制ET-1促[Ca2 ]i升高作用(P>0.05);蛋白激酶C抑制剂Staurosporine(2×10-9mol/L)对ET-1(1×10-10mol/L)促[Ca2 ]i的作用无明显影响(P>0.05).结论 ET-1能够促进SPCA-1细胞[Ca2 ]i升高,其途径主要是通过L-型钙离子通道开放使细胞外钙离子内流,内流钙离子促发细胞内钙离子释放.同时ET-1激活细胞内磷脂酶C诱发的钙离子释放也是ET-1促进[Ca2 ],升高的机制之一.     

内皮素-1对人肺腺癌细胞SPC-A1生长的影响

背景与目的内皮素-1（endothelin-1,ET-1）是强大的细胞促有丝分裂素,在一些肿瘤细胞生长和肿瘤血管新生中起重要作用。本研究的目的是探讨ET-1对人肺腺癌细胞SPC-A1生长的影响。方法采用细胞体外培养技术,四甲基偶氮唑盐[3-（4,5-dimethylthiazol-2-yl）-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide,MTT]显色分光光度法测细胞增殖,流式细胞仪测细胞周期。结果ET-1（1×10^-15-1×10^-9mol/L）具有促进SPC-A1细胞增殖作用,作用呈浓度依赖性,在1×10-11mol/L时作用呈饱和状态;ET-1（1×10^-10mol/L）促SPC-A1细胞增殖作用可被内皮素受体A（endothelin receptor A,ETA）拮抗剂BQ123（1×10^-7mol/L）阻断,但不受内皮素受体B（endothelin receptor B,ETB）拮抗剂BQ788（1×10^-7mol/L）影响;用乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA）（0.4mmol/L）去除细胞外钙离子及电压依赖型Ca2＋通道阻滞剂硝苯地平（nifedipine,1μmol/L）能抑制ET-1诱导的肺腺癌细胞增殖。ET-1（1×10^-10mol/L）对SPC-A1细胞周期没有显著影响。结论ET-1为促SPC-A1细胞生长因子,ET-1促肺腺癌细胞生长的作用主要通过SPC-A1细胞表面ETA受体实现,细胞外钙离子通过电压依赖型Ca^2＋通道内流在ET-1促肺腺癌细胞生长中起重要作用。     

内皮素及其受体对肿瘤细胞生长的作用

内皮素（endothelin，ET）是一种由血管内皮细胞合成的生物活性肽。ET共有3种异构体，ET-1，ET-2和ET-3，ET通过细胞膜上的内皮素受体（endothelin receptor，ETR）产生生物学效应，ETR属G蛋白偶联受体，有ETA及ETB2种亚型。ET及ETR不仅分布于血管内皮细胞和血管平滑肌细胞，还广泛分布于肺、肝、子宫、乳腺、前列腺等组织器官。ET-1除了有强烈的血管收缩作用外，还是强大的细胞促有丝分裂素，对血管平滑肌细胞、肾间质组织细胞、气道平滑肌细胞等正常组织细胞有促细胞生长的作用。     

临床常见分离菌对不同配比头孢哌酮/舒巴坦的药敏差异

目的了解临床常见病原菌对不同配比头孢哌酮/舒巴坦药敏纸片的耐药性,为临床合理选择头孢哌酮/舒巴坦提供依据。方法收集某院2014年上半年临床分离病原菌1 141株,采用纸片扩散法检测不同病原菌对头孢哌酮/舒巴坦两种药敏纸片(70/35 μg与75/75 μg)的抗菌活性。结果1 141株病原菌中肠杆菌科细菌675株（59.16%）,非发酵菌447株(39.18%),其他革兰阴性杆菌19株(1.66%)。对头孢哌酮/舒巴坦两种药敏纸片(70/35 μg、75/75 μg)的耐药率：超广谱β 内酰胺酶（ESBLs）阳性大肠埃希菌(eco,221株)分别为7.69%、2.26%,肺炎克雷伯菌(kpn,92株)分别为10.87%、3.26%;亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌（IRAB 295株）分别为54.92％、11.19％;两种药敏纸片抗菌活性比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。ESBLs阴性肠杆菌科细菌（eco,135株;kpn,98株）、亚胺培南敏感鲍曼不动杆菌（51株）、铜绿假单胞菌（48株）、嗜麦芽窄食单胞菌（22株）对两种头孢哌酮/舒巴坦药敏纸片的耐药率比较,差异均无统计学意义（均P>0.05）。结论ESBLs阳性肠杆菌科细菌与IRAB对不同配比头孢哌酮/舒巴坦药敏纸片的抗菌活性具有差异,临床治疗此类细菌引起的感染时要充分考虑头孢哌酮/舒巴坦的剂型,以达到预期治疗效果。     

细胞内钙在内皮素-1促肺腺癌细胞SPC-A 1生长中的作用

目的：探讨细胞内钙离子（[Ca^2＋]i）在内皮素-1（endothelin-1,ET-1）促肺腺癌细胞SPC-A1生长中的作用及其机制。方法：采用RT-PCR法检测肺腺癌细胞SPC-A1中ET-1及内皮素受体（endothelinreceptor,ETR）的mRNA表达,蛋白印迹法检测SPC-A1细胞中ET-1及ETR的蛋白表达,MTT法检测细胞生长,Fura-2/AM荧光技术检测[Ca^2＋]i。结果：肺腺癌细胞SPC-A1上有ET-1及内皮素受体A（ETAR）及受体B（ETBR）的mRNA及蛋白表达;ET-1（10^-15～10^-8mol/L）具有促进SPC-A1细胞增殖作用,也促进其[Ca^2＋]i浓度升高,作用均呈浓度依赖性;ET-1（10^-10mol/L）促SPC-A1细胞增殖及[Ca^2＋]i浓度升高作用均可被ETAR拮抗剂BQ123（10^-7mol/L）阻断（P〈0.05）,但不受ETBR拮抗剂BQ788（10^-7mol/L）影响（P〉0.05）;去除细胞外Ca^2＋及电压依赖型Ca^2＋通道阻滞剂硝苯地平（1μmol/L）在阻断ET-1升高[Ca^2＋]i浓度作用的同时也抑制ET-1诱导的肺腺癌细胞增殖。结论：ET-1通过ETAR促SPC-A1细胞生长及增加[Ca^2＋]i,细胞外Ca^2＋通过电压依赖型钙离子通道开放内流是ET-1增加[Ca^2＋]i及促肺腺癌细胞SPC-A1增殖的主要机制。