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1.
目的在本室前期工作的基础上构建汉滩病毒M基因G1片段与S基因0.7kb片段嵌合基因的重组腺病毒。方法构建含有汉滩病毒G1S0.7嵌合基因的转移载体pShuttle-G1S0.7,然后通过特异性的酶切将嵌合基因与腺病毒DNA相连,电转化E.coli JM109,获得重组腺病毒Adeno-G1S0.7 DNA,转染HFX293细胞得到重组腺病毒。进一步对重组腺病毒的滴度和表达产物进行鉴定。结果构建的含G1S0.7嵌合基因的重组腺病毒,滴度可达10^13~10^15 PFU/L;该重组腺病毒感染Vero-E6细胞后,表达出可被抗汉滩病毒核蛋白及糖蛋白G1的特异性单抗(mAb)所识别的融合蛋白。结论利用腺病毒表达系统,成功地表达同时具有核蛋白及糖蛋白G1生物学活性的融合蛋白,为进一步研究其免疫学特性奠定了基础。 相似文献
2.
目的:利用生物信息学网络资源分析融合蛋白的二级结构及其理化性质,探讨分泌型抗成骨肉瘤单链双功能抗体基因的表达。
方法:①将单链抗体基因(ScFv)与白细胞介素2基因亚克隆至反转录病毒表达载体PLxSN,重组质粒pL(ScFv-IL-2)SN在脂质体介导下转染PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆,扩大培养,用NIH3T3测定病毒滴度,将重组病毒感染人成骨肉瘤细胞命名为OSC/ScFv-IL-2。②以PCR,RT-PCR以及Western blotting 对ScFv-IL-2基因修饰的OSC9901细胞进行鉴定。在构建融合蛋白之后,运用DNA分析软件(DNAssist)和蛋白质分析软件(ANTHEPROT V5)分析融合蛋白的氨基酸序列、二级结构及其理化性质。
结果:①经酶切及PCR分析鉴定,成功地构建了融合基因表达载体pL(ScFv- IL-2)SN,并获得高滴度产毒细胞株C26;Western blotting分析证明ScFv- IL-2基因融合蛋白的表达。②运用DNAssist核酸序列分析软件分析ScFv-IL-2DNA序列翻译并获得了氨基酸序列,运用蛋白质分析软件(ANTHEPROT V5)分析融合蛋白的二级结构及其理化性质。
结论:利用生物信息学网络资源可以分析预测融合蛋白的性质,为进一步探讨单链双功能抗体基因融合蛋白提供依据。 相似文献
3.
整合素β_3与汉坦病毒囊膜糖蛋白在RRS系统中的相互作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:采用RRS酵母双杂交系统,研究人整合素β3与汉坦病毒囊膜糖蛋白的相互作用,进一步揭示汉坦病毒入胞机制.方法:大量制备前期构建的β3-pYesM△PolyA、 G1-Met和G2-Met质粒,共转染至酵母温度敏感株cdc25-2,进行双杂交鉴定.结果:双杂交结果表明,β3可与汉坦病毒囊膜糖蛋白G2在酵母菌中相互作用,而不与G1相互作用.结论:在汉坦病毒与整合素β3受体相互作用的过程中,汉坦病毒囊膜糖蛋白G2可能起到主要作用. 相似文献
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胎盘组织在乙型肝炎病毒宫内传播中的作用及其机制研究 总被引:11,自引:0,他引:11
乙型肝炎病毒 (HBV)在子宫内经胎盘引起的传播无法用乙型肝炎 (简称乙肝 )疫苗加以阻断 ,危害十分严重。因此 ,HBV宫内传播及其机制的研究已是控制乙肝的关键课题之一。我们从 1992年开始在西安地区对此进行了分子流行病学研究 ,初步确定了主要危险因素 ,提出了HBV宫内传播的假设 :存在 :血源性与细胞源性两条途径的假设[1,2 ] 。 1997年至 1998年在太原地区作了重复性观察 ,并对胎盘组织“细胞转移”HBV的机制进行了进一步的研究。一、对象和方法1 研究对象与标本收集 :(1)研究对象与血标本 :收集1997年 2月至 1998年 7月太原… 相似文献
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乙型肝炎病毒宫内传播危险因素的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
用ELISA法对159例孕产妇及新生儿血分别检测HBsAg,HbeAg进行HBV宫内传播率的分析及影响因素的病例对照研究。结果显示:新生儿出生时HBsAg阳性者16例,HBV宫内传播率994%(16/159),HBsAg、HBeAg双阳性母亲宫内传播率1739%(16/69)。多元logistic回归分析将母血HBeAg阳性、性别、产后出血、产程及羊水污染选入模型(剔除P值为010),OR值(OR95%可信区间)分别为843(204—3476)、486(133—1738)、143(103—196)、112(100—125)及014(002—105)。 相似文献
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目的:制备抗HIV-1 Tat蛋白的单克隆抗体(mAb),并对其进行初步鉴定.方法:通过动物免疫、细胞融合、克隆化制备抗Tat蛋白的mAb,并用ELISA法对所得mAb的特异性、抗原识别表位及相对亲和力等做了初步鉴定.结果:获得了3株抗Tat蛋白的mAb,这3株mAb均能特异识别Tat蛋白.结论:获得了3株杂交瘤细胞系,均可以稳定分泌抗HIV-1 Tat蛋白的mAb,有望为HIV早期检测及HIV抗病毒治疗提供有用工具. 相似文献
10.
目的:利用生物信息学网络资源分析融合蛋白的二级结构及其理化性质,探讨分泌型抗成骨肉瘤单链双功能抗体基因的表达.方法:①将单链抗体基因(ScFv)与白细胞介素2基因亚克隆至反转录病毒表达载体PLXSN,重组质粒PL(ScFv-IL-2)SN在脂质体介导下转染PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆,扩大培养,用NIH3T3测定病毒滴度,将重组病毒感染人成骨肉瘤细胞命名为OSC/ScFv-IL-2.②以PCR,RT-PCR以及Western blotting对ScFv-IL-2基因修饰的OSC9901细胞进行鉴定.在构建融合蛋白之后,运用DNA分析软件DNAssist)和蛋白质分析软件(ANTHEPROT V5)分析融合蛋白的氨基酸序列、二级结构及其理化性质.结果:①经酶切及PCR分析鉴定,成功地构建了融合基因表达载体PL(ScFv-IL-2)SN,并获得高滴度产毒细胞株C26:Western blotting分析证明ScFv-IL-2基因融合蛋白的表达.②运用DNAssist核酸序列分析软件分析ScFv-IL-2DNA序列翻译并获得了氨基酸序列,运用蛋白质分析软件(ANTHEPROT V5)分析融合蛋白的二级结构及其理化性质.结论:利用生物信息学网络资源可以分析预测融合蛋白的性质,为进一步探讨单链双功能抗体基因融合蛋白提供依据. 相似文献