伯氏疟原虫红细胞膜相关蛋白1缺失突变体的构建和鉴定

目的:研究伯氏疟原虫输出蛋白——红细胞膜相关蛋白1(EMAP1)在疟原虫生长发育和侵染中的作用,构建EMAP1缺失的伯氏疟原虫突变体.方法:以pL0035质粒为载体,PCR扩增EMAP1编码区上游和下游序列作为同源臂,用酶切连接和无缝克隆的方法将两条同源臂分别插入pL0035,获得重组质粒pL0035-ΔPbEMAP1...     

MiR-1297在TAM介导的子宫内膜癌中#br# 的表达及临床意义

【摘要】 目的 探讨miR-1297在他莫昔芬(TAM)介导的子宫内膜癌中的表达及临床意义。方法 收集2012年3月1日至2015年3月1日期间北京天坛医院乳癌术后服用TAM超过5年可疑内膜病变的患者10例,对照组选用因子宫脱垂而行子宫切除的患者,没有激素和TAM服药史,HE染色确定病理类型。离体培养子宫内膜原代细胞,用TAM处理后采用细胞克隆方法检测细胞的生长情况,及Real time-PCR方法检测组织及细胞中miR-1297的表达。结果 对照组、服用TAM的非典型增生组、子宫内膜癌组中miR-1297表达呈递增趋势。此外,离体培养的子宫内膜细胞,用TAM处理后发现细胞增殖,检测miR-1297表达上调。结论 在TAM介导的子宫内膜癌变中miR-1297促进细胞生长,具有致癌作用。这能让我们更好地理解TAM介导子宫内膜癌的机制。对TAM介导的子宫内膜癌而言,miR-1297可能是一个潜在的早期临床预测的生物标志物。     

宫颈锥切除术及其相关问题

近年随着宫颈癌筛查的广泛应用,宫颈病变可被早发现、早治疗,从而使宫颈锥切术在临床的应用越来越广泛。目前常用的宫颈锥切术包括：宫颈冷刀锥切术(CKC)、激光锥切术(LC)和宫颈环形电切术(LEEP)。宫腔镜辅助宫颈CKC是宫颈上皮内瘤变(CIN)较为理想的治疗方法,具有治愈率高、术后导致的并发症少、简单易学等优势。     

伯氏疟内质网塑形蛋白SEY1敲除质粒的构建及转染

目的:为了研究重要内质网塑形蛋白SEY1在疟原虫致病性方面的作用,本研究构建敲除伯氏疟原虫PbSEY1的质粒,结合疟原虫转染技术筛选PbSEY1缺失疟原虫突变体。方法:选取PbSEY1编码区中相邻的两个片段作为同源臂进行PCR扩增,并引入特定酶切位点,借助T4 DNA连接酶和In-Fusion无缝克隆的方法将其插入载体pL0034中;利用疟原虫同步化培养及电转染技术将该质粒转入疟原虫,基于基因同源重组原理在疟原虫中敲除PbSEY1并进行药物筛选。结果:（1）获得可用于基因敲除及回复实验的重组质粒pL0034-△PbSey1;（2）在伯式疟原虫中敲除PbSEY1。结论:利用重组质粒pL0034-△PbSey1和疟原虫转染技术初步获得PbSEY1缺失疟原虫突变体,为进一步研究PbSEY1在疟原虫致病性中的作用提供了必要工具。     

胞浆表达绿色荧光蛋白的伯氏疟原虫的构建和筛选

目的:为了追踪疟原虫发育及侵染的情况,构建及筛选胞浆稳定表达绿色荧光蛋白（GFP）的伯氏疟原虫。方法:构建含有伯氏疟原虫230p基因和GFP基因的重组质粒pL0035-GFP,质粒线性化后通过电转染转入野生型伯氏疟原虫;基于双交换同源重组原理,利用乙胺嘧啶筛选获得在230p基因处插入GFP的重组疟原虫;有限稀释法筛选表达GFP的单克隆重组伯氏疟原虫;PCR鉴定重组疟原虫基因型,荧光显微镜和流式细胞术检测GFP表达情况。结果:PCR及DNA测序结果表明GFP基因成功整合到伯氏疟原虫基因230p;荧光显微镜可观察到重组疟原虫胞浆呈绿色荧光,流式细胞术检测到绿色荧光信号。结论:成功构建胞浆表达绿色荧光蛋白的伯氏疟原虫。     

宫腔镜技术诊断子宫内膜癌的临床应用

宫腔镜检查目前是对可疑患有子宫内膜癌女性的金标准检查手段。但子宫内膜肿瘤细胞有机会在宫腔镜检查过程中脱落，并随着液体流入腹腔而发生被动转移。因此，宫腔镜在子宫内膜癌患者中的应用仍存在争议。文章阐述了对可疑患有子宫内膜癌的女性，接受诊断性宫腔镜检查中肿瘤转移风险的认识，保证手术安全所需的条件，以及宫腔镜在早期子宫内膜癌患者保留生育能力中的应用。根据目前的数据，可得出如下结论：（1）宫腔镜检查用于诊断早期子宫内膜癌是安全有效的方法。（2）操作过程中必须严格控制膨宫压力，以减少子宫内膜肿瘤细胞在腹腔内被动转移的风险。（3）在早期子宫内膜癌患者中，宫腔镜手术联合药物治疗是保留生育能力最有效的治疗方法。     

重组质粒pcDNA4-FLAG-GLUT1构建及蛋白表达

目的:为探究葡萄糖转运蛋白1（GLUT1）磷酸化水平对红细胞期疟原虫生长发育的影响，构建必要的分子工 具。方法:以pcDNATM4/TO/myc-His B为载体，构建在GLUT1第一个胞外区插入2×FLAG标签的重组质粒pcDNA4- 2×FLAG-GLUT1。将重组质粒转染到NIH/3T3细胞中，利用Western印迹和流式细胞术分别检测细胞FLAG-GLUT1蛋白总量 和细胞表面FLAG-GLUT1的表达水平。结果:酶切鉴定及DNA测序表明正确构建重组质粒pcDNA4-2×FLAG-GLUT1。通过识 别FLAG标签，利用Western印迹能够检测到FLAG-GLUT1在NIH/3T3细胞中的表达，流式细胞术结果显示，转染重组质粒 的细胞表面可检测到FLAG-GLUT1的表达，阳性群比例为（21.46 ± 2.375）%，明显高于对照组（0.01±0.00）%，差 异有统计学意义（t=9.035，P<0.01）。结论:成功构建重组质粒pcDNA4-2×FLAG-GLUT1，为研究GLUT1蛋白磷酸化在 疟原虫感染红细胞中的作用提供了必要的工具。     

宫腔镜手术中能量器械应用技巧及副损伤防治

宫腔镜手术中能量器械包括高频电刀单极、双极、等离子、射频等,通过能量器械产生的热效应以达到电切与电凝的手术效果。这些能量器械为手术带来便利的同时,也会产生一些副损伤。文章就宫腔镜手术中能量器械的工作原理、可造成的副损伤及其处理、能量器械的使用技巧及如何预防副损伤的发生进行讨论。