金黄色葡萄球菌类肠毒素W的超抗原活性位点预测与克隆表达

目的预测金黄色葡萄球菌类肠毒素W(SElW)与T细胞受体(TCR)的对接和超抗原活性位点, 并对SElW进行克隆表达和纯化。方法利用AlphaFold对SElW蛋白单体进行三维结构预测, 借助SAVES在线服务器使用ERRAT、拉氏图和Verify₃D等软件对蛋白模型进行评估。用ZDOCK服务器模拟SElW与TCR的对接构象, 并对SElW与其他肠毒素的氨基酸序列进行比对。设计引物扩增selw基因, 将该片段重组于pMD18-T载体中并进行测序;经限制性内切酶BamHⅠ和Hind Ⅲ双酶切后将目的片段重组于表达质粒pET-28a(+)中, 重组质粒鉴定后用IPTG诱导表达;用亲和层析法对表达于上清中的SElW蛋白进行纯化, 用BCA法对蛋白进行定量。结果三维结构预测结果显示, SElW蛋白由氨基末端和羧基末端两个结构域组成, 其中氨基末端结构域由3个α-螺旋和6个β-片层组成, 羧基末端结构域由2个α-螺旋和7个反向平行的β-片层组成。SElW蛋白模型的整体质量因素得分为98.08, 其中93.24%的氨基酸Verify₃D得分≥0.2, 且...