过表达Atg5蛋白对巨噬细胞泡沫化程度的影响

目的探讨过表达Atg5蛋白对巨噬细胞泡沫化程度的影响。方法采用Atg5慢病毒和对照组病毒感染Raw264.7巨噬细胞,建立对照细胞系(对照组)和Atg5过表达细胞系(观察组)。两组细胞分别加入50 mL/L ox-LDL诱导形成泡沫化细胞。采用Western blot分析两组细胞蛋白p62、LC3、CD36和SR-A的变化;采用高效液相法检测两组细胞内胆固醇脂(CE)、游离胆固醇(FC)和总胆固醇(TC)的变化;采用免疫荧光和电子显微镜分析两组细胞内脂滴的含量;采用ELISA检测两组细胞培养上清中炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的水平。结果与对照组比较,观察组细胞自噬底物p62水平显著下调,LC3-II水平显著上调(P0.05)。与对照组比较,观察组巨噬细胞CE、FC和TC含量均显著下调(P0.05)。观察组细胞脂质水平和脂滴的数量较对照组明显下降(P0.05)。与对照组比较,观察组细胞炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的水平显著下调(P0.05)。结论自噬核心蛋白Atg5过表达可显著提高巨噬细胞自噬水平,可能通过自噬降解胞内胆固醇等脂质,预防巨噬细胞泡沫化,进而降低动脉粥样硬化的发生。     

吸烟、F 2RL 3 基因甲基化与稳定性冠状动脉粥样硬化性心脏病预后的关系

目的 探讨F 2RL 3 基因甲基化与稳定性冠状动脉粥样硬化性心脏病（简称冠心病）继发心血管事件、死亡率的相关性，及F 2RL 3 基因甲基化与吸烟导致稳定性冠心病患者有害作用的关系。方法 募集南华大学附属第二医院121 例经历过急性冠状动脉综合征、心肌梗死或冠状动脉介入治疗后接受心血管康复计划的住院患者。随访超过8 年。F 2RL 3 基因位点甲基化特点采用Sequenom 基质辅助激光解吸电离时间飞行质谱分析。F 2RL 3 基因甲基化、吸烟与继发性心血管事件、特因和全因死亡率之间的相关性由估计混杂因素控制危险比的多变量Cox 回归模型分析。结果 随访期间，5 例患者发生非致死性心肌梗死，4 例患者发生非致死性脑卒中，6 例患者发生心血管疾病死亡，5 例患者因为其他原因死亡。调整已知预后因素后，Cox 模型分析显示F 2RL 3 基因甲基化与死亡率密切相关。与F 2RL 3 基因甲基化四分位数最高的稳定性冠心病患者相比，四分位最低的患者死于心血管疾病、非心血管疾病或其他任何原因的校正危险比（95%CI）分别为2.32（0.97，5.58）、5.16（1.81，14.7）和3.19（1.64，6.21）。两组患者继发性心血管事件无相关性。将F 2RL 3 纳入回归模型后，吸烟与所有预后结果的相关性减弱。结论 F 2RL 3 甲基化是吸烟有害影响的潜在介导者，并与稳定性冠心病死亡率密切相关。     

川芎嗪对脂多糖诱导人冠状动脉内皮细胞炎症损伤的保护作用及机制

目的观察川芎嗪(LIG)对脂多糖(LPS)诱导的人冠状动脉内皮细胞(HCAEC)炎症损伤的影响并探讨其可能的机制。方法用1、10、100μmol/L LIG预处理HCAEC 12 h,再加入1 mg/L LPS共同处理12 h。HCAEC的细胞活力通过噻唑蓝法检测; HCAEC的凋亡率通过流式细胞术检测; HCAEC细胞培养液上清中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平通过酶联免疫吸附法检测; HCAEC细胞中三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白的表达通过Western blot法检测。结果 LPS组细胞的活力较对照组显著降低,HCAEC细胞凋亡率和培养液上清中IL-6和TNF-α的水平较对照组显著增加,细胞中ABCA1蛋白表达较对照组显著下调(均P0. 05)。LIG(10、100μmol/L)+LPS组细胞活力较LPS组显著增加,细胞凋亡率和培养液上清中IL-6和TNF-α的水平较LPS组显著降低,细胞中ABCA1蛋白表达较LPS组显著上调(均P0. 05)。结论 LIG抑制LPS诱导的HCAEC的炎症损伤,其机制可能与LIG上调ABCA1的表达有关。     

氮末端脑利钠肽与急性冠脉综合征的关系

脑利钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)是“心脏激素”利钠肽家族成员之一。利钠肽家族包括心房利钠肽(atrialnatriuretic peptide,ANP)、BNP、C型利钠肽(C-type natriuret-ic peptide CNP)、D型利钠肽(D-type natriuretic peptide,DNP)和V型利钠肽(V-type natriuretic peptide,VNP)。它们都有类似的环状结构,但氨基端和羧基端结构不相同,因此具有不同的生理功能。BNP最先从猪脑中发现,后来又在人的心脏中分离纯化出且发现其分泌量高于脑。N-TproBNP(N-terminal pro-B-type natriuretic peptide)是BNP激素原分裂后没有活…     

川芎嗪PEG-PE纳米胶束的体外评价、细胞摄取及抗心肌细胞凋亡研究

目的 制备川芎嗪PEG-PE纳米胶束,并评价该纳米胶束的细胞摄取和抗心肌细胞凋亡效果。方法 采用薄膜水化法制备川芎嗪PEG-PE纳米胶束,并进行表征。采用体外释药、细胞摄取和细胞凋亡试验对该载药系统进行评价。结果 川芎嗪PEG-PE纳米胶束粒径为（15.8±0.9） nm,Zeta电势为-（20.5±0.4） mV,载药量为（5.7±0.3）%,包封率为（87.2±5.4）%。电镜结果表明川芎嗪PEG-PE纳米胶束呈形态规则的圆球型结构;采用芘测定法测定PEG-PE纳米胶束的临界胶束浓度约为5.3 μg·mL^-1;细胞摄取试验结果表明,PEG-PE纳米胶束可以增强药物的细胞摄取量,细胞外残留量减少;川芎嗪PEG-PE纳米胶束在10%胎牛血清DMEM培养基稳定性良好,采用异丙肾上腺素诱导心肌细胞凋亡,Hoechst染色提示凋亡心肌细胞出现了大量形态学改变,而川芎嗪PEG-PE纳米胶束可以明显减少凋亡细胞和促凋亡Caspase-3活性、抑制促凋亡蛋白Bax表达,提高抗凋亡蛋白Bcl-2表达,均显著优于川芎嗪（P<0.01）。结论 川芎嗪PEG-PE纳米胶束具有粒径小,载药量高,释药缓慢等优势,可很大程度上提高川芎嗪的心肌细胞摄取量,增强药物的抗心肌细胞凋亡作用。     

血清单核细胞趋化蛋白-1、血管内皮生长因子与冠状动脉粥样硬化的关系

目的探讨血清单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、血管内皮生长因子(VEGF)在促进冠状动脉粥样硬化斑块形成及斑块不稳定性中的作用。方法 20名健康体检者为对照组,66例不同程度的冠心病患者为冠心病组(其中包括稳定型心绞痛18例、不稳定型心绞痛24例、急性心肌梗死24例)。采用间接酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中MCP-1、VEGF的浓度,并作比较。结果冠心病组血清MCP-1为(567.54±14.31)pg/ml、VEGF为(491.01±12.06)pg/ml,对照组分别是(203.3±11.83)pg/ml、(141.28±8.67)pg/ml,冠心病组MCP-1、VEGF水平均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.001)。对冠心病各亚组、对照组各组之间的MCP-1、VEGF水平也进行了比较。MCP-1、VEGF之间的线性相关性分析结果为r=0.888,呈正相关。结论 MCP-1、VEGF在促进冠状动脉粥样硬化斑块形成的过程中起重要作用,并增加了冠状动脉粥样硬化斑块的不稳定性。     

Toll样受体4信号通路分子与慢性心力衰竭严重程度和预后的关系分析

目的 探讨Toll样受体4(TLR-4)信号通路分子变化与慢性心力衰竭(CHF)严重程度和预后的关系。方法选择本院收治的117例CHF患者(病例组)和同期109例健康对照者(对照组),采用流式细胞仪检测其外周血单核细胞中TLR-4、核转录因子kappa B(NF-κB)和髓样分化因子(MyD88)的表达情况,分析它们与CHF的心功能分级、浆膜腔积液、再次入院和全因死亡的关系。结果病例组的外周血单核细胞的TLR-4、NF-κB和MyD88水平均显著高于对照组(均P<0.05);不同NYHA分级CHF患者的TLR-4(F=4.026,P=0.032)、NF-κB(F=5.152,P=0.025)和MyD88(F=7.323,P=0.019)水平具有显著差异;随访期间发生全因死亡患者的TLR-4(t=-2.149,P=0.033)和MyD88(t=-2.506,P=0.014)水平显著高于未死亡者;TLR-4作为预测发生全因死亡的灵敏度和特异度分别为83%和77%,而MyD88分别为77%和71%。结论TLR-4信号通路分子与CHF的心功能密切相关,TLR-4和MyD88是潜在的全因死亡预测分子。     

黄芩苷PEG-PCL纳米胶束的体外评价、细胞内分布及抗心肌细胞凋亡的研究

目的：评价黄芩苷PEG-PCL(BAI@PEG-PCL)纳米胶束的细胞内分布及抗心肌细胞凋亡作用。方法：采用薄膜水化法制备黄芩苷PEG-PCL(BAI@PEG-PCL)纳米胶束,以香豆素-6作为荧光探针,评价PEG-PCL纳米胶束在细胞内的摄取及细胞内分布；采用10 μM异丙肾上腺素诱导H9c2心肌细胞凋亡进行造模,将等剂量黄芩苷和黄芩苷PEG-PCL纳米胶束在造模前预处理1 h,测定细胞凋亡相关的Caspase 3活性、ROS水平,Bcl-2和BAX蛋白的表达水平。结果：黄芩苷PEG-PCL纳米胶束具有粒径小,释药缓慢等优良特点；荧光试验表明,PEG-PCL纳米胶束能促进药物的细胞摄取,还能将药物聚集在线粒体部位,细胞凋亡试验结果表明,黄芩苷PEG-PCL能显著降低凋亡相关的Caspase 3活性、ROS水平,降低促凋亡Bax的表达,明显提高抗凋亡Bcl-2的表达,这些结果均与等剂量的黄芩苷存在显著性差异。结论：BAI@PEG-PCL纳米胶束能促进BAI被心肌细胞摄取,有助于将药物聚集在线粒体部位,从而很大程度上提高药物抗心肌细胞凋亡作用。