靶向ADAM17基因siRNA对前列腺癌PC-3细胞增殖能力的影响

目的:探讨靶向抑制ADAM17基因对雄激素非信赖性前列腺癌PC-3细胞增殖的影响。方法:应用ADAM17 siRNA转染PC-3细胞后,通过RT-PCR、Western印迹方法分别检测ADAM17 mRNA和蛋白表达变化;MTT、BrdU掺入法检测下调ADAM17对PC-3细胞的增殖和DNA合成能力的影响;流式细胞术检测ADAM17 siR-NA对PC-3细胞细胞周期的影响;Western印迹检测下调ADAM17对PC-3细胞增殖相关基因表达的影响。结果:两对ADAM17 siRNAs均可有效地降低PC-3细胞ADAM17 mRNA和蛋白的表达;MTT结果显示与对照组(0.80±0.51)相比,两对ADAM17 siRNAs均可显著抑制细胞的生长(0.43±0.57、0.44±0.64,P均<0.05);Br-dU掺入实验显示与对照组(0.79±0.72)相比,ADAM17 siRNAs均能显著下调DNA的合成能力(0.48±0.43、0.54±0.59,P<0.05);流式细胞术结果显示,与对照组(41.38±1.53)%相比,ADAM17 siRNAs可显著增加G1期细胞数量[(61.83±2.41)%、(59.78±1.92)%,P均<0.05]、降低S期细胞数量[从(33.51±1.47)%减少到(23.64±2.56)%、(25.24±1.86)%,P均<0.05],同时伴随着cyclin D1蛋白的表达下降而p21蛋白的表达升高。结论:ADAM17 siRNA可以通过下调cyclin D1、上调p21的表达而抑制前列腺癌PC-3细胞增殖,ADAM17可能成为前列腺癌基因治疗的靶点。     

加味黄连温胆汤治疗痰热互结型代谢综合征合并H型高血压临床研究

目的:研究加味黄连温胆汤对痰热互结型代谢综合征(Metabolic syndrome,MS)合并H型高血压的改善作用。方法:选择48例符合痰热互结型MS合并H型高血压患者,随机分为两组,对照组予常规基础治疗,包括改善生活方式,针对高血压、高血糖、高血脂分别予降压、补充叶酸、降糖、调节血脂治疗,治疗组在对照组基础上加服加味黄连温胆汤,治疗4周后观察MS和H型高血压各组分指标。结果:两组患者治疗后中医证候积分较治疗前明显下降,且治疗组优于对照组(P0.05);临床疗效方面,治疗组总有效率达87.5%,对照组总有效率70.8%,治疗组优于对照组(P0.05);治疗后治疗组形体学指标BMI、WHR优于对照组,治疗组血压、血HCY水平、空腹血糖(FBG)、餐后2小时血糖(2 h BG)、糖化血红蛋白(HbAlc)、TG、TC、LDL-C水平明显降低,HDL-C水平升高,且明显优于对照组(P0.05)。结论:加味黄连温胆汤联合常规治疗能够有效改善痰热互结型代谢综合征合并H型高血压患者中医证候,并改善其代谢异常状态。     

新媒体技术在中医院校《诊断学》教学中的应用

结合"诊断学"教学现状,进行翻转课堂的实践研究。通过构建新媒体教学平台为翻转课堂提供了视频资源和交流平台。新媒体资源的设计考虑了学习者对碎片化时间的利用,结合课程和新媒体教学平台特点构建了翻转课堂的教学模型。结合校内本科教学环节进行了翻转课堂的实践,实现了教学效果的改善和教育教学的优化。本文从中医院校课程特色出发,以提高教学质量和培养学生临床综合应用能力为目标,探析新媒体技术在诊断学教学中的应用。     

降钙素基因相关肽衍生物克隆表达与活性鉴定

目的 利用基因工程方法获得降钙素基因相关肽(CGRP)的衍生物(CGRP-VY),并初步鉴定其生物学活性.方法 以pET-CGRP重组质粒为模板,用PCR方法扩增编码CGRP-VY的基因片段,将该基因片段定向克隆到pET-32a( )载体上,构建pET-CGRP-VY重组质粒,转化E.coli JM109菌株,经扩增提取重组质粒,酶切和测序鉴定;将鉴定正确的重组质粒pET-CGRP-VY转化E.coli BL21trxB(DE3)pLysS菌株,经IPTG诱导后,收集并裂解菌体,SDS-PAGE电泳检测蛋白的表达;通过粗提物扩张蟾蜍肠系膜微循环血管实验,初步鉴定CGRP-VY扩张血管的活性,并与重组CGRP进行活性比较.结果 获得了含有CGRP成熟肽编码基因序列(111 bp)及缬氨酸和亮氨酸的密码子序列(6 bp)的重组质粒pET-CGRP-VY,符合预期结果;经诱导后在E.coli中表达出21.2kD的融合蛋白,初步证明其粗提物具有扩张血管的功能.结论 成功获得具有生物学活性的融合蛋白CGRP衍生物(CGRP-VY),为进一步进行其降血压功能研究奠定了实验基础.     

PDCD5蛋白联合米非司酮对前列腺癌细胞增殖及相关基因表达的影响

目的 观察PDCD5蛋白协同米非司酮(MIF)对前列腺癌细胞增殖及相关基因表达的影响.方法 MTT法分别检测10、20、50和100μmol/L MIF作用于PC-3M细胞24～96 h的吸光度(A)值.扩增包含PDCD5序列的真核表达载体PCI-neo-PDCD5,用脂质体介导的方法转染前列腺癌PC-3M细胞.在转染PDCD5的细胞中分别加入10、20 μmol/L MIF,继续培养24 h,MTT比色法检测细胞增殖,RT-PCR方法检测细胞增殖相关基因CyclinDl、Ki-67的表达.结果 MTT实验表明,与对照组相比,10 μmol/L MIF组的A值差异无统计学意义(P<0.05),20、50和100 μmol/L MIF组的A值显著降低(P<0.05),MIF对前列腺癌PC-3M细胞的抑制作用呈剂量依赖性;PDCD5真核表达载体成功转染PC-3M细胞并得到了瞬时表达,转染PCI-neo-PDCD5并加入MIF后,与对照组及单独应用MIF组相比,细胞增殖受到明显抑制(P<0.05),增殖相关基因CyclinD1、Ki-67表达降低.结论 PDCD5蛋白能够协同米非司酮抑制前列腺癌PC-3M细胞增殖,可能是通过调节某些增殖相关基因的表达来实现的,并有望成为前列腺癌的辅助治疗药物.     

凋亡相关基因PDCD5对前列腺癌细胞PC-3M-1E8促凋亡作用的研究

目的:观察外源性PDCD5对人雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3M-1E8的促凋亡作用。方法:扩增重组质粒PCI-neo-PDCD5,利用脂质体介导将其瞬时转染前列腺癌细胞PC-3M-1E8,RT-PCR检测转染后表达情况;撤除血清培养16h后,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞存活率,原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡指数,透射电子显微镜观察细胞形态。结果:MTT结果显示转染重组质粒组细胞较转染空载体和对照组细胞生长速度明显减慢,存活细胞明显减少(P<0.001);通过TUNEL与透射电镜观察,发现转染组细胞凋亡程度和数量明显增加,凋亡指数较对照组明显增高(P<0.001)。结论:PDCD5在撤出血清因素的诱导作用下能显著抑制前列腺癌细胞PC-3M-1E8在体外的生长,明显促进其凋亡。     

降钙素基因相关肽衍生物的优化表达及纯化

目的优化重组降钙素基因相关肽衍生物(CGRP-VY)蛋白的表达体系,并利用亲和层析获得高纯度的重组蛋白。方法在前期研究的基础上,将构建的pET-32a(+)-rhCGRP-VY在大肠埃希菌中表达,分别对时间、温度和IPTG的浓度进行优化。采用Ni-NTA亲和层析柱分离纯化可溶性蛋白,YLN凝胶影像分析系统和Bradford法检测纯化蛋白的纯度与含量。结果重组蛋白的最佳表达条件为诱导时间4h、诱导温度37℃、IPTG浓度0.75mmol/L,重组蛋白的最高表达量占菌体总蛋白的70%～80%,高效表达的CGRP-VY融合蛋白大部分可溶,纯化后蛋白纯度可达90%以上,蛋白浓度约为0.09mg/ml。结论成功优化了蛋白表达条件,并用亲和层析法纯化出大量可溶性TrxA-rhCGRP-VY。     

淫羊藿苷对哮喘大鼠醌氧化还原酶1及谷胱甘肽还原酶表达及氧化应激的影响

目的探讨淫羊藿苷对哮喘大鼠醌氧化还原酶1(NQO1)及谷胱甘肽还原酶(GR)表达及氧化应激的影响。方法选取40只健康雌性Wistar大鼠,随机将其分为正常组、模型组、布地奈德组及淫羊藿苷组,每组10只。除正常组外,其余组大鼠采用卵蛋白溶液造成慢性大鼠哮喘模型。实验期间正常组及模型组每天灌胃生理盐水,淫羊藿苷组每天灌胃淫羊藿苷120 mL/kg,布地奈德组致敏2周后在卵蛋白溶液雾化吸入后给予布地奈德吸入。于末次激发后24 h内处死各组(正常组同期处死)大鼠并取出右肺组织,以ELISA方法检测各组氧化因子活性氧(ROS)表达水平,采用RT-PCR法检测各组GR mRNA表达水平,采用Westernblot方法检测各组NQO1蛋白表达水平。结果模型组大鼠肺组织中ROS表达水平明显高于正常组(P<0.05),GR mRNA及NQO1蛋白表达水平均明显低于正常组(P均<0.05)。淫羊藿苷组及布地奈德组大鼠肺组织中ROS表达水平均明显低于模型组(P均<0.05),GR mRNA及NQO1蛋白表达水平均明显高于模型组(P均<0.05),淫羊藿苷组与布地奈德组各指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论淫羊藿苷可上调哮喘大鼠GR mRNA及NQO1蛋白的表达,减轻哮喘大鼠氧化应激反应。     

宝宝“吃软不吃硬”

案例:王女士的宝宝今年3岁了,别看小家伙聪明伶俐,人见人爱,却一直有个毛病让王女士担心不已,那就是小家伙这么大了,还不会用牙齿吃东西,饿了就捧个小奶瓶喝牛奶。看着别的孩子已经什么都会吃了,王女士很着急。专家分析:有很多像王女士的宝宝一样的孩子去医院就诊,他们大都在3、4岁左右,共同原因都是不好好吃饭,家长们以为孩子