重组酶介导的肠出血性大肠杆菌O157:H7等温扩增方法的建立

目的：建立新的快速检测常见食源性致病微生物肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic E.coli,EHEC)O157：H7的方法。方法：根据EHECO157：H7保守区序列,结合重组酶介导的恒温扩增(recombinase-aided amplification,RAA)和荧光定量或胶体金侧向流免疫层析试纸条(lateral flow dipstick,LFD),建立两种EHEC O157：H7检测方法(RAA荧光法和RAA-LFD法)并进行优化,评估这两种方法的灵敏性及特异性。结果：两种检测方法均可在39 ℃恒温条件下16 min内完成检测,两种方法的检测限均可达1×104 拷贝数,具有较高的灵敏性。两种方法与其他常见的肠道致病菌(金黄色葡萄球菌、沙门氏杆菌、弯曲菌、 耶尔森菌、志贺杆菌)质粒模板无交叉反应,具有良好的特异性。结论：本研究建立的两种检测EHEC O157：H7的方法,检测时间短并具有较好的特异性、灵敏性和重复性,可用于EHEC O157：H7的快速检测。     

自噬紊乱在锰刺激诱导SN4741细胞损伤中的作用与机制研究

目的 通过利用氯化锰刺激SN4741细胞（小鼠多巴胺能细胞）,构建体外锰暴露模型,研究自噬紊乱在锰中毒中的作用,并初步探讨机制。方法 向SN4741细胞培养基中加入400 μmol/L的氯化锰溶液,检测细胞活力通过CCK-8 (Cell Counting Kit-8,CCK-8)试剂盒,分别检测锰作用0 h~48 h的细胞活力;凋亡蛋白Caspase-3和PARP,自噬相关蛋白Atg5和LC3的蛋白表达水平采用蛋白印迹法(western blot)检测;3-MA作为实验干预组抑制自噬紊乱,之后检测上述细胞自噬蛋白水平和损伤指标,采用方差分析进行比较。结果 锰刺激48h后损伤SN4721细胞活力(t=47.42,P=0.0013),凋亡标志蛋白Caspase-3剪切增加,下游分子PARP的剪切水平升高(t=11.96,P=0.019);Atg5和LC3-Ⅱ蛋白表达在锰暴露24h有所升高,48h升高更明显(t=18.72,P=0.012);3-MA干预后降低锰对SN4741细胞损伤(t=3.92,P=0.045),且3-MA干预致Atg5水平下降,Caspase-3蛋白和PARP等标志凋亡的蛋白水平降低(t=10.21,P=0.016)。结论 锰暴露可诱导多巴胺神经元自噬功能异常,继而诱导细胞凋亡,抑制自噬能减少锰暴露引起的细胞凋亡。     

低温暴露应激期与习服期小鼠高级脑功能及其线粒体代谢变化特征的研究

目的 通过观察低温暴露不同时程对小鼠焦虑、抑郁情绪和学习记忆能力的影响，探究冷应激造成小鼠焦虑抑郁情绪和学习记忆能力损伤的潜在机制。方法 将10周龄左右的雄性小鼠随机分成常温对照组、低温暴露1天和7天组，在4℃低温环境中暴露，监测生理指标，认知行为学变化，脑免疫微环境和线粒体代谢功能改变。结果 低温暴露1 d时小鼠的体温、体重较暴露前显著下降（t=3.237,P=0.005;t=2.425,P=0.042），而在暴露7 d时基本恢复；与常温对照组相比，低温暴露1天组小鼠新物体识别指数显著降低（t=6.051,P<0.001），海马区小胶质细胞、星形胶质细胞显著活化（t=2.554,P=0.027;t=5.566,P<0.001），并且海马、前额叶皮层组织的线粒体复合物Ⅰ、Ⅱ的氧耗代谢水平均显著下降（P<0.05）。上述低温暴露1天组的检测指标变化，在低温暴露7天组中都得到明显改善（P<0.05）。结论 急性低温应激会导致焦虑抑郁情绪和学习记忆能力损伤，而低温暴露习服后焦虑抑郁情绪和学习记忆能力损伤状况显著缓解，这一现象与低温暴露过程中脑组织免疫微环境和线粒体氧耗...