实时荧光定量PCR检测手足口病肠道病毒71型与柯萨奇病毒16型临床分析

目的 探讨肠道病毒71型(EV71)与柯萨奇病毒A 16型(Cox A16)实时荧光定量PCR检测在早期诊断手足口病(HFMD)中的意义,为临床治疗提供参考依据。方法 对2012年3月-2013年6月157例疑似HFMD患儿的粪便、疱疹液、鼻咽拭子样本进行EV71、Cox A16、肠道病毒(EV)的实时荧光定量PCR检测,根据试剂说明书的标准判定;采用SPSS16.0进行数据分析。结果 粪便中EV、EV71、Cox A16的检出率分别为94.09%、42.04%、38.85%,高于鼻咽拭子样本,差异有统计学意义(P<0.05);而粪便与疱疹液中EV、EV71、Cox A16的阳性率相比,差异无统计学意义。结论 对HFMD患儿早期诊断、早期治疗,应该首选粪便标本采用实时荧光定量PCR法检测EV、EV71、Cox A16。     

肾移植术后T淋巴细胞亚群和NK细胞百分比参考范围的研究

目的初步建立肾移植患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的百分比参考范围。方法 67例健康对照组、169例肾移植患者于肾移植手术后1周清晨采集外周血,用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群和NK细胞百分比。同时按年龄段划分为3组进行统计:≤30岁(青年组)、31~49岁(中年组)、≥50岁(老年组)。结果 (1)建立了肾移植术后T淋巴细胞亚群和NK细胞百分比的参考范围:CD3+56.80%~64.54%;CD4+30.82%~36.43%;CD8+23.45%~27.32%;CD3+CD4+/CD3+CD8+1.35~1.68;NK 6.04%~8.35%。(2)肾移植术后不同性别间的T淋巴细胞亚群和NK细胞差异无统计学意义(P0.05)。(3)肾移植术后不同年龄间的T淋巴细胞亚群和NK细胞差异有统计学意义(P0.05):与老年组比较,青年组和中年组肾移植术后CD8+细胞百分比明显升高,差异有统计学意义(P0.01),CD3+CD4+/CD3+CD8+明显降低,差异有统计学意义(P0.01)。结论初步建立了肾移植术后的T淋巴细胞亚群和NK细胞的参考范围,同时发现肾移植术后随年龄增长CD8+细胞百分比降低,而CD3+CD4+/CD3+CD8+升高。     

无菌动物在肠-肝轴研究中的应用前景

肠道和肝之间通过肠-肝轴紧密相连，肠道疾病可以影响肝功能，肝疾病也可以诱发肠道菌群和功能的改变。无菌动物是一种身体所有部位都没有任何活的细菌、真菌、病毒及寄生虫的动物，无菌动物的出现为研究微生物与宿主之间的相互作用提供了有力的实验工具。同时，由于无菌动物缺乏正常肠道菌群的特点，它在肠-肝轴的研究中也起到了极大的推进作用。本文将对无菌动物在肠-肝轴中的应用前景做简要综述。     

多项指标联合检测腹水临床意义研究

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、血管内皮生长因子(VEGF)及C-反应蛋白(CRP)、癌胚抗原(CEA)、乳酸脱氢酶(LDH)在肝硬化合并自发性腹膜炎(SBP)、恶性肿瘤、肾性腹水中的水平及临床意义。方法收集浙江大学医学院附属第一医院2008—2009年收集的26例SBP、31例恶性肿瘤、12例肾病患者的腹水,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测其中IL-6、TNF-α、VEGF的生物学活性,雅培Ci8200全自动生化、免疫分析仪检测CRP、CEA、LDH等指标,并对结果进行比较分析。结果 SBP腹水TNF-α、IL-6、CRP高于肾性和恶性腹水组,差异有统计学意义(P均<0.05);恶性腹水组VEGF、CEA、LDH高于肾性腹水组和SBP组,差异有统计学意义(P均<0.01);恶性腹水组CRP浓度高于肾性腹水组,差异有统计学意义(P<0.01);联合VEGF、CEA、LDH诊断恶性腹水的敏感性和特异性分别为90.3%和76.3%;联合TNF-α、IL-6、CRP诊断SBP腹水敏感性和特异性分别为96.2%和72.1%。结论腹水中TNF-α、IL-6、CRP的升高有助于SBP的诊断,腹水中VEGF、CEA、LDH的浓度对鉴别良、恶性腹水具有一定临床价值。     

重型肝炎中骨桥蛋白与IL-17的表达及临床意义

目的 探讨慢性重型乙型肝炎患者外周血中骨桥蛋白(OPN)和白细胞介素-17 (IL-17)的表达及临床意义.方法 于2009-2010年期间收集浙江大学医学院附属第一医院传染科住院的乙型肝炎引起的慢加急性肝功能衰竭(ACLF)患者20例,其中男11例,女9例,年龄37 ～ 65岁,中位数为39岁.并收集同期健康体检者40名作为对照组,其中男20名,女20名,年龄25 ～ 55岁,中位数35岁.采用ELISA法检测血浆中OPN及血清中IL-17的水平.并应用刀豆球蛋白A(ConA)诱导的小鼠暴发性肝炎模型,分析外周血及肝脏中OPN和IL-17的水平随时间的变化.分离人外周血单个核细胞(PBMC),在ConA刺激的基础上,添加肿瘤坏死因子(TNF)-α或anti-TNF-α培养后,收集细胞培养上清,检测OPN和IL-17的水平.采用SPSS统计软件进行统计学处理,两组间比较采用t检验,OPN与IL-17之间关系采用Pearson相关性分析.结果 慢性重型乙型肝炎组IL-17和骨桥蛋白的水平[ (42.4±12.9) pg/ml和(1460.1±523.1) ng/ml]高于健康对照组[(10.6±4.8)pg/ml和(472.8 ±67.5) ng/ml],差异有统计学意义(t=2.387和3.570,P均＜0.05).小鼠肝炎模型中,ConA注射后6h,外周血中的OPN即达到高峰,在12 h后OPN水平回落;而IL-17在24h内逐渐升高.注射后6h,肝脏组织中的OPN水平有一小的下降后逐渐升高并在12 h达到高峰;IL-17在ConA注射后6h达到高峰.慢性重型乙肝患者中骨桥蛋白与IL-17水平呈正相关(R2 =0.582,P=0.026),TNF-a增加淋巴细胞对骨桥蛋白的分泌(P＜0.05).结论 重型肝炎发生与骨桥蛋白和IL-17的表达水平有关,骨桥蛋白与IL-17水平呈正相关.TNF-α能促进淋巴细胞产生骨桥蛋白.     

杭州地区135例手足口病患儿早期机体免疫功能临床分析

目的:观察手足口病(HFMD)患儿早期外周血中T淋巴细胞亚群(CD3+T、CD4+T、CD8+T)、B淋巴细胞(B)、自然杀伤细胞(NK)、以及免疫球蛋白和补体水平的变化,探讨其早期免疫功能改变。方法:收集杭州地区2010年4月～2010年6月手足口病患儿135例作为研究对象,48例正常的健康儿童作为对照组;分别应用流式细胞术(FCM)检测CD3+T、CD4+T、CD8+T、B以及NK细胞绝对数值,计算CD4/CD8比值;用免疫透射比浊法测定IgA、IgG、IgM、C3及C4。结果:与对照组比较,患儿的CD3+T、CD4+T、CD8+T、B、NK细胞的绝对数值显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),血清IgM、IgG显著增高,差异有统计学意义(P<0.05),IgA显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);血清C3及C4水平无明显变化,差异有统计学意义(P>0.05)。结论:手足口病患儿早期出现机体免疫功能紊乱,早期检测免疫球蛋白及CD3+T、CD4+T、CD8+T、B、NK细胞数的变化对于判断手足口病患儿病情及预后具有重要作用。     

检测支气管肺泡灌洗液中的肿瘤标志物和miR-29a、miR-34a对肺癌诊断和分型的作用

目的探讨检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中的CEA、CA125、NSE、CyFRA21—1肿瘤标志物和miR-29a、miR-34a对肺癌诊断和分型的作用。方法收集105例疑似肺癌患者BALF,分为肺部良性疾病组（c组）25例、小细胞肺癌组（SCLC组）22例、鳞癌组（SQ组）34例、腺癌组（AC组）24例,分别检测各组CEA、CA125、NSE、Cy．FRA21-1和miR-29a、miR-34a的水平,并对各组的数据进行统计学处理和比较。结果SCLC组、SQ组、AC组3组的BALF中的CEA、CA125、NSE、CyFRA21—1水平均显著高于肺部良性疾病组（P〈0．05）,而SCLC组、sQ组、AC组3组之间差异无统计学意义（P〉0．05）;SCLC组BALF中的miR-29a表达较sQ和AC两组显著下调（P〈0．05）,而SQ和AC两组之间差异无统计学意义（P〉0．05）;AC组BALF中的miR-34a表达较SCLC和SQ两组显著下调（P〈0．05）,而SCLC和sQ两组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论检测BALF中的肿瘤标志物和miR-29a、miR-34a对肺癌的诊断和分型具有重要的临床意义。     

甲型H1N1流感病人外周血免疫细胞和细胞因子水平变化

目的:观察甲型H1N1流感患者和流感症状患者外周血中B淋巴细胞(B)、自然杀伤细胞(NK)、辅助性T淋巴细胞(CD4+T)、细胞毒性T淋巴细胞(CD8+T)绝对数的变化以及血清中细胞因子水平的变化,探讨甲型H1N1流感病毒对机体免疫反应的影响。方法:收集68名病人(流感症状26名,轻症甲流29名,重症甲流患者13名),健康体检者20名;应用流式细胞术检测B%、CD4+T%、CD8+T%以及NK%;应用酶联吸附免疫法检测其血清中TNF-α、IL-12、IL-18的浓度。结果:与健康对照组相比较,流感症状组、轻症甲流组及重症甲流组外周血中B、CD4+T、CD8+T细胞绝对数显著降低(P<0.05);流感症状组和轻症甲流组的NK细胞高于健康对照组(P<0.05),重症甲流组的NK与健康对照组无显著差异(P>0.05);流感症状组、轻症甲流组及重症甲流组血清中细胞因子TNF-α、IL-12、IL-18的浓度均高于健康对照组(P<0.05);而流感症状组、轻症甲流组、重症甲流组之间差异无显著性(P>0.05)。结论:甲型H1N1流感病毒感染后,外周血中TNF-α、IL-12、IL-18等相关细胞因子上升;以及NK细胞增加,B、CD4+T、CD8+T细胞减少。