PM_(2.5)诱导BEAS2B细胞Dnmt1下调激活Foxp3表达分子机制

目的探讨PM_(2.5)激活人正常支气管上皮细胞(BEAS2B)Foxp3表达的分子机制。方法实验设对照组(磷酸盐缓冲液)、PM_(2.5)组(300μg/mL)、5-AzaC组(DNA甲基化转移酶抑制剂,5.0μmol/L)、TSA组(组蛋白去乙酰化酶抑制剂,0.2μmol/L)、PM_(2.5)对照组;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测BEAS2B细胞中Foxp3、HOXA1和HOXA2基因表达,蛋白印迹法(Westerm blot)检测Dnmts相关蛋白表达,甲基化特异性聚合酶链反应(MSP-PCR)检测DNA甲基化水平。结果与对照组比较,PM_(2.5)处理的BEAS2B细胞Foxp3表达量上升1.15倍,差异有统计学意义(P0.05);Dnmt1和Dnmt3b表达量分别下降0.51和0.38倍,Dnmt3a上升1.51倍,差异均有统计学意义(P0.05);5-AzaC或TSA处理后,Foxp3表达量分别上升1.61和1.20倍,差异均有统计学意义(P0.05),并伴随Foxp3启动子区DNA低甲基化及Dnmt1蛋白表达降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 PM_(2.5)可能通过抑制Dnmt1表达激活Foxp3表达。     

肺癌相关lncRNA在PM2.5处理细胞中的表达

目的 探讨PM_2.5对人支气管上皮BEAS2B细胞肺癌相关lncRNA表达的影响。 方法 磷酸盐缓冲液(PBS)处理人正常支气管上皮细胞(BEAS2B细胞)为对照组,300 μg/ml PM_2.5处理BEAS2B细胞为处理组,48 h后用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测lncPVT1、lncUCA1、MIR31HG、lncIRAIN、lncCASC2、lncH19和lncSNHG表达的改变。 结果 与对照组相比,处理组细胞lncPVT1、lncUCA1、MIR31HG和lncIRAIN的表达量均为上升,分别上升了0.93、0.45、2.80和2.94倍,差异均有统计学意义(P<0.05),其中lncIRAIN的表达量上升最为明显。lncCASC2、lncH19的表达量下降,分别下降到0.17和0.08倍,差异均有统计学意义(P<0.05),其中lncH19表达量下降较为明显。 结论 PM_2.5能促进MIR31HG、lncPVT1、lncUCA1和lncIRAIN的表达,抑制lncCASC2和lncH19的表达。     

CpG岛甲基化结合蛋白在氢醌致骨髓增殖性白血病病毒原癌基因转录激活中的作用

目的深入揭示氢醌(HQ)致MPL转录激活的表观遗传学机制。方法以磷酸盐缓冲液(PBS)溶解HQ,以正常TK6细胞、PBS处理细胞为对照组,分别以2.5、5.0、10.0和20.0μmol/L HQ染毒TK6细胞为染毒组。应用实时荧光定量-聚合酶链反应检测甲基化CpG结合蛋白1~5(MBD1~5)的表达。结果与对照细胞相比,MBD1~4的mRNA表达量在所有的HQ处理细胞中全部下降,20.0μmol/L HQ对MBD2和MBD4表达的抑制效果最为明显,抑制率分别为50%和32%(P<0.05);而10.0μmol/L HQ对MBD1和MBD3表达的抑制效果最明显,抑制率分别为36%和33%(P<0.05);MBD5表达无统计学意义(P>0.05)。在MPL的CpG岛内有3个MBD1序列特异性结合位点。结论 HQ致MPL的转录激活可能与MBD1表达异常有关。     

氢醌对DNA甲基转移酶表达的影响

目的探索氢醌(hydroquinone,HQ)致DNA整体低甲基化的分子机制。方法以磷酸盐缓冲液(PBS)溶解HQ,以PBS处理组为对照组,分别以2.5、5.0、10.0和20.0μmo/lL HQ染毒TK6细胞为处理组。应用实时荧光定量-聚合酶链反应检测DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的表达水平。结果与对照组相比,DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的mRNA表达量在各HQ处理组细胞中均下降,其中以20.0μmo/lL组细胞的下降最为明显,分别下降46%(P0.05)、83%(P0.05)和48%(P0.05),且DNMT1和DNMT3a的表达量随着HQ剂量的增加而下降。结论 HQ致DNA整体低甲基化下调机制可能与DNMT1、DNMT3a和DNMT3b表达异常有关。     

白血病相关原癌基因在氢醌处理TK6细胞中的表达

目的探索氢醌(hydroquinone,HQ)致DNA整体低甲基化的后续结果。方法用磷酸盐缓冲液(PBS)溶解HQ,以PBS处理组为对照组,分别以2.5、5.0、10.0和20.0μmol/L HQ染毒TK6细胞为处理组。应用实时荧光定量-聚合酶链反应检测白血病相关原癌基因MPL、BRAF、ERBB2、MYB、MYC和RAF1的表达水平。结果与对照细胞相比,HQ处理细胞MPL和RAF1的mRNA表达量都随HQ剂量增加而上升,其中20μmol/L HQ对原癌基因表达的影响最为明显,分别上升了80%(P0.05)和35%(P0.05);MYB、MYC和ERBB2基因的mRNA表达量随HQ的剂量上升而下降。结论 MPL的转录活化很有可能与HQ导致的DNA整体低甲基化有关。     

NBS1基因8360G＞C(Glu185Gln)多态位点与南方人群肺癌的相关性

目的:研究DNA双链断裂修复基因NBS1编码区8360G＞C(Glu185Gln)多态与我国南方人群肺癌发病的关联.方法:应用病例对照研究方法,采用PCR-RFLP技术检测300例肺癌患者与正常对照8360G＞C多态位点的基因型,用SAS9.13软件分析该位点变异与肺癌发病的关系.结果:NBS1的8360G＞C基因型频率在肺癌与对照中的分布差异有显著性(P =0.0230);携带GC变异基因型个体发生肺癌的危险性是GG基因型携带者的1.28倍(adjusted OR=1.28;95％CI=1.04 - 1.59;P =0.025),携带CC变异基因型个体的危险性则是1.93倍(adjusted OR=1.89;95％CI=1.43 -2.51;P＜0.001),且存在显著的等位基因剂量-效应关联(Ptrend=0.0049).结论:NBS1编码区8360C变异基因型与我国南方人群肺癌发病有关,它可能是我国南方人群肺癌发病的一个遗传相关因素.     

PM_(2.5)暴露BEAS2B细胞lncRNA FENDRR的表达及其分子机制

目的探讨PM_(2.5)激活人正常支气管上皮细胞(BEAS2B)lncRNA FENDRR基因表达的分子机制。方法将BEAS2B细胞分为4组,PBS对照组(磷酸盐缓冲液),PM_(2.5)组(300μg/ml PM_(2.5)染毒48 h),PM_(2.5)+5-氮杂胞苷(5-Aza C,DNA甲基化转移酶抑制剂)组(300μg/ml PM_(2.5)+5.0μmol/L 5-Aza C),PM_(2.5)+曲古抑菌素A(TSA,组蛋白去乙酰化酶抑制剂)组(300μg/ml PM_(2.5)+0.2μmol/L TSA)。用实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测lncRNA FENDRR基因的表达情况,蛋白印迹法(Western Blot)检测HDACs相关蛋白的表达。结果与对照组比较,PM_(2.5)染毒组的BEAS2B细胞lncRNA FENDRR表达上调5.36倍,差异有统计学意义(P0.05),HDAC1和HDAC2的表达均下降。与PM_(2.5)组比较,PM_(2.5)+TSA组lncRNA FENDRR表达上调2.59倍,差异有统计学意义(P0.05),HDAC1和HDAC2表达下降。结论 PM_(2.5)通过抑制HDAC1和HDAC2表达,从而激活lncRNA FENDRR基因的表达。     

低剂量氢醒对TK6淋巴母细胞生物学性状及miR-221表达影响

目的 探讨低剂童氮醌(HQ)对TK6淋巴母细胞的生物学性状及小分子非编码RNA(microRNA)-221(miR-221)表达的影响.方法 磷酸盐缓冲液(PBS)溶解HQ,以PBS处理组为对照组,分别以2.5、5.0和10.0 μmol/L HQ染毒TK6细胞为处理组.应用CCK-8试剂盒检测细胞活力和细胞增殖,通过磷脂结合蛋白(Annexin V)/碘化丙啶(PI)标记的流式细胞技术检测细胞调亡,用实时荧光定童-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测milR-221的表达改变.结果 细胞增殖以48 h最为明显,2.5、5.0和10.0 μmol/L组细胞增殖指数分别为1.33(P<0.05)、1.14(P<0.05)和1.12(P<0.05);milR-221表达改变以72h最为明显,2.5、5.0、10.0 p.μmol/L HQ组细胞milR-221表达量分别抑制了0.31倍(P<0.05)、0.39倍(P<0.05)和0.33倍(P<0.05).结论　低剂量HQ能抑制TK6细胞调亡和milR-221的表达,促进细胞增殖.     

肺癌与人微小RNA miR-499-3p种子序列遗传变异关系

目的 探讨人微小RNA hsa-miR-499-3p种子序列1个常见单核苷酸多态位点(rs3746444A＞G)的遗传变异与中国南方人群肺癌发病的关联.方法 以病例-对照研究方法收集原发性肺癌患者526例及正常对照526人,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态(PCR-RFLP)技术检测hsa-miR-499-3p种子序列的单核苷酸多态( rs3746444 A＞G)的基因型,用SAS 9.13软件进行非条件Logistic回归,校正混杂因素影响,分析基因变异与肺癌发病的关联.结果 以携带野生型纯合子rs3746444AA基因型为参照,携带AG基因型个体发生肺癌的危险度可增加32%(校正OR=1.32,95% CI=1.01～1.84),携带GG基因型的个体患肺癌的危险度增加122%( OR =2.22,95% CI=1.52 ～3.23),且rs3746444 G变异的等位基因个数与肺癌发病危险呈剂量-效应关系(趋势性检验p=3.04 × 10-5).结论 hsa-miR-499-3p种子序列(rs3746444 A＞G)遗传变异可增加人群肺癌发病的危险性.