广州市及周边地区2011年手足口病病原学与分子流行病学调查

目的对广州市及周边地区手足口病（HFMD）的流行病学和病原学特征进行分析。方法收集2011年广州市及其周边地区手足口病病例968份,采用荧光定量RT—PCR方法对采集的标本进行肠道病毒（EV）核酸检测,将其分为肠道病71型（EV71）、萨克奇病毒A组16型（CAl6）、非EV71、CAl6阳性肠道病毒（N）三类,分离部分EV71毒株并进行全基因测序和分析。并用生物信息学软件进行病毒基因特征分析．经在线比对后进行Ev型别鉴定。结果分析显示2011年广州市及周边地区HFMD的高发年龄段为年龄小于4岁的儿童,1．2岁婴幼儿发病率最高;5-7月为发病高峰期;EV71和CAl6为HFMD的主要病原：但有24．79％的病例由其他肠道病毒（EV）型别引起。基于全基因序列构建种系发生进化树显示,所分离的6株EV71毒株与c4亚型毒株具有最近的亲缘性和最高的同源性。结论2011年EV71和CAl6为广州市及周边地区流行的主要病原,EV71病毒株分离株属于c4型,且遗传性较稳定,但存在部分其他型别Ev引起HFMD。     

甲型H3N2流感病毒截短型PB1-F2蛋白与宿主蛋白的相互作用的初步研究

目的利用酵母双杂交技术研究甲型H3N2流感病毒截短型PB1-F2蛋白与人类宿主蛋白的相互作用,为该病毒蛋白的功能研究和致病机制提供理论依据。方法以本实验室分离和鉴定的甲型H3N2流感病毒A／Guangdong／7028／2010为模版,构建pGBKT7-PB1-F2重组载体,利用Y2HGold酵母双杂交系统,从人类通用cDNA文库中筛选与其相互作用的蛋白。结果成功构建含诱饵蛋白基因的pGBKT7-PB1-F2重组载体,转化酵母自激活和毒性实验显示为阴性：酵母双杂交实验显示Y2HGold和Y187酵母的结合率为5．22％,符合实验要求;经筛选和验证后,得到3个与截短型PB1-F2蛋白有相互作用的阳性克隆,分别为钾／钠ATP酶B1亚基、热休克蛋白40和白介素-2受体1亚基。结论初步推断截短型H3N2流感病毒PB1-F2蛋白可能影响流感病毒在宿主细胞中的复制功能和凋亡调控。     

小鼠FasL基因真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达

目的构建含有小鼠Fas Ligand(FasL)基因的重组真核表达载体,并检测FasL蛋白在其稳定转染的HEK293细胞中的表达情况,为构建表达小鼠Fas L的树突状细胞(DC)模型,深入研究DC联合T细胞防治移植物抗宿主病(GVHD)的新方法奠定基础。方法从小鼠脾脏中提取RNA并逆转录为cDNA,以该cDNA为模板扩增FasL基因,插入pcDNA3.1(+)载体中构建pcDNA3.1(+)-FasL重组质粒,利用脂质体将其转染HEK293细胞,用G418筛选稳定表达细胞系,Western blot确定重组蛋白的表达。结果通过酶切及测序证实FasL序列正确插入表达载体pcDNA3.1(+),Western blot检测证实转染重组质粒的细胞能正确表达FasL蛋白,G418筛选后能够得到稳定表达FasL的抗性细胞株即FasL-HEK293。结论重组质粒pcDNA3.1(+)-FasL和稳定表达FasL的HEK 293细胞成功构建,为后续FasL-DC细胞的研究打下了坚实基础。     

Bif-1对前列腺癌LNCap细胞生物学行为的影响

目的研究Bif-1基因的过表达对前列腺癌细胞凋亡、增殖以及迁移过程的影响。方法构建Bif-1基因全克隆并转染LNCap细胞,上调细胞中Bif-1基因的表达水平,通过流式细胞术检测细胞转染前后的细胞凋亡情况;通过MTT法检测细胞的增殖能力变化;通过划痕试验检测细胞迁移能力的变化。结果转染Bif-1基因后,Real-time PCR检测发现LNCap细胞中Bif-1基因mRNA水平△△CT高于对照组10倍以上;Western blotting条带光密度值提高2倍以上。实验组细胞凋亡比例升高至31.90%,细胞增殖能力减弱。实验组和对照组中LNCap细胞划痕愈合速度基本相同,差异无统计意义(P0.05)。结论 Bif-1基因在LNCap细胞中的过表达促进了细胞凋亡,抑制细胞的增殖能力,而对前列腺癌细胞的迁移能力无显著影响。基因有可能作为一个潜在的前列腺癌治疗靶点。     

创办国际数据期刊的实践与思考——以Big Earth Data为例

【目的】 探讨创办国际数据期刊的重要意义与实践途径,以期为我国数据期刊的发展提供参考。【方法】 结合Big Earth Data的创办和出版实践,阐述创办国际数据期刊的必要性与可行性,梳理数据期刊出版政策框架,分析数据期刊发展过程中面临的挑战并提出针对性建议。【结果】 Big Earth Data顺应全球科学数据共享的大趋势创办国际化数据期刊。目前Big Earth Data已建立了较为完善的数据论文投审稿流程,并在数据存储、数据论文标准与格式、同行评议和作者权益管理4个方面制定了数据论文出版政策。【结论】 建设国际数据期刊有利于提升科技期刊的影响力,有助于推动科学数据的共享与传播。相关政府部门、科研资助机构、国内科技期刊应重视数据共享与出版政策的研究与实践,加快推进我国数据期刊的发展。     

甲型H3N2流感病毒截短型PB1-F2蛋白与宿主蛋白的相互作用的初步研究

目的利用酵母双杂交技术研究甲型H3N2流感病毒截短型PB1-F2蛋白与人类宿主蛋白的相互作用,为该病毒蛋白的功能研究和致病机制提供理论依据。方法以本实验室分离和鉴定的甲型H3N2流感病毒A/Guangdong/7028/2010为模版,构建pGBKT7-PB1-F2重组载体,利用Y2HGold酵母双杂交系统,从人类通用cDNA文库中筛选与其相互作用的蛋白。结果成功构建含诱饵蛋白基因的pGBKT7-PB1-F2重组载体,转化酵母自激活和毒性实验显示为阴性;酵母双杂交实验显示Y2HGold和Y187酵母的结合率为5.22%,符合实验要求;经筛选和验证后,得到3个与截短型PB1-F2蛋白有相互作用的阳性克隆,分别为钾/钠ATP酶β1亚基、热休克蛋白40和白介素-2受体γ亚基。结论初步推断截短型H3N2流感病毒PB1-F2蛋白可能影响流感病毒在宿主细胞中的复制功能和凋亡调控。     

Bif-1对前列腺癌LNCap细胞生物学行为的影响

目的研究Bif-1基因的过表达对前列腺癌细胞凋亡、增殖以及迁移过程的影响。方法构建Bif-1基因全克隆并转染LNCap细胞,上调细胞中Bif-1基因的表达水平,通过流式细胞术检测细胞转染前后的细胞凋亡情况;通过MTT法检测细胞的增殖能力变化;通过划痕试验检测细胞迁移能力的变化。结果转染Bif-1基因后,Real-time PCR检测发现LNCap细胞中Bif-1基因mRNA水平△△CT高于对照组10倍以上;Western blotting条带光密度值提高2倍以上。实验组细胞凋亡比例升高至31.90%,细胞增殖能力减弱。实验组和对照组中LNCap细胞划痕愈合速度基本相同,差异无统计意义（P〉0.05）。结论 Bif-1基因在LNCap细胞中的过表达促进了细胞凋亡,抑制细胞的增殖能力,而对前列腺癌细胞的迁移能力无显著影响。基因有可能作为一个潜在的前列腺癌治疗靶点。     

国际数据期刊出版质量控制机制研究

【目的】 通过对国际数据期刊出版质量控制政策的调研与分析,为我国数据期刊的研究与发展提供参考与借鉴。 【方法】 采用网络调查法和内容分析法,对47种国际数据期刊的数据论文提交指南、同行评议方式与标准和作者服务策略三方面的编辑出版政策进行梳理,提炼数据期刊出版质量控制政策的共性要素与特性要素。 【结果】 国际数据期刊的出版质量控制政策着重阐述数据提交规范、数据论文结构(包括传统学术论文继承信息、数据基本信息、数据生产信息、数据重用信息)、同行评议模式、同行评议标准(包括传统学术论文常规审查标准、数据生产方法审查标准、数据审核标准、数据-论文-元数据一致性审核标准),并重视拓展作者服务(提供数据论文写作培训和撰写工具、加强与作者的互动)。 【结论】 数据期刊出版质量控制机制是数据期刊健康发展的重要保障。我国在建设数据期刊时,可参考国际数据期刊已有的良好经验制定出版质量控制政策,使得数据论文编辑出版的各个环节都有章可循、有政策可依。     

铜绿假单胞菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因的研究

目的了解广州地区质粒介导喹诺酮类耐药（PMQR）基因在铜绿假单胞菌中的流行状况并分析其与耐药之间的关系。方法收集2005-2007年临床分离到的212株铜绿假单胞菌,采用K-B纸片扩散法进行药敏试验,通过PCR检测质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS、qnrC、qnrD、aac（6’）-Ib-cr和qepA,并对阳性扩增产物进行DNA测序分析。结果 212株铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率分别为10.8%（23/212）和19.3%（41/212）。qnrB、qnrS和aac（6’）-Ib-cr的阳性率分别为0.9%（2/212）、0.5%（1/212）和0.9%（2/212）,qnrA、qnrC、qnrD、qepA未检出。4株PMQR基因阳性菌株中,仅1株对左氧氟沙星表现为耐药,其余对环丙沙星和左氧氟沙星均表现为敏感。结论 2005-2007年间广州地区铜绿假单胞菌耐药现象严重,该地区铜绿假单胞菌中已携带有PMQR基因,且敏感菌株中也有该类基因存在。     

PSMA基因沉默的前列腺癌细胞中肿瘤转移相关基因表达的芯片分析

目的: 探讨前列腺特异性膜抗原(prostate-specific membrane antigen, PSMA)在前列腺癌转移过程中的作用通路。方法: 针对PSMA mRNA序列设计合成siRNA序列,脂质体转染LNCaP细胞特异性下调PSMA基因的表达,通过肿瘤转移基因芯片分析84个肿瘤转移相关基因的表达差异。结果: 成功设计了siRNA序列并制备最佳干扰效果的干扰样,mRNA干扰效果达到75%以上,蛋白水平干扰效果达68%以上。通过基因芯片检测发现在下调PSMA基因表达后,有CDH6、CXCL12等10个基因发生了显著上调,而CCL7、MDM2等4个基因发生显著下调表达。结论: 初步发现PSMA参与前列腺癌转移信号通路的调节,为进一步研究PSMA的生物学功能,探索前列腺癌的转移机制奠定了基础。