HCMV急性间质性肺炎小鼠模型的建立

目的建立人巨细胞病毒( HCMV)急性间质性肺炎的小鼠模型。方法用5.5×105 PFU的HCMV AD169株尾静脉注射6~8周SPF级BALB/c小鼠作为实验组,同时设立正常细胞作为对照组,分别于接种后第5天和第30天处死小鼠,无菌取小鼠肺组织,通过病毒分离、PCR检测病毒特定保守基因、免疫组化、Western blot和HE染色的方法,观察检测小鼠肺组织中HCMV及其组织病理变化。结果在感染后第5天和第30天实验组小鼠的肺组织中分离出了HC-MV病毒;PCR检测到HCMV 特异性早晚期基因IE和UL55 DNA;Western blot、免疫组化检测到HCMV特异性早晚期蛋白IE和gB;HE染色证实肺组织有明显急性间质性肺炎的病理改变;对照组对应结果全为阴性。结论通过尾静脉注射HCMV AD169株病毒,在感染后第5天成功构建了HCMV急性间质性肺炎小鼠模型,该模型的建立有利于该种疾病的发病机制研究及相关抗病毒疫苗和药物的研发。     

安徽省首起家庭聚集性人感染H7N9禽流感疫情的调查分析

目的对安徽省发生的首起家庭聚集性人感染H7N9禽流感疫情进行现场调查分析,探讨感染来源和传播方式,为今后H7N9禽流感防控与疫情处置工作提供参考。方法应用现场流行病学方法对2例患者的发病就诊经过、可疑暴露史、流行病学关联及密切接触者进行调查;采集病人及相关活禽市场标本,开展流感病毒核酸检测。结果本次家庭聚集性疫情共发病2人,为母子关系;首发病例2月4日发病,发病前有明确的活禽市场暴露史;续发病例2月15日发病,发病前既有活禽市场暴露史,也有与首发病例的密切接触史;共采集相关环境标本38份,其中13份标本检出H7阳性,均来自当地自活禽市场。结论首发病例的感染来源可能为活禽市场暴露,续发病例的感染来源既可能是活禽市场暴露,也可能为人-人传播;在H7N9疫情调查处置中,应做好密接管理和个人防护工作。     

安徽地区腹泻患者感染肠致病大肠埃希氏菌的耐药特征

目的 对安徽地区腹泻患者粪便标本中肠致病大肠埃希氏菌(EPEC)进行检测,了解本地区EPEC的检出情况、耐药特征及耐药机制。方法 使用多重实时荧光定量PCR法对分离疑似菌株进行鉴定,微量肉汤稀释法对EPEC进行药物敏感性检测,使用双纸片扩散法检测ESBLs,采用多重PCR法检测ESBLs基因型;根据药敏结果,进行基因扩增和测序分析检测喹诺酮类耐药基因。结果 2013-2017年,本地区10家哨点医院共检出不典型EPEC 85株,典型EPEC和艾伯特埃希氏菌各1株;87株菌对红霉素、氨苄西林、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑、萘啶酸和头孢噻肟耐药率分别为:100%、51.7%、40.2%、34.5%和20.7%,对亚胺培南、头孢他定、头孢西丁和环丙沙星耐药率分别为:0、3.4%、5.7%和6.9%。87株菌中检测出产ESBLs 18株,TEM阳性14株、CTX-M group 1阳性6株、CTX-M group 9阳性7株。喹诺酮类耐药机制有:药物靶位及编码基因gyrA和parC突变;质粒介导的qnrA、qnrB、qnrS和aac(6′)-Ib耐药基因阳性;药物外排泵qepA和oqxAB基因阳性。结论 EPEC是本地区重要的肠道致病菌之一,对青霉素、红霉素和萘啶酸耐药率较高,对亚胺培南、环丙沙星和阿奇霉素耐药率较低;ESBLs检出率较高,基因型以TEM、CTX-M group 1和CTX-M group 9为主,对喹诺酮类药物耐药机制主要与gyrA、parC突变和Qnr蛋白家族相关,少数与QepA 和OqxAB外排泵相关。     

PCR-核酸飞行时间质谱系统检测新型冠状病毒方法的建立及应用研究

背景　新型冠状病毒肺炎（COVID-19）在全球暴发,实验室检测结果是疾病诊断的重要依据,检测方法的灵敏度和特异度是影响实验结果的关键因素,现实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）核酸检测方法是COVID-19确诊的通用方法,但其检测灵敏度有方法局限性,依赖标本病毒含量。通过对PCR-核酸飞行时间质谱检测方法的优化,从而提高对低新型冠状病毒（SARS-CoV-2）含量病例检测的灵敏度,可为现有方法做有效补充。目的　应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）原理,在Clin-ToF Ⅱ飞行时间质谱系统上,建立PCR-核酸飞行时间质谱（PCR-TOF MS）系统检测SARS-CoV-2的方法,并评估其实际应用价值。方法　2020年2-3月于上海市临床检验中心室间质评阳性样本40份、阴性样本7份,国家卫生健康委员会室间质评阳性样本41份、阴性样本33份,本实验室购买阳性质粒及稀释样本32份,健康人样本28份,空白对照超纯水5份,共186份样本作为建立PCR-TOF MS系统数据。于2020年1-2月收集安徽省内临床送检到安徽省疾病预防控制中心的疑似COVID-19患者上呼吸道样本80份（咽拭子样本55份、痰液样本25份）及健康人群样本20份（均为咽拭子样本）作为评估PCR-TOF MS系统效果的数据。建立PCR-TOF MS系统试验体系步骤,包括PCR扩增、虾碱性磷酸酶（SAP）消化、单碱基延伸和质谱检测;并基于阳性质粒优化模版量,根据186份样本检测质谱峰的信噪比（SNP）确定该方法在SARS-CoV-2检测时的判读标准。对80份疑似SARS-CoV-2样本和20份健康人群样本进行检测分析,并与实时荧光定量PCR法进行对比。结果　通过对PCR-TOF MS 模板条件的优化,模版量6 μl时,扩增产物可获得典型的质谱峰图。建立的PCR-TOF MS反应体系可以对SARS-CoV-2核酸的开放读码框1ab（ORF1ab）基因和核壳蛋白（N）基因进行有效扩增检测。本研究PCR-TOF MS方法对临床疑似病例样本的检出率为90.00%,高于实时荧光定量PCR法的75.00%,同时,结果显示,实时荧光定量PCR法检出中含有25.00%的可疑结果,而PCR-TOF MS则无可疑结果。对于痰液和咽拭子两种样本的检出率,PCR-TOF MS法分别为100.00%和85.45%,高于荧光定量PCR法的64.00%和43.64%。阴性样本两种方法均未检出。结论　通过PCR技术与飞行时间质谱技术的结合,使得检测SARS-CoV-2目标片段指数级扩大,从而提高样本的检测灵敏度。MALDI-TOF MS技术通过对离子分子量的检测分析,具有较高的准确性和特异性,同时证实了痰液样本优于咽拭子样本。该方法可作为实时荧光定量PCR法的补充和协同,在一定程度上有利于弥补假阴性的问题,从而降低临床漏诊率,提高检测效率,为疫情的研判缩短时间。     

安徽省2013-2018年活禽市场H9N2亚型禽流感病毒血凝素基因遗传特征

  目的   分析2013年-2018年安徽省外环境中H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIVs)血凝素(hemagglutinin, HA)基因变异特征。   方法   将所有安徽省禽流感外环境监测点搜集的H9N2亚型核酸阳性样本接种鸡胚分离病毒,病毒RNA逆转录为cDNA后用特异性引物进行扩增,聚合酶链式反应产物通过基因测序后获得HA基因序列,应用分子生物学软件进行分析;使用DATAMONKEY在线服务器进行基因选择压力分析,并使用SWISS-MODLE软件构建分子突变三维构象。   结果   获得33株H9N2 AIVs属于h9.4.2.5进化分支,受体结合位点183、226和227位置分别突变为N、L和M,189和190位置存在多样性;2015年以后分离的毒株均携带6个糖基化位点;选择压力分析得出160位置承受较大的正向选择压力,至少呈现7种空间构象。   结论   安徽省外环境中存在的H9N2亚型AIVs具有感染哺乳动物的分子特征并具备抗原漂移能力,需密切关注该病毒的分子变异特征。      

43例新型冠状病毒肺炎患者血清抗体动态检测结果分析北大核心CSCD

目的观察新型冠状病毒肺炎患者血清中特异性抗体在COVID-19病程发展中的动态变化,比较SARS-CoV-2 IgM等5种抗体的阳性率,分析主要抗体水平在病程不同阶段的消长规律。方法采用磁微粒化学发光免疫分析法对COVID-19患者血清中SARS-CoV-2 IgM、SARS-CoV-2 IgG、SARS-CoV-2 IgA和SARS-CoV-2-RBD Ab以及SARS-CoV-2 NAb中和抗体水平进行动态检测和分析。结果在急性期新冠病人筛查中,SARS-CoV-2 IgG、IgM和IgA抗体检测阴性符合率均达100%,阳性率SARS-CoV-2 IgA为32.56%,与SARS-CoV-2 IgG阳性率13.95%比较差异有统计学意义(P<0.05)。COVID-19重症患者的特异性IgG水平在整个病程中均高于普通型和轻型,SARS-CoV-2 NAb中和抗体水平在发病后1个月和3个月时重症患者均高于轻症和普通型患者(均P<0.05);NAb水平轻症与普通型比较差异无统计学意义(P>0.05);RBD抗体水平在不同患者差异无统计学意义(P>0.05)。SARS-CoV-2 NAb在病程不同阶段均与SARS-CoV-2 IgG和SARS-CoV-2 RBD Ab水平呈正相关。结论新冠患者血清5种抗体的消长规律不同,抗体水平与患者病情严重程度有关。采用磁微粒化学发光法检测SARS-CoV-2抗体可作为人群筛查和辅助诊断指标。     

2020年六安市裕安区固镇镇洪涝灾害公共卫生应急风险评估

目的 评估洪涝灾害后公共卫生风险。方法 采用现场调查、实验室检测和专家会商(风险问题咨询、德尔菲法和风险矩阵法)等结合的方式,对发生洪涝灾害的六安市裕安区固镇镇开展公共卫生风险评估。结果 灾害发生地区低洼地带排水不畅,垃圾多,极易孳生病菌和蚊蝇。自来水出厂水浑浊度及部分末梢水余氯不符合要求,但微生物指标达标。蚊密度高,蝇密度是安全阈值的1.2倍,鼠密度是安全阈值的1.6倍,发生虫媒传染病的风险较高。与洪涝灾害相关的传染病报告数较多的疾病种类为其他感染性腹泻、痢疾、急性出血性结膜炎、流行性出血热、中暑。低风险的有新冠肺炎、急性血吸虫病、食物中毒、霍乱、流行性乙型脑炎、甲肝、伤寒副伤寒、登革热、流行性感冒、肺结核、手足口病等。结论 固镇镇洪灾区存在中暑、皮炎、食物中毒、溺水、毒虫咬蛰伤和痢疾以及虫媒传染病发生的风险。     

2020年安徽省1株候鸟源H5N8禽流感病毒遗传进化特征分析

目的 分析安徽省肥东县候鸟监测站检测的H5N8亚型禽流感病毒(AIVs)的遗传进化特征.方法 从收集的死亡天鹅样本中提取病毒RNA,使用实时荧光定量RT-PCR区分流感亚型,并采用一代测序方法对阳性样本的HA和NA基因扩增后测序,应用生物信息学软件构建系统发育进化树并分析其分子特征.结果 2020年12月1日收到来自安...     

安徽省2013-2021监测年度流感流行特征及感染风险的相关因素分析

目的 分析安徽省流感流行特征与量化不同因素对流感发生的影响,为更好地开展流感防控工作提供科学依据。方法 资料来源于中国流感监测信息系统2013年4月1日至2021年3月31日安徽省网络报告数据,对2013-2021监测年度安徽省的流感样病例(ILI)和RT-PCR结果进行描述性分析和影响因素分析。结果 安徽省2013年4月1日至2021年3月31日哨点医院ILI就诊百分比(ILI%)为3.80%(1 209 142/31 779 987),总体呈上升趋势,其中2017-2018监测年度较高,为4.30%(191 148/4 448 211)。0~4岁婴幼儿的ILI构成比较高(54.14%,654 676/1 209 142);安徽省阜阳市ILI%较高(6.25%,236 863/3 788 863)。实验室监测结果显示,8家流感监测年度哨点医院ILI中流感阳性率为16.38%(34 868/212 912),总体呈逐年上升趋势,其中2017-2018监测年度较高,为26.19%(6 936/26 488)。5~14岁学龄儿童阳性率较高(28.81%,13 869/48 144),16个城市中芜湖市阳性率较高(22.01%,2 693/122 237)。流感活动呈现冬春季单峰与冬春季、夏季双峰的交替,且各亚型交替流行,夏季流感优势亚型为A(H3N2)亚型。多因素logistic回归模型结果显示,2017-2018监测年度、5~14岁儿童、冬季、皖南地区的阳性率更高。结论 2013-2021监测年度安徽省流感流行具有明显的季节性,且在2013-2021监测年度ILI%和流感阳性率呈现上升趋势。因此,提示应在冬春流感季到来之前保障疫苗供应,同时加强疫苗接种健康教育,以避免流感高发期的感染风险。