幽门螺杆菌Catalas/GST融合蛋白的可溶性表达及凝血酶柱上切割GST标签

目的 利用GST融合基因表达系统表达幽门螺杆菌Catalase/GST融合蛋白,并利用凝血酶柱上切割GST标签.方法 将重组表达质粒Catalase/pGEX-4T-1转化大肠杆菌BL21 (DE3)感受态中并用IPTG进行诱导表达,菌体经反复冻融、溶菌酶裂解及超声破菌进行裂解.采用谷胱甘肽琼脂糖树脂Glutathione Sepharose 4B对Catalase/GST融合蛋白可溶性表达上清进行纯化,并同时利用凝血酶柱上切割GST标签,用鼠抗Catalase抗体对纯化产物进行Western blot鉴定.结果 高效表达出相对分子质量约85 kDa的Catalase/GST融合蛋白,以部分可溶性的形式表达,凝血酶柱上成功地切割了GST标签,Catalase蛋白能被鼠抗Catalase单克隆抗体识别.结论 成功表达了Catalase/GST融合蛋白并柱上切割了GST标签,为深入研究Catalase的功能奠定了基础.     

柱上切除GST标签制备幽门螺杆菌Lpp20蛋白

目的 表达幽门螺杆菌Lpp20-GST融合蛋白,获取切除GST标签的重组蛋白。方法 采用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组表达质粒Lpp20/pGEX-4T-1在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,收集菌体并采用反复冻融、溶菌酶裂解及超声破菌3种细胞破碎方法,表达产物在谷胱甘肽琼脂糖树脂4B柱上纯化,利用凝血酶切除GST标签,用鼠抗Lpp20单克隆抗体进行纯化产物western blot鉴定。结果 高效表达出Lpp20-GST融合蛋白,相对分子质量约为4.5 kDa,产物以部分可溶性形式表达,凝血酶成功切除GST标签,纯化产物能被鼠抗Lpp20单克隆抗体识别。结论 凝血酶柱上切除GST标签获得目的蛋白。     

恶性疟原虫核糖核酸酶H2基因的重组质粒构建及其原核表达

目的 构建恶性疟原虫(plasmodium falciparum,P.falciparum)核糖核酸酶H2 (ribonuclease H2, RNase H2)编码基因的重组质粒并在E.coli 中表达.方法 应用PCR技术从P.falciparum 3D7 cDNA文库(MRA-297)扩增RNase H2 编码基...