全长cDNA文库的构建和新基因全长cDNA克隆的策略

基因全长cDNA克隆是研究基因功能的前提之一。新基因全长cDNA克隆的方法很多，目前比较可行且应用较多的主要是cDNA库筛选。本主要介绍了近年来比较常用的全长cDNA库的构建及全长cDNA的克隆(包括“电子”基因克隆)的策略和方法及其进展。     

鼻咽癌患者及其患病风险者红细胞免疫功能研究

目的：探讨红细胞免疫在ＮＰＣ发病中的意义。方法：采用免疫粘附法检测了ＮＰＣ患者和不同滴度ＶＣＡ－ＩｇＡ者的红细胞免疫粘附功能,红细胞免疫调节因子活性。结果：ＮＰＣ患者的红细胞免疫粘附功能下降,红细胞免疫促进因子活性降低,抑制因子活性升高;ＮＰＣ患病风险者的红细胞免疫粘附及其调节功能与ＮＰＣ患者的变化相似,只是程度不同;     

华支睾吸虫表膜相关抗原重组表达载体的构建

目的通过筛选cDNA文库识别华支睾吸虫新基因,并构建20.8?kDa华支睾吸虫表膜相关抗原(CSTA20.8)重组表达载体,为进一步研究其功能及其应用奠定基础.方法对华支睾吸虫cDNA文库进行筛选,通过NCBI和ExPasy网站的Blast程序进行序列比对,识别华支睾吸虫新基因,并应用Motifscan、NCBI Conserved Domain Search等程序对其进行结构域分析.将所发现的华支睾吸虫表膜相关抗原基因编码区定向克隆到原核及真核表达载体PGEX-4T-1和PcDNA3上,构建的PGEX-4T-1-CSTA20.8、PcDNA3-CSTA20.8重组表达质粒经PCR、双酶切及测序证实.结果发现华支睾吸虫表膜相关抗原基因,完整阅读框含555个碱基,编码184个氨基酸,理论分子量为20.8kDa,理论pI为4.33.序列分析表明,华支睾吸虫CSTA20.8编码氨基酸序列与其它物种有较高的同源性,CSTA20.8具有完整的钙结合蛋白保守功能域.所构建的重组原核和真核表达质粒经PCR、双酶切及测序证实与目标基因相符.结论发现华支睾吸虫表膜相关抗原基因,并成功构建原核和真核重组表达质粒.     

华支睾吸虫溶血磷脂酶基因的识别、克隆和序列分析

目的　筛选cDNA文库识别华支睾吸虫新基因 ,并将所发现的华支睾吸虫溶血磷脂酶 (csLysoPLAH)基因编码区克隆到原核表达质粒PGEX 4T 1和真核表达质粒pcDNA3上 ,为进一步研究其功能奠定基础。　方法　对华支睾吸虫cDNA文库进行随机筛选并测序 ,在NCBI和ExPasy网站上进行序列分析 ,识别华支睾吸虫新基因 ,并应用Motifsan、NCBIConservedDomainSearch等程序对其进行结构域分析。根据PGEX 4T 1和 pcDNA3上的克隆位点及所发现的csLysoPLAHcDNA编码序列设计引物 ,进行PCR扩增 ,扩增产物回收纯化后克隆到原核表达载体PGEX 4T 1和真核表达载体 pcDNA3上。构建的PGEX 4T 1 csLysoPLAH、pcDNA3 csLysoPLAH重组表达质粒经PCR、双酶切及测序证实。　结果　发现csLysoPLAH基因 ,完整阅读框含 70 8个碱基 ,编码 2 3 5个氨基酸 ,理论分子质量为 2 5 .2 62 8ku ,理论pI为6.0 3。序列分析表明 ,csLysoPLAH编码氨基酸序列与其它物种有较高的同源性 ,csLysoPLAH具有磷脂酶 /羧酸酯酶保守功能域和完整的脂酶保守功能域 ,并含有丝氨酸酯酶特征性的标签肽 (即GXSXG)。所构建的重组原核和真核表达质粒经PCR、双酶切及测序证实与目标基因相符。　结论　发现华支睾吸虫溶血磷脂酶基因 ,并成功构建原核和真核重组表达质粒。     

VCA-IgA阳性者红细胞免疫功能及T细胞亚群的观察

观察了临床无鼻咽异常疾病的ＶＣＡ ＩｇＡ阳性者的红细胞免疫功能、红细胞免疫调节因子活性、Ｔ细胞亚群的变化及其相互关系。结果显示，临床确无鼻咽部异常疾病而ＶＣＡ ＩｇＡ阳性者的红细胞免疫功能和Ｔ细胞免疫功能均属低下，提示对这类人群应予长期随访。     

转变管理模式 促进实验室建设

医学检验教育的目标是培养具有较高理论水平及熟练实验技能的检验专业人才。加强医学检验实验教学是促进医学检验教育事业发展的关键。这就对作为培养熟练实验技能的基地──检验专业实验室提出了比一般基础医学实验室更高的要求。我院检验系实验室建立的时间短，基础设施、实验器材、实验技术人员等不同程度地需要进～步充实和完善；面对这一情况，如何充分发挥现有实验室的作用，使其最大限度地为教学服务，是一个重要课题。我系几年来不断探索加强实验室管理的途径，摸索出一条适合我系实验室现状的管理模式，即推行以系为基础、统一实验…     

华支睾吸虫3-磷酸甘油酸激酶基因的扩增、克隆及表达

目的　构建编码华支睾吸虫3磷酸甘油酸激酶基因的原核表达载体,并分析其在大肠埃希菌中的表达。　方法　用Trizol法从华支睾吸虫 3成虫体内提取总RNA,并将其反转录成cDNA。根据华支睾吸虫磷酸甘油酸激酶的已知基因,利用DNAclub和PCRdesign软件设计合成一对特异引物 ,从合成的cDNA中,用PCR技术扩增出目的片段。将目的片段和原核表达载体同时双酶切后连接,重组体转入JM109大肠埃希菌,用双酶切、PCR和测序筛选阳性克隆。挑选1个阳性菌落,用异丙基βD硫代半乳糖苷诱导表达,表达产物进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)鉴定。　结果　用逆转录聚合酶链反应技术扩增出1条1248bp大小的片段,PCR产物测序鉴定正确;转化后得到10个克隆,双酶切、PCR扩增鉴定,其中6个为阳性克隆;表达产物用SDS PAGE鉴定,在相对分子质量70000处有1条与理论预测的融合蛋白大小相一致的特异条带。　结论　成功构建重组原核表达载体pGEX4T1PGK,所表达的蛋白为含有谷胱甘肽的融合蛋白     

鼻咽癌患者T细胞,巨噬细胞及红细胞免疫功能研究

目的　探讨鼻咽癌患者体内多种免疫效应细胞功能的变化规律及其临床意义。方法　分别采用ＡＰＡＡＰ法、斑蝥皮泡法、免疫粘附法及酶免法检测了２９ 例鼻咽癌患者Ｔ细胞亚群、巨噬细胞吞噬率（ＰＲ）及吞噬指数（ＰＩ）、红细胞免疫粘附功能及血清ｓＩＬ２Ｒ水平,并分析其相互关系。结果　鼻咽癌组病人ＣＤ＋３ 细胞、ＣＤ＋４ 细胞、ＣＤ＋４ ／ＣＤ＋８ 比值降低、ＣＤ＋８ 细胞升高,与对照组比较有显著差异（Ｐ＜ ０．０１）;鼻咽癌患者ＰＲ与ＰＩ均显著低于对照组（Ｐ＜ ０．０１）;鼻咽癌组红细胞Ｃ３ｂ 受体花环率（Ｃ３ｂ ＲＲ）显著低于对照组（Ｐ＜ ０．０１）,循环免疫复合物花环率（ＩＣＲ）则显著高于对照组（Ｐ＜ ０．０１）;鼻咽癌患者血清ｓＩＬ２Ｒ明显升高。Ⅲ期以上的鼻咽癌患者与Ⅱ期以下组比较上述免疫指标均有显著差异（Ｐ＜ ０．０１）。鼻咽癌组Ｃ３ｂ ＲＲ与ＰＲ及ＣＤ＋４ ／ＣＤ＋８ ,ＰＲ与ＣＤ＋４ ／ＣＤ＋８ 正相关。ｓＩＬ２Ｒ与Ｃ３ｂＲＲ、ＰＲ及ＣＤ＋４ ／ＣＤ＋８ 均显著相关（Ｐ＜ ０．０５）。结论　鼻咽癌患者多种免疫效应细胞功能下降,并随病情进展,免疫功能进一步下降。对鼻咽癌患者多种免疫效应细胞功能的联合检测有助于了解患者免疫功能的整     

检验系学生毕业操作考试探讨

医学检验专业学生的培养方向是检验医师（Clinicallabortorypsthologist）。我们所培养的人才，不但要掌握系统的医学和检验理论知识，而且要有较强的动手能力。通过前期几年的理论学习，学生掌握了基本理论知识，所以，实习这一年，我们希望学生将所学的理论知识应用于实际，同时强化操作训练。针对前几届本科班实习生重论文而轻操作、专科班学生重毕业理论考试而轻操作技能训练的现象，检验系对毕业考核制度进行了改革，增加了操作技能考试方案。实践证明，这种方法是行之有效的，学生在实习期间做到了理论与实践并重，收到了良好的效果…