组蛋白乙酰化转移酶GCN5活性促神经元存活

目的探讨GCN5活性对神经元存活和凋亡的作用。方法体外培养小脑颗粒神经元,用GCN5抑制剂CPTH2和MB3处理神经元24 h后,核染色检测神经元的凋亡率,Western blot检测H3K9的乙酰化及Caspase 3活性。结果 CPTH2和MB3浓度依赖抑制了H3K9乙酰化,CPTH2和MB3浓度和时间依赖地诱导了神经元凋亡(P0.05),且激活了Caspase 3。结论 GCN5活性对神经元存活起关键作用。     

甲基化转移酶G9a介导的组蛋白修饰事件调控ATF3表达及神经元凋亡

目的探讨协同c-Jun/ATF2调控ATF3表达的染色质重塑事件及对神经元凋亡的作用。方法小脑颗粒神经元凋亡刺激后检测组蛋白H3乙酰化水平的变化与ATF3表达的变化。G9a抑制剂BIX-01294处理神经元,Western Blot检测ATF3的表达、H3的甲基化变化,核染色检测神经元的凋亡率。结果神经元凋亡时诱导ATF3表达,H3第4位赖氨酸乙酰化修饰(methyl-H3-K4)增加。BIX-01294浓度依赖地抑制H3第4位赖氨酸甲基化修饰,抑制ATF3表达,抑制神经元凋亡(P<0.05)。结论神经元凋亡时,G9a介导的H3第4位赖氨酸甲基化修饰调控ATF3表达及凋亡发生。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂对胶质瘤细胞增殖及MKK7表达的影响

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histone deacetylase inhibitor, HDACI）对胶质瘤细胞增殖及MKK7表达的影响。方法 体外培养神经胶质瘤细胞株U251,用脂质体转染MKK7-siRNA1、MKK7-siRNA2和对照siRNA,48 h后Western blot检测MKK7表达及JNK/c-Jun活性,BrdU掺入实验检测细胞增殖情况;用0.5 μM组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A（trichostatin A, TSA）处理细胞8 h,DMSO作对照,Western blot检测MKK7、p-JNK、JNK、p-c-Jun、c-Jun表达或磷酸化水平;用TSA分别处理细胞8、12、24 h,检测各时间点细胞增殖率;用其他组蛋白去乙酰化酶抑制剂包括伏立诺他（suberoylanilide hydroxamic acid, SAHA）,丙戊酸（valproic acid, VPA）,M344处理细胞检测MKK7表达及细胞增殖。结果 同对照组相比,沉默MKK7表达抑制了JNK/c-Jun活性和细胞增殖（P=0.008）;TSA处理细胞8 h显著抑制MKK7表达及JNK/c-Jun活性,SAHA、M344、VPA均显著抑制MKK7表达。TSA处理细胞8 h没有抑制细胞增殖,处理12 h显著抑制增殖（P=0.006）, 24 h抑制效应更明显（P=0.002）; SAHA（P=0.001）, M344（P=0.008）或VPA（P=0.002）处理细胞12 h均抑制了细胞增殖。结论 组蛋白去乙酰化酶抑制剂可通过抑制MKK7表达抑制神经胶质瘤细胞增殖。