临床白念珠菌耐药性与ERG3基因突变及表达的关系

目的明确白念珠菌ERG3基因突变及高表达对抗真菌药物耐药的调控作用。方法用微量稀释法测得36株临床分离白念珠菌的最小抑菌浓度（MIC）;提取基因组DNA,PCR基因扩增,将扩增后的产物纯化测序,并与genbank中已知的标准序列（AF069572）进行BLAST比对分析;采用实时定量PCR（RT—PCR）方法,对白念珠菌ERG3基因表达的mRNA进行相对定量分析。结果36株白念珠菌ERG3基因序列共发现6个突变位点,其中19株发生同义突变,突变位点为T51C、T432C、T381C、C438T、T1044C;2株发生错义突变,突变位点为C1052T,并产生耐药;白念珠菌对氟康唑耐药组ERG3高表达的发生率高于敏感组（P〈0．05）。结论ERG3基因突变及高表达增加了抗真菌药物的耐药性。同时有多种调节机制共同参与白念珠菌耐药性的形成。     

匍行性血管瘤1例

患者女,37岁,左侧躯干及上下肢弥漫性红色斑片30余年,无不适。皮肤科情况:左侧躯干及上下肢可见泛发不规则红色斑片,右腰背部可见小面积受累,边界清楚,压之退色,其间可见不规则片状正常皮肤。皮损组织病理示:表皮大致正常,真皮乳头内可见扩张的管腔,腔内充满红细胞,管壁由单层内皮细胞组成,部分内皮细胞肿胀。诊断:匍行性血管瘤。     

疥疮1例及皮肤镜表现

<正>患者男,48岁。主诉:躯干及手指缝丘疹,阴部结节,伴瘙痒半年。现病史:患者半年前腰部、腹部及双手指缝散发红色丘疹,伴有剧烈瘙痒,尤以夜间为甚,外院按"皮炎湿疹类疾病"治疗未见好转,且皮损逐渐增多,累及躯干、双大腿内侧及臀部,呈肤色或暗红色丘疹,可见抓痕及血痂,阴茎和阴囊新发结节,瘙痒剧烈,以夜间明显,为求进一步诊治于2016年6月6日来我院就诊。既往史、个人史及家族史:2005年于本院诊断为结肠绒毛腺管状腺瘤,予手术切除后病情控制可。否认其他遗传病史,家族中无类似疾病患者。     

白念珠菌ERG11基因突变及高表达对耐药的影响

目的 探讨白念珠菌ERG11基因突变、高表达及二者的相互作用在氟康唑耐药中的作用.方法 采用PCR法扩增实验菌株的ERG11基因,并进行测序及生物信息学分析,筛查突变位点;抽提实验菌株总RNA,并逆转录合成cDNA,采用实时荧光定量PCR（FQ-RT-PCR）法检测ERG11基因的表达水平.结果 24株临床菌株中,共检测出ERG 11基因存在24个同义突变位点和5个错义突变位点,其中,E174A、T123I、V234F为新发位点;白念珠菌ERG11基因在耐药组中的表达量高于敏感组,差异具有统计学意义未发生错义突变的白念珠菌耐药株ERG11基因的表达量高于发生错义突变的,差异具有统计学意义.结论 白念珠菌ERG 11基因的5个错义突变A114V、E174A、T123I、Y132H、V234F可能与氟康唑耐药形成有关;ERG11基因的高表达可能与氟康唑耐药有关;ERG11基因的错义突变可能对该基因的高表达存在抑制作用.     

VVC患者临床分离白念珠菌Cap1、Mrr1和MDR1在唑类药物交叉耐药中的作用

目的探讨白念珠菌锌簇转录因子Cap1、Mrr1基因突变／高表达及外排泵基因MDR1的mRNA表达水平在唑类抗真菌药物氟康唑（FCA）、伊曲康唑（ITR）、伏立康唑（VRC）交叉耐药中的作用。方法收集山西医科大学第二医院皮肤性病科门诊疑似外阴阴道念珠菌病（VVC）患者阴道分泌物标本,进行真菌直接镜检、培养、分离鉴定和体外药物敏感性试验,获得试验用白念珠菌耐药和敏感菌株共68株。采用PCR方法扩增68株白念珠菌临床分离菌株Cap1、Mrr1基因,并进行双向测序,应用Blast软件,将测序结果与GenBank中已发表的序列进行比对,分析基因突变情况,实时荧光定量PCR检测锌簇转录因子Cap1、Mrr1和外排泵基因MDR1的mRNA表达水平。结果Cap1测序中1株ITR、VRC交叉耐药菌株出现P311S错义突变。Mrr1测序中1株FCA、ITR、VRC交叉耐药菌株出现5个错义突变（T917M,I＇923I,E1020Q,F1032L,S1037L）;FCA、ITR、VRC交叉耐药菌株组中Cap1／Mrr1／MDR1的mRNA表达量分别高于敏感菌株组;CA、ITR、VRC交叉耐药菌株组Cap1和MDR1（r=0．173,P=0．571）,Mrr1和MDR1（r=-0．091,P=0．766）,Cap1和Mrr1基因（r=0．025,P=0．936）的mRNA表达量不相关（均P〉0．05）。结论Cap1和Mrr1的突变可能和唑类药物交叉耐药有关。     

临床分离白念珠菌ERG4基因高表达与唑类抗真菌药物耐药的关系

目的 探讨临床分离白念珠菌ERG4基因高表达与唑类抗真菌药物耐药的关系。 方法 M27-A2微量肉汤稀释法对34株临床分离白念珠菌菌株进行体外药物敏感性试验。抽提白念珠菌ERG4基因的总RNA,并逆转录合成cDNA,采用实时荧光定量PCR（FQ-RT-PCR）方法检测ERG4基因mRNA表达水平。结果 白念珠菌耐氟康唑菌株组ERG4基因表达量（4.20 ± 2.56）高于敏感组（1.72 ± 1.33）（t = 3.99,P < 0.05）;耐伊曲康唑组（3.60 ± 2.47）高于敏感组（1.66 ± 1.61）（t = 3.71,P < 0.05）;耐伏立康唑组（3.99 ± 2.72）高于敏感组（2.07 ± 1.58）（t = 2.91,P < 0.05）;对氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑同时耐药菌株组（4.49 ± 2.73）显著高于敏感组（1.69 ± 1.82）（t = 3.81,P < 0.05）。 结论 临床分离白念珠菌耐药菌株ERG4基因高表达与氟康唑、伊曲康唑和伏立康唑耐药及交叉耐药有关,但白念珠菌ERG4基因高表达在耐药中的作用还有待于通过基因下调进一步研究证实。     

临床体液标本侵袭性真菌感染的早期分子学诊断研究

目的 探讨采用PCR方法检测临床体液标本真菌感染的可行性.方法 对60例可疑侵袭性真菌感染者无污染体液标本进行真菌直接镜检及培养,同时应用真菌通用引物ITS4和ITS86对临床体液标本进行PCR检测,分析二者检测结果的差异.结果 临床含真菌体液标本直接进行PCR扩增的片段大小均与阳性对照DNA扩增结果一致.且PCR扩增的阳性率与真菌直接镜检、培养方法阳性率相近[38.3％ (23/60) vs 33.3％ (20/60),P＞0.05].结论 侵袭性真菌感染采用真菌ITS通用引物进行PCR扩增,能准确、快速地检测出致病真菌,其方法对侵袭性真菌感染的早期诊断与预后具有指导意义.