流感病毒咽拭子处理方式对其病毒分离率影响的研究

目的 通过采用咽拭子中加入青链霉素混合液或使用过滤器直接过滤标本的方式,对比两种处理方法对流感病毒分离率的影响。 方法 选择2017年10月1日至12月31日贵阳市哨点医院及各区、市、县疾控中心采集的流感样病例(ILI)咽拭子中PCR核酸检测阳性的标本200份,将同一份标本分为两份,一份加入青链霉素混合液（双抗）4℃过夜,另一份使用0.22μm的过滤器直接过滤标本,采用 MDCK 细胞进行流感病毒的分离培养,通过观察CPE（细胞病变效应）确定病毒收获时间进行HA（血凝）试验,并对病毒液进行无菌试验。 结果 （1）200份标本经两种方法分别处理后,双抗组病毒液受细菌污染数为37瓶,病毒液污染率为18.5%;过滤膜处理组病毒液受细菌污染数为4瓶,病毒液污染率为2%,双抗处理组污染率高于过滤膜处理组,差异有统计学意义（〖XC小五号.EPS;P〗=29.594, P=0.000<0.05）;（2）去除污染的毒株后,双抗处理组分离流感病毒97株,分离率为48.5%;过滤膜处理组成功分离流感病毒102株,则病毒分离率为51.0%,滤膜处理组病毒分离率与双抗处理组比较,差异无统计学意义（〖XC小五号.EPS;P〗=0.250,P=0.617>0.05）。 结论 两种方法处理流感病毒咽拭子标本后,病毒分离率无明显差异,但使用过滤器直接过滤标本的方式可显著降低病毒分离期间被细菌污染的风险。     

2015-2018年贵阳市水产品中致泻性弧菌监测

目的分析2015—2018年贵州省贵阳市水产品中致泻性弧菌污染情况,为贵阳市制定针对性的公共卫生防控措施提供依据。方法随机采集贵阳市水产品市场和餐馆的水产品检测致泻性弧菌,分析致泻性弧菌在贵阳市的污染和流行状况。结果 2015—2018年共采集960份样品,检出致泻性弧菌17株,各年检出率分别为2.50%,0.42%,2.92%和1.25%,差异无统计学意义(χ2=5.450,P0.05);不同种类水产品阳性检出率两两比较,甲鱼与贝类之间(χ2=11.301)和甲鱼与鱼类之间(χ2=6.490)阳性检出率差异有统计学意义(P0.05),其他几种水产品之间两两比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论贵阳市水产品中存在致泻性弧菌污染,检出率低于其他地区;建议有关部门加强对水产品批发和销售市场环境的消毒及监测。     

燃煤污染型氟中毒人群尿氟与骨代谢损伤指标相关关系及其基准剂量分析

目的将基准剂量法应用于燃煤氟暴露人群,探讨燃煤氟污染致暴露人群骨代谢损伤的生物暴露限值,为燃煤氟致骨损伤的防治提供参考依据。方法以贵州省燃煤污染型氟中毒病区295例氟暴露者为氟暴露组,非氟污染区85例居民为对照组。在知情同意原则下,采集调查对象尿液和血液样本,采用氟离子电极法测定尿氟含量,以酶联免疫吸附试验测定血清骨钙素含量,以微量酶标法检测碱性磷酸酶活力。分析尿氟与骨代谢损伤指标之间关系,并应用BMDS 2.6.0.1软件计算基准剂量(BMD)、95%的可信限下限值(BMDL)。结果按尿氟分组后,随着尿氟浓度的升高,血清骨钙素和碱性磷酸酶水平逐渐升高,存在剂量-效应关系,差异有统计学意义(P0.05)。骨钙素与碱性磷酸酶的尿氟BMD与BMDL分别为0.581、0.412 mg/g Cr和2.374、1.362 mg/g Cr。结论建议燃煤氟暴露引起人群骨代谢损伤的尿氟生物暴露限值为0.412 mg/g Cr;骨钙素可作为氟暴露早期效应指标和氟接触高危人群的敏感筛选指标。     

HDAC1在燃煤污染型氟暴露人群及染氟人原代成骨细胞中的转录及表达

目的本研究以燃煤污染型氟人群和原代人成骨细胞为研究对象,检测氟暴露对组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylase1,HDAC1)m RNA转录及蛋白的表达的影响,从人群和细胞两个体系探讨HDAC1基因在地方性氟中毒发生发展中的作用。方法选择贵州省燃煤污染型地方性氟中毒病区295例氟暴露人群及非氟暴露区85例村民作为调查对象,在知情同意的原则下,采集调查对象的尿液及外周血。依据尿氟(UF)含量将调查对象分为正常尿氟组(UF1.96 mg/g Cr,140例)、低氟组(1.96 mg/g Cr≤UF3.92 mg/g Cr,93例)、中氟组(3.92 mg/g Cr≤UF7.84 mg/g Cr,82例)和高氟组(UF≥7.84 mg/g Cr,65例)。同时以0、125、250、500、1 000μmol/L氟化钠处理人原代成骨细胞72 h。采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测氟暴露人群外周血及染氟人原代成骨细胞HDAC1 m RNA水平,以酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫印迹法(Western-blot)分别检测外周血、成骨细胞HDAC1蛋白表达。结果调查对象外周血HDAC1 m RNA转录水平各组间比较差异有统计学意义(F=16.502,P0.05),低、中、高尿氟组HDAC1 m RNA水平均低于正常尿氟组(P0.05);外周血HDAC1蛋白表达,各组间比较差异有统计学意义(F=4.885,P0.05),低、中、高尿氟组HDAC1蛋白含量均高于正常尿氟组(P0.05)。氟化钠处理人成骨细胞72 h后,HDAC1 m RNA水平,组间比较差异有统计学意义(F=226.81,P0.05),随着染氟浓度的升高,HDAC1 m RNA转录水平逐渐升高(P0.05);HDAC1蛋白表达组间比较差异有统计学意义(F=20.60,P0.05);随着染氟浓度的升高,HDAC1蛋白表达水平逐渐升高(P0.05)。结论 HDAC1参与氟中毒的发生发展过程,其蛋白表达增强可能是氟骨症发生的早期分子事件。     

氟化钠对人成骨细胞CyclinD1基因启动子区甲基化及其转录表达的影响

目的构建人原代成骨细胞氟中毒模型,检测不同剂量氟化钠对人成骨细胞中CyclinD1基因启动子区甲基化、mRNA转录及蛋白表达的影响,从细胞周期调控基因的表观遗传学角度探索氟中毒发生机制。方法在知情同意原则下,收集贵州航空工业集团贵阳医院骨科外伤手术健康人(车祸)髂骨或股骨松质骨。采用酶消化法分离人原代成骨细胞,以碱性磷酸酶及钙化结节染色进行细胞鉴定;以0、125、250、500及1 000μmol/L氟化钠处理细胞72 h。以硫化测序PCR法(bisulfite sequencing PCR,BSP)检测CyclinD1基因启动子区甲基化状态;以实时荧光定量PCR(QT-PCR)检测CyclinD1基因转录mRNA相对表达量;以免疫印迹法(Western-blotting)检测CyclinD1蛋白表达。结果分别以0、125、250、500及1 000μmol/L氟化钠处理细胞72 h后,CyclinD1基因启动子区未检测到甲基化;CyclinD1基因mRNA转录相对表达量在0、125、250、500及1 000μmol/L Na F剂量组分别为0.414±0.093、0.742±0.089、0.796±0.122、1.114±0.260、1.140±0.171,NaF剂量组均高于对照组(F=18.89,P0.05)。CyclinD1蛋白相对表达量分别为0.304±0.014、0.395±0.020、0.511±0.042、0.565±0.028、0.719±0.047,NaF剂量组均高于对照组(F=71.80,P0.05)。CyclinD1基因转录mRNA及其蛋白表达随氟化钠剂量的升高均相应上升(P0.05)。结论氟化钠上调人成骨细胞中CyclinD1基因转录与表达,是氟致人成骨细胞增殖能力及细胞周期时相分布发生改变的重要分子机制之一,但未观察到CyclinD1基因启动子区甲基化参与其表达上调过程。