茶多酚对60Co γ辐射诱发CHL细胞染色体畸变和微核形成作用的影响

目的 研究茶多酚（tea polyphenols,TP）对60Coγ辐射诱发中国仓鼠肺成纤维细胞（Chinese hamster fibroblast cell line,CHL）染色体畸变和小鼠骨髓微核形成作用的影响。方法 将CHL细胞（±S9）分为空白对照组、阳性对照组、辐射模型组,TP保护组（分别加TP12.5、25、50 μg/ml）6组,除空白和阳性对照组外均给予2 Gy ⁶⁰Co γ照射后继续培养24 h,常规制备染色体,观察畸变类型并计算畸变率。50只KM小鼠分为正常对照组、辐射模型组,TP保护组（高、中、低剂量分别于照射后给TP725、145、29 mg/kg灌胃）,每组10只,给药后14天给予6 Gy ⁶⁰Co γ照射,24 h后处死动物,取双侧股骨,行骨髓涂片和姬姆萨染色,计数含微核嗜多染红细胞（polychromatic erythrocyte,PCE）数。结果 中、高剂量组TP（25、50 μg/ml）可显著降低⁶⁰Co γ诱发的CHL染色体畸变率,S9不影响CHL细胞染色体畸变形式和畸变率。高、中剂量TP保护组（725、145 mg/kg）小鼠PCE微核率与辐照模型组相比较,相差显著（P<0.05）。结论 茶多酚能部分对抗⁶⁰Co γ辐射诱发的CHL细胞染色体畸变和微核形成,对染色体损伤具有保护作用。     

miR-34 a通过ERK1／2通路部分逆转CEES染毒对角质形成细胞迁移的抑制

目的：研究半硫芥（2-氯乙基乙基硫醚,2-chloroethyl ethyl sulfide ,CEES）染毒对角质形成细胞迁移的影响以及miR-34a作用机制。方法体外建立CEES染毒HaCaT细胞模型,采用化学合成miR-34a抑制物转染HaCaT细胞沉默miR-34a,荧光显微镜观察细胞转染效率,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Western 印迹检测细胞分化标志物K5和K10、ERK1／2总蛋白及磷酸化水平改变。结果采用0．5 mmol／L CEES染毒后HaCaT细胞迁移显著降低。细胞形态、干性标志物K5和分化标志物K10没有明显变化。 miR-34 a沉默可以增加细胞迁移能力,迁移相关的信号蛋白ERK1／2通路激活,ERK1／2信号通路抑制剂U0126使用后可以显著降低细胞迁移。结论 miR-34 a沉默可以显著增加角质形成细胞迁移,并部分逆转CEES的抑制作用,miR-34a沉默可能部分是通过ERK1／2信号通路激活引起染毒细胞迁移增加。     

腺嘌呤碱基编辑器纠正人胚胎G6PC3基因致病突变北大核心CSCD

目的研究腺嘌呤单碱基编辑器(ABE7.10)对人G6PC3基因致病性突变纠正的可行性。方法构建不同sgRNA的表达载体,分别在人HEK293T突变模型和人类胚胎中尝试纠正的可行性和编辑效率,通过深度测序进行脱靶分析。结果①成功构建了G6PC3^(C295T)的突变细胞模型。②构建了三个不同的Re-sgRNA,并在G6PC3^(C295T)突变细胞模型中实现了纠正,碱基纠正效率为8.79%~19.56%。③人致病胚胎实验证明ABE7.10能有效纠正突变碱基,但同时在其他位置也发生了碱基编辑事件。④深度测序分析显示,对32个潜在脱靶位点检测,除1个非编码区位点转换效率为1.03%外,其余均低于0.5%,具有较高的安全性。结论该研究提出了一种新的基于人类致病胚胎的碱基纠正策略,但也产生了一定的非目标位点编辑,后续还需在PAM位点或者编辑器的窗口上进行进一步研究。