利福平通过促进自噬保护帕金森病模型细胞损伤

目的: 探讨利福平对α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)多聚体水平的影响及其与细胞自噬的关系。方法: 用不同浓度鱼藤酮、利福平、自噬抑制剂氯喹和自噬促进剂雷帕霉素处理SH-SY5Y细胞,MTT法检测细胞存活率,筛选最佳实验浓度;蛋白质印迹法检测氯喹和雷帕霉素处理后不同时间点细胞内Beclin-1表达水平,确定最佳作用时间;蛋白质印迹法检测鱼藤酮、氯喹和雷帕霉素处理后Beclin-1和α-syn多聚体的表达;将SH-SY5Y细胞分为对照组、鱼藤酮组、利福平+鱼藤酮组和利福平组,流式细胞术检测4组细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测α-syn多聚体及自噬标志蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、p62的表达;在上述分组基础上,蛋白质印迹法检测氯喹和雷帕霉素预处理后各组细胞α-syn多聚体的表达。结果： 利福平浓度为150 μmol/L时细胞存活率最高;氯喹、雷帕霉素调节自噬的最佳处理条件分别为10 μmol/L(1 h)、10 nmol/L(2 h);与对照组相比,鱼藤酮、氯喹均能显著增加细胞内α-syn多聚体表达(P均＜0.01),降低Beclin-1表达(P均＜0.05),雷帕霉素能显著提高Beclin-1表达(P＜0.01);与对照组比较,鱼藤酮组细胞凋亡率明显上升(P＜0.05),p62和α-syn多聚体表达增加,Beclin-1和LC3-Ⅱ/Ⅰ表达明显降低(P均＜0.01);与鱼藤酮组相比,利福平+鱼藤酮组细胞凋亡率明显降低(P＜0.05),p62和α-syn多聚体表达明显减少,Beclin-1和LC3-Ⅱ/Ⅰ表达明显升高(P均＜0.01);与利福平+鱼藤酮组比较,氯喹预处理后α-syn多聚体表达明显增加(P＜0.01)。 结论： 利福平能减少鱼藤酮诱导的多巴胺能神经元凋亡,可能通过促进细胞自噬降低α-syn多聚体表达。     

呼吸机报警的临床分析

目的根据临床常见呼吸机报警情况讨论常见报警的原因,保障患者机械通气治疗的有效性及安全性。方法归纳81例使用气管插管呼吸机辅助通气患者,分析其中出现报警的51例患者,总报警例数138例的报警原因。结果 138例报警中,报警项目以高压报警最常见,占41.30%,报警原因中以镇静不恰当、呼吸机参数设置不合理等原因最为常见。结论在有创机械通气过程中,有效判断、及时准确的处理各项呼吸机报警,对保障患者呼吸机治疗的有效性和安全性至关重要。     

脓毒症患者外周血红细胞膜磷脂酰丝氨酸的外露

目的研究脓毒症患者外周血红细胞的形态改变及红细胞膜表面磷脂酰丝氨酸（PS）的外露情况。方法采用配对设计随机分组方法,分别对正常对照组（n=30）和脓毒症患者组（n=30）进行静脉采血,行瑞氏染色血涂片观察和测定红细胞聚集指数,并采用对Ps有高度亲和力的磷脂结合蛋白AnnexinV检测技术,利用流式细胞仪对红细胞进行荧光测定。结果显微镜下观察脓毒症患者外周血红细胞形态发生明显异常改变,呈棘形、泪滴形、球形、缗线形等变化,细胞明显聚集;同时红细胞聚集指数测定结果显示脓毒症组较正常对照组也明显升高,其差异有统计学意义（P〈0．05）。脓毒症组Ps外露的红细胞比例明显高于正常对照组,其差异有统计学意义（P〈0．001）。结论脓毒症患者外周血红细胞表面Ps的外露表达明显增加,同时红细胞形态发生明显异常变化。     

危重症病人早期肠内营养联合新斯的明疗效观察

目的:探讨早期肠内营养(EEN)联合新斯的明足三里注射对危重症病人救治的效果。方法:80例危重症病人随机分为EEN组和EEN+新斯的明组,每组40例。两组均给予等热量、等氮量的EN支持。EEN+新斯的明组病人同时行双侧足三里穴位注射新斯的明各0.5 mg,每2 d一次,连用14 d。病人分别于EN支持前和EN支持后第1、7、14和21天检测血清清蛋白(ALB)、血红蛋白(Hb)、淋巴细胞计数(PLT)、氮平衡(NB);EN支持后第14和21天测定免疫学指标(lgM,lgG,lgA)和T淋巴细胞亚群(CD3、CD4、CD8、CD4/CD8比值)。并记录EN使用期间达TEN时间、EEN达标率和EN并发症的发生率等临床指标。结果:两组病人EN治疗后各项营养指标均较治疗前改善。EEN+新斯的明组病人第14天时ALB、TLC、NB以及第21天时ALB、Hb、TLC、NB改善均明显优于EEN组(P<0.05)。EEN+新斯的明组第14和21天时lgA水平明显低于EEN组(P<0.05),且CD4、CD4/CD8比值较亦EEN组明显升高(P<0.05)。EEN+新斯的明组病人对EN的耐受性显著高于EEN组[(4.8±0.7)d vs(6.7±1.3)d](P<0.05),EEN达标率亦明显升高(63.33%vs 48%,P<0.05),EN相关并发症发生率明显减低。结论:EEN支持联合新斯的明足三里注射治疗能改善危重症病人的营养状况,增强病人对EN的耐受,降低并发症,增强病人免疫功能。     

脓毒症大鼠小肠上皮短肽载体生物学功能的变化

目的:探讨脓毒症对大鼠小肠上皮短肽载体(PepT1)的表达和功能变化影响. 方法:将60只大鼠分为对照组(n=10)和脓毒症组(n=50),采用盲肠结扎穿刺术(CLP)动物模型.模型建立后4、8、12、16和20 h留取血标本和小肠黏膜,行肠黏膜病理检查,用Elisa方法检测血清、肠黏膜肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平,实时定量PCR和蛋白印迹法分别检测肠上皮PepT1 mRNA和蛋白表达.采用高效液相色谱法检测PepT1的摄取功能. 结果:CLP所致的脓毒症大鼠小肠黏膜明显损伤,表现为黏膜短缩、脱落,毛细血管扩张出血和溃疡形成.血清和肠黏膜TNF-α、IL-1β水平均在建模4h时达高峰,之后逐渐下降,显著高于对照组(P＜0.05).脓毒症8、12、16和20 h组小肠上皮PepT1 mRNA表达水平较对照组明显下降(P＜0.05),PepT1蛋白表达也较对照组显著减少(P＜0.05).脓毒症12、16和20 h组小肠上皮PepT1对底物的摄取功能较对照组明显下降(P＜0.05),摄取量也较脓毒症4h和8h组明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论:CLP所致的脓毒症大鼠小肠上皮PepT1 mRNA和蛋白表达明显下降,机体在基因和蛋白水平下调了肠上皮PepT1生物学功能.     

经皮电刺激治疗帕金森病患者功能性便秘的临床研究

目的：探讨经皮电刺激(transcutaneous electrical stimulation,TES)对帕金森病(Parkinson disease,PD)患者功能性便秘的治疗作用。方法：选取2021年7-12月镇江市第四人民医院神经内科的PD患者76例,采用随机数字表法将患者分为对照组和试验组,每组38例。对照组给予常规治疗,试验组在对照组的基础上给予TES治疗,治疗时间为2周。比较两组每周完全自主排便(complete spontaneous bowel movements,CSBMs)次数;比较两组胃动素和胃泌素水平、胃窦运动指数及患者便秘状况评估问卷(patient assessment of constipation quality of life questionnaire,PAC-QOL)评分。结果：治疗后第2周,试验组CSBMs次数多于对照组;治疗2周后,试验组胃动素水平高于对照组(P<0.05),两组胃泌素水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗2周后,试验组胃窦运动指数高于对照组(P<0.05);治疗2周后,试验组PAC-QOL评分低于...     

脓毒症大鼠肠上皮细胞自噬水平的研究

目的:研究盲肠结扎穿刺(CLP)诱导的脓毒症大鼠小肠上皮自噬水平,探讨自噬与脓毒症肠上皮损害的关系. 方法:建立大鼠盲肠结扎穿刺模型,收集大鼠血清和小肠上皮黏膜,采用酶联免疫吸附法检测血清和黏膜细胞因子的变化,用蛋白免疫印迹法和rt-PCR法检测小肠黏膜组织中自噬相关蛋白的表达量以及转录水平,对获取的数据进行统计学处理. 结果:CLP诱导的脓毒症大鼠血清和黏膜细胞因子TNF-α在4h即明显升高,与对照组比有显著性差异(P＜0.05).自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3在脓毒症8h明显升高,12 h下降,与对照组比有显著性差异(P＜0.05).LC3基因也表现出早期升高随之下降的趋势. 结论:大鼠在脓毒症时,小肠黏膜受损,其自噬相关蛋白表达早期升高,随后下降.自噬受细胞因子水平的影响,导致肠黏膜上皮细胞功能失调.     

鲍曼不动杆菌荚膜厚度对鼠巨噬细胞炎症复合体活化的影响

目的: 探讨荚膜厚度不同的鲍曼不动杆菌激活鼠巨噬细胞Raw 264.7炎症复合体能力的差异。方法: 采用刚果红染色法观察鲍曼不动杆菌荚膜,筛选出荚膜厚度差异显著的两株菌株。将两株菌分别感染Raw 264.7,以实时定量 PCR法分析感染6 h的细胞NOD样受体家族3(NOD like receptors, NLRP3)、Caspase 1和IL 1β基因表达量;流式细胞术分析感染1、3和6 h的细胞活性氧表达量。结果： 刚果红染色可以清晰地观察到鲍曼不动杆菌周围一圈不着色的荚膜,选择出荚膜厚度差异显著的两株鲍曼不动杆菌用于感染细胞。不同荚膜厚度的鲍曼不动杆菌感染均可刺激Raw 264.7细胞NLRP3、Caspase 1和IL 1β mRNA表达上调,其中厚荚膜菌株诱导细胞NLRP3和IL 1β mRNA表达能力显著高于薄荚膜菌株（P<0.05）;不同荚膜厚度的鲍曼不动杆菌感染3 h和6 h时,细胞活性氧表达量均显著高于对照组(P<0.05),且厚荚膜菌株诱导活性氧表达能力显著高于薄荚膜菌株（P<0.05）。 结论： 不同荚膜厚度的鲍曼不动杆菌活化鼠巨噬细胞炎症复合体能力存在差异,厚荚膜菌株诱导炎症复合体活化的能力更强。