多索茶碱及其片剂的高效液相色谱分析

多索茶碱及其片剂的高效液相色谱分析刘春胜，何秀峰，王云萍，谷士杰，周同惠（中国医学科学院、中国协和医科大学药物研究所，北京１０００５０）多索茶碱（ｄｏｘｏｆｙｌｌｉｎｅ）是用于治疗支气管哮喘合并支气管痉挛的慢性阻塞性肺部疾病的新一代黄嘌吟衍生物，其药...     

Inhibition of experimental autoimmune encephalomyelitis in Lewis rats by nasal administration of encephalitogenic MBP peptides: synergistic effects of MBP 68-86 and 87-99

Induction of mucosal tolerance by inhalation of soluble peptides with defined T cell epitopes is receiving much attention as a means of specifically down-regulating pathogenic T cell reactivities in autoimmune and allergic disorders. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) induced in the Lewis rat by immunization with myelin basic protein (MBP) and Freund's adjuvant (CFA) is mediated by CD4+ T cells specific for the MBP amino acid sequences 68-86 and 87-99. To further define the principles of nasal tolerance induction, we generated three different MBP peptides (MBP 68-86, 87-99 and the non- encephalitogenic peptide 110-128), and evaluated whether their nasal administration on day -11, -10, -9, -8 and -7 prior to immunization with guinea pig MBP (gp-MBP) + CFA confers protection to Lewis rat EAE. Protection was achieved with the encephalitogenic peptides MBP 68-86 and 87-99, MBP 68-86 being more potent, but not with MBP 110-128. Neither MBP 68-86 nor 87-99 at doses used conferred complete protection to gp-MBP-induced EAE. In contrast, nasal administration of a mixture of MBP 68-86 and 87-99 completely blocked gp-MBP-induced EAE even at lower dosage compared to that being used for individual peptides. Rats tolerized with MBP 68-86 + 87-99 nasally showed decreased T cell responses to MBP reflected by lymphocyte proliferation and IFN-gamma ELISPOT assays. Rats tolerized with MBP 68-86 + 87-99 also had abrogated MBP-reactive IFN-gamma and tumor necrosis factor-alpha mRNA expression in lymph node cells compared to rats receiving MBP 110-128 nasally, while similar low levels of MBP-reactive transforming growth factor-beta and IL-4 mRNA expressing cells were observed in the two groups. Nasal administration of MBP 68-86 + 87-99 only slightly inhibited guinea pig spinal cord homogenate-induced EAE, and passive transfer of spleen mononuclear cells from MBP 68-86 + 87-99-tolerized rats did not protect naive rats from EAE. Finally, we show that nasal administration of MBP 68-86 + 87-99 can reverse ongoing EAE induced with gp-MBP, although higher doses are required compared to the dosage needed for prevention. In conclusion, nasal administration of encephalitogenic MBP peptides can induce antigen-specific T cell tolerance and confer incomplete protection to gp-MBP-induced EAE, and MBP 68-86 and 87-99 have synergistic effects. Non-regulatory mechanisms are proposed to be responsible for tolerance development after nasal peptide administration.      

自体骨髓单个核细胞经介入途径移植治疗股骨头坏死54例：12个月疗效随访

目的:观察经介入途径移植自体骨髓单个核细胞在股骨头坏死治疗中的应用,并评价其疗效。方法:选择2004-07/2005-11在解放军四六三院细胞治疗中心住院的,具有完整随访资料的股骨头坏死确诊患者共54例91髋。纳入确诊股骨头坏死,有关节疼痛、功能障碍等症状患者,性别、年龄不限;排除有严重心力衰竭、严重肾功能异常等不能耐受手术者。符合纳入标准54例,男45例,女9例,12～68岁。按ARCO分期Ⅱ期42髋,Ⅲ期47髋,Ⅳ期2髋。实验对象对治疗的相关内容知情同意并签知情同意。干预措施:抽取患者髂后上嵴骨髓进行单个核细胞悬液的制备。在DSA监视下将采集的单个核细胞混悬液经股动脉行Seldinger法穿刺,穿刺成功后,置入4F动脉鞘,经动脉鞘置入Cobra导管,将导管超选择至闭孔动脉及旋股内外侧动脉,平均注入单个核细胞悬液。术后定期随访症状变化情况,1年后复查X射线或CT,随访疼痛、关节活动度等情况。实验评估:①疼痛指数:无疼痛症状为3分,Harris髋关节评分疼痛分级A级;时有隐痛2分,Harris髋关节评分疼痛B级;轻度疼痛为1分,Harris髋关节评分疼痛C级;中度疼痛为0分,Harris髋关节评分疼痛D级。②功能指数:髋关节屈、伸、展、收、旋转度评分达Harris髋关节活动范围评分4～5分为3分;3～4分为2分;2～3分为1分;小于2分为0分。③X射线平片指数:股骨头形态无变化,应力骨小梁清晰,坏死区明显缩小为3分;坏死区略缩小为2分;治疗前后无明显变化为1分;坏死区扩大为0分。④血管指数:治疗后旋股内、外侧动脉及其分支增粗、增多,延长1cm以上者3分;1～0.5cm者2分;小于0.5cm者1分,无变化者0分。结果:54例患者均完成疼痛症状、关节功能及影像学随访1年。①术后12个月复查疼痛消失9髋,缓解61髋,无缓解21髋,缓解率为76.9%。②关节功能缓解33髋,无缓解58髋,缓解率为36.3%。③1年后X射线平片或CT、MRI示股骨头区可见不同程度的股骨头坏死区骨质密度改变,坏死区有吸收、缩小,股骨头形态变圆滑规整,改善28髋,无缓解或加重63髋,缓解率为30.1%。④12例24髋完成术后12个月复查股骨头供血动脉数字减影血管造影,好转18髋,好转率为72.2%。结论:经介入途径移植自体骨髓单个核细胞治疗股骨头坏死损伤小,可缓解临床相关症状。     

c-Jun氨基末端激酶信号转导通路在细胞凋亡中的作用

细胞凋亡是当前生物医学热门话题之一,近年已取得了众多的发现,但细胞凋亡信号转导通路尚处于揭示阶段.现已证明丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)家族可转导并调控细胞凋亡信号,而JNK信号通路则在其中起着十分重要的作用,本文就近年来JNK信号转导通路与细胞凋亡研究的主要进展,包括JNK在应激反应的细胞凋亡中的研究,在Fas、TNF诱发细胞凋亡中的作用等的研究作了介绍.     

氟芬那酸丁酯软膏治疗皮炎60例

1临床资料2004-12/2005-05采用氟芬那酸丁酯软膏治疗湿疹、皮炎60(男28,女32)例,年龄2～65岁;病种中各型湿疹9例,单纯糠疹12例,接触性皮炎18例,脂溢性皮炎15例,日光性皮炎14例.     

Amplatzer封堵器的生物学性能及经导管介入治疗房间隔缺损

目的:评价经导管置入Amplatzer封堵器治疗继发孔房间隔缺损的治疗效果。方法:①选择2002-08/2006-04在兰州市第一人民医院心外科住院的继发孔型房间隔缺损65例,男26例,女39例;平均年龄(18±8)岁;平均房间隔缺损直径(19.3±7.2)mm。纳入患者对手术方案知情同意。②手术所用封堵器为美国公司的Amplatzer房间隔缺损封堵器,是一种新型的适于关闭二孔型房间隔缺损的装置,它由具有自膨胀性的双盘及连接双盘的腰部三部分组成。双盘状结构恢复记忆形状后可以稳定封堵房间隔缺损的边缘部分,降低残余分流的发生率。③根据选择封堵器大小的方式(即球囊测量或经胸超声心动图直接观察)将患者分为球囊测量组38例和经胸超声心动图测量组27例。均在透视及经胸超声心动图监视下经导管置入Amplatzer封堵器封堵房间隔缺损。同时测量患者缺损扩张直径、封堵器大小,记录X射线透视时间和手术时间。④术后即刻、24h、3个月及1年分别行经胸超声心动图、心电图及X射线检查评价治疗效果。⑤超声心动图显示完全无分流为无分流;残余分流血流宽度≤1mm为微量分流;血流宽度1.0～2.0mm为少量残余分流;血流宽度2～4mm为中量残余分流;血流宽度>4mm为大量残余分流。⑥组间计量资料差异比较采用两个独立样本t检验,组间手术效果比较采用两个独立样本的等级资料秩和检验。结果:①技术成功率:65例房间隔缺损患者,64例封堵器置入成功,技术成功率为98%。②选择封堵器直径:球囊测量组缺损扩张直径为(20.4±6.1)mm,选择的封堵器直径为(21.6±5.7)mm,与经胸超声心动图测量组相近[(22.5±4.3),(25.1±4.9)mm,P>0.05]。③术后残余分流情况:术后即刻经胸超声心动图显示,球囊测量组35例完全无分流,经胸超声心动图组有23例,差异不明显(P>0.05);术后24h,球囊测量组36例完全无分流,经胸超声心动图组有24例,差异不明显(P>0.05);术后3个月,球囊测量组37例完全无分流,经胸超声心动图组有25例,差异不明显(P>0.05);术后1年完成随访的52例患者均未见封堵器移位及房间隔缺损再通。④X射线平片检查:全部显示肺血减少,右心房、室缩小。结论:封堵器直径比球囊测量的房间隔缺损扩张直径大1.0～2.0mm,比超声心动图测量的大2～6mm封堵效果好,成功率高。     

长期住院慢性精神分裂症患者的生活质量

目的:评估长期住院的慢性精神分裂症患者的生活质量,并分析影响因素。方法:纳入2004-01/08在北京回龙观医院住院的慢性精神分裂症患者163例。以年龄、性别、受教育程度为匹配条件,按照2∶1的比例选择本院职工及医院所在社区内82例健康自愿者为对照组。采用健康状况调查问卷进行生活质量评价:包括36个条目,归纳为8个分量表:生理机能,生理职能、躯体疼痛、一般健康状况、精力、社会功能、情感职能和精神健康。分数越高,表明该方面的功能状况越好,生活质量越高。结果:发放调查问卷245份,收回有效问卷245份。①精神分裂症患者健康状况调查问卷各维度评分均低于对照组,两组比较差异有显著意义。②相关分析发现长期住院的慢性精神分裂症患者健康状况调查问卷评分与阳性与阴性症状量表评分、副反应量表呈负相关(P<0.05～0.001)。健康状况调查问卷评分与性别呈正相关(P<0.05～0.001),与年龄、婚姻状况、病期、住院时间、目前状态、躯体疾病呈负相关(P<0.05～0.001)。结论:长期住院的慢性精神分裂症患者的生活质量低下,影响因素包括精神病状态、药物副反应、年龄、性别、病期、住院时间、婚姻状况、躯体疾病。     

肾移植前后严重焦虑对肾功能衰竭患者病情的影响：1例报告

目的:观察焦虑情绪对肾功能衰竭患者肾移植前后病情转归的影响,并探讨其治疗对策。方法:患者为36岁男性,2005-11入华中科技大学同济医学院附属同济医院肾内科,入院诊断为慢性肾小球肾炎,慢性肾功能不全,失代偿期,患者知情同意。因严重焦虑引起肾功能迅速恶化,在1个多月内从代偿期迅速进展到尿毒症期,并经肾活检证实病情不可逆转,接受血液透析治疗,并行肾移植。观察其接受血液透析前后和肾移植前后的焦虑状态评分及肾功能。汉密顿焦虑量表包括14个项目,总评分超过29分,可能为严重焦虑;小于6分,患者没有焦虑症状。结果:①焦虑状态的评估结果:血液透析前患者的焦虑状态评分为31分,属于严重焦虑。血液透析后和肾移植前后多次评分,患者焦虑状态均完全解除。②随访结果:肾移植术后1个月,患者重新工作,随访至今,复查各项指标基本正常。结论:严重焦虑可使慢性肾小球肾炎患者肾功能在短期内迅速恶化,对病情的发展和转归有明显影响。在治疗过程中除了积极治疗原发疾病外,还应重视心理干预治疗。     

壳聚糖基因转移载体在关节软骨细胞中表达的定量分析

目的:壳聚糖作为基因转移的载体存在着转染效率的问题。实验对壳聚糖介导的报告基因增强型绿色荧光蛋白在关节软骨细胞中的基因表达效率进行定量分析。方法:实验于2005-09/2006-06在健康科学研究所骨科细胞与分子生物学实验室完成。①实验材料:壳聚糖购自Sigma公司;荧光质粒pEGFP-C3为Clontech公司产品;成年新西兰白兔2只。②实验分组:实验分为空白对照组(软骨细胞不转染)、裸质粒pEGFP-C3对照组和壳聚糖-pEGFP转染组。③实验过程:软骨细胞取自新西兰白兔的关节软骨。以多聚糖壳聚糖为载体,荧光质粒pEGFP-C3作为报告基因,利用高速震荡法制备壳聚糖-pEGFP超微颗粒,用制备的携带不同量(1,2,3,4,5μg)DNA的壳聚糖-pEGFP超微颗粒对软骨细胞进行体外转染。裸质粒pEGFP-C3对照组加入等量的DNA。④实验评估:光镜观察软骨细胞及壳聚糖-DNA超微颗粒的形态;荧光显微镜观察不同条件下绿色荧光蛋白的表达并进行定量分析。结果:①光镜下观察空白对照组,裸质粒pEGFP-C3对照组及壳聚糖-pEGFP转染组,软骨细胞形态均呈多角形,贴壁生长,增长活跃,转染组软骨细胞周围黏附有大量的球形小颗粒;制备的壳聚糖-DNA超微颗粒大小均匀,直径大约在150～300nm。②在壳聚糖-pEGFP超微颗粒转染的软骨细胞中观察到有绿色荧光蛋白的表达,且DNA含量在1～5μg范围内,细胞的转染效率和表达效率随颗粒包被的DNA量的增加而增加。结论:壳聚糖在关节基因转移中具有一定的体外DNA导入的功能,且随壳聚糖-pEGFP超微颗粒所携带的DNA量的增加转染效率和表达效率增加,经进一步研究它有望成为一种关节体内基因导入的有效工具。     

组织工程细胞支架的免疫原性研究

目的：以组织工程血管脱细胞支架和仿生髓核组织工程细胞支架、周围神经去细胞神经基膜管为例,介绍组织工程脱细胞支架的免疫原性研究情况. 方法：应用计算机检索Medline 1997-01/2007-03关于免疫原性的文章.检索词“Immunotoxicology”并限定文章的语种类为English.同时利用计算机检索中国期刊全文数据库1997-01/2007-03的相关文章,限定文章语言种类为中文,检索词“组织工程,免疫原性”. 结果：主要组织相容性复合体Ⅰ免疫组织化学方法能够检测血管脱细胞支架的免疫原性;组织学观察及反转录-聚合酶链反应检测γ-干扰素、白细胞介素2、白细胞介素4、白细胞介素10 mRNA表达,可以反映仿生髓核组织工程支架的免疫原性;主要组织相容性复合体Ⅱ抗原可以反映出经过化学萃取后的去细胞预变性神经基膜血管结构保留较完整,免疫原性低. 结论：脱细胞可以极大地降低组织工程支架的免疫原性,从而使得组织工程产品有更广阔的使用前景.