锌指基因ZNF569的转录活性分析

目的构建GAL4-ZNF569和pCMV-Tag2C-ZNF569重组质粒。通过它控制报告基因的表达情况来确定它的转录激活/抑制活性以及它是否参与了细胞信号途径调控。结果GAL4-ZNF569和pCMV-Tag2C-ZNF569重组质粒转染细胞后发现ZNF569具有转录抑制活性并能抑制SRE和AP-1的转录活性。对ZNF569的分段结构域的转录活性分析表明ZNF569的KRAB结构域和C2H2锌指结构域都具有抑制转录因子转录活性的作用。结论由此笔者得出结论认为ZNF569的KRAB框和C2H2锌指都具有抑制因子作用,为进一步研究ZNF569在真核细胞中的信号调控奠定了一定的实验基础。     

L-精氨酸与N-硝基L-精氨酸甲基酯对雄性大鼠睾酮分泌的影响

目的:阐明一氧化氮(NO)对男性生殖轴中睾丸内分泌功能的调节作用。材料与方法:于雄性SD大鼠腹腔内注射不同剂量(0～210mg/kg)的L-ARG(L-arginine,L-ARG,NO前体)与L-NAME(Nw-nitrio-L-arginine-mythel-ester,L-NAME,NO合酶的竞争性抑制剂,0～70mg/kg),每天一次,共8天,最后一次注射后1小时采血 然后将SD大鼠分成4组,分别注射同一剂量的L-ARG(160mg/k8)、L-NAME(50mg/kg)、L-ARG+L-NAME和生理盐水,每天一次,注射13天,每隔3～4天采血一次。用放射免疫同步测定法测定血清中睾酮含量,对所得数据进行统计学处理。结果:L-ARG对睾酮分泌具有抑制作用(P<0.01),而L-NAME则促进睾酮的分泌(P<0.01),两者都具有时间依赖性,并与剂量高度相关。L-ARG和L-NAME混合注射时,睾酮的含量与生理盐水注射组无明显区别(P>0.05)。结论:NO对雄性大鼠的睾酮分泌具有抑制作用。     

胃癌及癌前病变中P16蛋白表达的研究

采用链霉菌抗生物素蛋白—过氧化物酶连接法（Ｓ－Ｐ法），研究Ｐ１６蛋白在胃癌和癌前病变（不典型增生、慢性萎缩性胃炎及慢性消化性胃溃疡）中的表达。结果显示，Ｐ１６蛋白阳性表达：胃癌４７．５４％（５８／１２２），癌前病变９０．００％（７２／８０），正常胃粘膜９６．２５％（７７／８０），高分化腺癌３７．９３％（１１／２９），低分化腺癌５１．２２％（２１／４１），未分化癌５７．６９％（１５／２６），印戒细胞癌６２．５０％（１０／１６），粘液腺癌１０．００％（１／１０）。经统计学处理，胃癌组与正常对照组及癌前病变组间的差异均有显著性意义（Ｐ＜０．０５）；粘液腺癌与低分化腺癌、未分化腺癌及印戒细胞癌之间的差异也均有显著性意义（Ｐ＜０．０５）。     

核内M-CSF对NIH3T3细胞内微丝的影响

目的建立M-CSF核内稳定表达的NIH3T3细胞系,探讨核内M-CSF对细胞骨架的影响。方法经脂质体介导核内定位表达重组体pCMV/M-CSF转染NIH3T3细胞,G418筛选后,用Rt-PCR、免疫细胞化学鉴定其在真核细胞中的表达及定位分布,用考马斯亮蓝染色细胞微丝测定M-CSF进入细胞核后对细胞骨架的影响。结果RT-PCR结果显示转染pCMV/M-CSF的NIH3T3细胞能稳定表达M-CSFmRNA;免疫细胞化学结果显示表达的M-CSF定位于NIH3T3细胞核。考马斯亮蓝染色结果显示转染pCMV/M-CSF的NIH3T3细胞内微丝数量减少,排列紊乱。结论核内M-CSF可引起NIH3T3细胞内微丝数量减少,排列紊乱。     

人类心发育候选基因ZNF569融合EGFP真核表达载体的构建及表达

目的:构建真核表达重组体pEGFP-ZNF569,并鉴定其在哺乳动物COS-7细胞系能否正确表达.方法:把ZNF569基因ORF定向克隆入带有EGFP报告基因的真核表达载体,构建真核表达重组体pEGFP-ZNF569,脂质体介导将pEGFP-ZNF569转染入哺乳动物COS-7细胞,以一步法RT-PCR检测其在哺乳动物COS-7细胞中的表达情况.结果:双酶切及测序鉴定表明成功构建真核表达重组体pEGFP-ZNF569,并在COS-7细胞中成功地表达了融合荧光蛋白.RT-PCR检测显示RT-PCR扩增产物与ZNF569目的基因片段大小相符,确实源于重组质粒转录后的mRNA.结论:真核表达重组体pEGFP-ZNF569的成功构建及在体外真核细胞中有效表达,为进一步研究ZNF569在心发育过程中的信号调控奠定了一定的实验基础.     

肝癌细胞增殖受M-CSF胞内和胞外自分泌的双重调控

目的：研究胞内M-CSF及其受体在肝癌SMMC 7721细胞的表达与性质,探讨胞内M-CSF对SMMC 7721细胞增殖的影响及其机制。 方法： 以高表达M-CSF的人肝癌细胞系（SMMC 7721细胞）为模型，以免疫组化、流式细胞计数、反义技术与蛋白印迹等方法观测胞内M-CSF对SMMC 7721细胞增殖的影响及其机制。 结果： M-CSF 及其受体主要在SMMC 7721细胞的胞质、胞核中表达，胞内的M-CSF的相对分子量为20 000，M-CSFR的相对分子量为120 000；免疫共沉淀分析证明M-CSF在细胞内与M-CSFR以复合物的形式存在；M-CSF的单克隆抗体及其反义寡聚核苷酸能抑制SMMC 7721细胞的增殖、下调cyclinD1/E的表达和上调p16的表达，且M-CSF的单克隆抗体及其反义寡聚核苷酸的联合使用能进一步加强对SMMC 7721细胞抑制作用和增加下调cyclinD1/E和上调p16的表达幅度。 结论： SMMC 7721细胞受M-CSF胞外自分泌和胞内自分泌的双重调控。     

NIH3T3细胞核内过表达的M-CSF对细胞运动的影响

目的构建M-CSF细胞核内定位表达载体pCMV/M-CSF,探讨核内M-CSF对NIH3T3细胞运动的影响。方法采用PCR的方法扩增人M-CSF活性片段,将其插入核内真核表达载体pCMV/myc/nuc,构建重组体pCMV/M-CSF,经脂质体介导转染NIH3T3细胞,G418筛选后,用免疫细胞化学及Western blot鉴定其在真核细胞中的表达及定位分布,用细胞划痕实验测定M-CSF进入细胞核后对细胞运动能力的影响。结果限制性双酶切及DNA测序分析结果显示插入pCMV/M-CSF的片段为1400bp左右,与预期M-CSF分子大小相当。Western blot结果显示转染pCMV/M-CSF的NIH3T3细胞能稳定表达M-CSF蛋白;免疫细胞化学结果显示表达的M-CSF定位于NIH3T3细胞核。细胞划痕实验显示转染pCMV/M-CSF的NIH3T3细胞有较强的运动能力。结论成功构建M-CSF核内定位表达载体pCMV/M-CSF,核内M-CSF可加强NIH3T3细胞运动。     

良性前列腺增生症的药物治疗

前列腺增生症(BPH)是中老年人常见病之一,发病率50岁为40％,60岁为70％,70岁为70％,80岁以上为90％。手术治疗效果较好,但对病人造成不同程度的损害,寻找一种有效的非手     

p16蛋白在胃癌及癌前病变中的表达

目的　研究 p16蛋白在胃癌和癌前病变 (不典型增生、慢性萎缩性胃炎及慢性消化性胃溃疡 )中的表达。方法　采用链霉菌抗生物素蛋白—过氧化物酶连接法 (S -P)。结果　p16蛋白阳性表达 :胃癌 47.5 4% (5 8/12 2 ) ,癌前病变 90 .0 0 % (72 /80 ) ,正常胃粘膜 96 .2 5 % (77/80 ) ,高分化腺癌 37.93 % (11/2 9) ,低分化腺癌 5 1.2 2 % (2 1/41) ,未分化癌 5 7.6 9% (15 /2 6 ) ,印戒细胞癌 6 2 .5 0 % (10 /16 ) ,粘液腺癌 10 .0 0 % (1/10 )。结论　p16蛋白表达 :胃癌组与正常对照组及癌前病变组间的差异均有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;粘液腺癌与低分化腺癌、未分化腺癌及印戒细胞癌之间的差异也均有显著性意义 (P <0 .0 5 )。     

阑尾残株炎3例诊治体会

阑尾残株炎是阑尾炎术后少见并发症,由于对本病缺乏认识,易误诊而延误病情。笔者收集、整理562例阑尾炎病例获得3例阑尾残株炎资料,现报道如下。1临床资料 收集、整理1991年7月至1997年7月间收治的阑尾炎病例共562例,获得阑尾残株炎3例,其中男2例,女1例;年龄21-35岁,平均28岁;病程6-15d,平均10d、病人术前1-4年均有阑尾切除病史,术前均误诊,2例误诊为胃肠炎,1例误诊为肠道息肉。临床上均有不同程度的发热,腹痛、腹部压痛,肠鸣音活跃。2例有转移性右下腹