用PCR—RFLP和16SrDNA指纹图法分析幽门螺杆菌基因型

本文建立了PCR－RFLP和16srDNA指纹图法．对19株幽门螺杆菌（HP）进行基因型分析：HP尿素酶C基因的PCR扩增产物．分别用HindⅢ、HaeⅢ、AluⅠ酶切，结果显示：每个酶均将19株HP分为3种RFLP图谱．综合HindⅢ，HaeⅢ和AluⅠ酶切结果，19株HP分为10个酶切带型；PCR扩增HP标准株16SrRNA基因，地高辛标记制备550bp探针，19株HPDNA分别经HaeⅢ和EcoRⅠ酶切、电泳后，通过Southern杂交获16SrDNA指纹图，结果显示：HaeⅢ酶切分为14个杂交带型，EcoRⅠ酶切19株HP杂交带型均不同。本实验表明：上述两种方法重复性好，分群力高，可准确有效地对HP作出鉴定并将其分型。19株HP株间存在基因型差异。     

应用噬菌体随机肽库技术筛选幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白的抗原表位

目的 筛选和鉴定幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)中性粒细胞激活蛋白(neutrophil-activating protein,NAP)的有效抗原表位,为Hp疫苗的研制提供基础.方法 以抗NAP的单克隆抗体作为固相筛选分子,经3轮吸附-洗脱-扩增免疫,筛选噬菌体随机7肽库,随机挑选噬菌体克隆,经噬菌体酶联免疫吸附试验(ELISA)、交叉反应试验及竞争抑制试验鉴定阳性克隆,测定阳性克隆所携带DNA序列并进行计算机辅助分析.以制备的阳性噬菌体克隆短肽液免疫小鼠,免疫血清与NAP经Western blot分析,以验证NAP的模拟表位.结果 经3轮免疫筛选后挑选到45个阳性克隆,经ELISA鉴定有12个阳性克隆,测序结果显示5种表位,其中P17噬菌体展示肽FAHLATQ与NAP氨基酸序列(137～143)高度同源,位于NAP高抗原区域(118～140),免疫血清可识别NAP.结论 用噬菌体随机7肽库成功筛选到了NAP的模拟表位,为基于NAP的诊断和疫苗的研制提供了基础.     

拷贝数变异测序在智力障碍、发育迟缓及孤独谱系综合征的病因学分析中的应用

目的探讨拷贝数变异测序(CNV-seq)对于智力障碍(ID)、发育迟缓(DD)及孤独谱系障碍(ASD)患儿的诊断价值。方法收集2018年9月至2022年1月在深圳市南山区妇幼保健院诊断为ID、DD及ASD的患儿40例, 采集其外周血样, 分别进行染色体核型分析和CNV-seq检测, 查询ClinVar、DECIPHER、OMIM等数据库并结合生物信息学分析评估拷贝数变异(CNVs)的致病性。结果 40例患者检测出ID 16例(40.0%)、DD 15例(37.5%)、ASD 6例(15.0%)、ID合并DD为1例, ID合并ASD为2例。核型分析发现47, XY, +mar、46, XY, inv(8)(p11.2q21.2)、46, XX, del(5)(p14)以及46, XX[76]/46, X, dup(X)(p21.1q12)各1例, 染色体多态性2例。CNV-seq在20例患儿中共检出32处CNVs, 检出率(50.0%)明显高于核型分析。在10例(25.0%)患儿中发现了致病性CNVs(检出率为25.0%), 12例患者中发现了15处意义未明的CNVs(检出率为30.0%...     

桃红四物汤治疗心血瘀阻型稳定性冠心病的临床疗效

目的观察桃红四物汤治疗心血瘀阻型稳定性冠心病的临床疗效。方法将144例心血瘀阻型稳定性冠心病患者随机分为2组,对照组72例应用西医常规治疗,治疗组72例在对照组治疗基础上应用桃红四物汤治疗,2组疗程90 d。比较2组治疗前后中医证候积分、西雅图量表(SAQ)积分变化,比较2组中医证候疗效,分析中医证候与生活质量的相关性。结果 2组治疗30、60、90 d中医证候积分均较本组治疗前降低(P0.05);且治疗组中医证候积分均低于对照组治疗同期(P0.05,P0.01)。2组治疗后SAQ积分均较本组治疗前升高(P0.05);治疗组治疗30 d,躯体受限程度、心绞痛稳定状态积分均高于对照组治疗同期(P0.05);治疗组治疗60 d除心绞痛发作情况外,其他4个维度积分较高于对照组治疗同期(P0.05,P0.01);治疗组治疗90 d,躯体受限程度、心绞痛稳定状态、心绞痛发作情况、治疗满意程度、疾病认识程度积分均高于对照组治疗同期(P0.05,P0.01)。治疗组总有效率89.23%,对照组71.64%,2组总有效率比较差异有统计学意义(P0.05),治疗组中医证候疗效优于对照组。中医证候积分改善越多,生活质量就改善越多。结论桃红四物汤在对心血瘀阻型稳定性冠心病患者的中医证候、生活质量的改善方面优于常规西医治疗,生活质量与中医证候的改善呈正相关。     

头孢克肟致药品不良反应分析

目的:探讨头孢克肟致药品不良反应(ADR)发生的特点及规律。方法:收集国内医药期刊有关头孢克肟致ADR个案报道10例并汇总3家医院2000-2010年上报的头孢克肟致ADR报告79例,共89例,进行分析、评价。结果:ADR临床表现方面,以皮肤及其附件损害居首位(占41.57%),其次为神经系统损害(占19.10%)及消化系统损害(占15.73%);以≤10岁儿童(48.31%)和序贯用药(46.07%)报道率最高;约38.20%的ADR发生在用药48h后。结论:临床应重视头孢克肟引起的ADR,用药时应加强对患者的观察,以减少严重ADR的发生。     

新城疫病毒对TSCCa细胞survivin表达及细胞周期的影响

目的 研究新城疫病毒(NDV)对人舌鳞癌TSCCa细胞survivin表达及细胞周期的影响.方法 通过NDV体外感染人舌鳞癌TSCCa细胞,MTT方法 检测TSCCa细胞的生长情况;采用RT-PCR和Western bloting检测survivin表达变化;流式细胞术分析检测NDV感染后TSCCa细胞分裂周期各时相的变化及细胞凋亡情况.结果 NDV感染后TSCCa细胞降低survivin表达,细胞凋亡率增加,S和G2/M期细胞减少,增殖指数(PI)降低,与阴性对照组比较有显著性差异(P<0.01).结论 NDV感染可抑制TSCCa细胞survivin的表达,影响细胞周期,诱导细胞凋亡.     

阪崎肠杆菌环介导等温扩增检测方法建立

目的 针对当前国内外传统检测方法缺点,建立阪崎肠杆菌快速检测法.方法 根据阪崎肠杆菌外膜蛋白(OmpA)基因,设计4条特异性引物(内、外引物各2条),建立并优化环介导等温扩增(loop-mediated isotherm alamp lification,LAMP)检测体系及反应条件,并进行LAMP反应的灵敏度、特异性实验及实际样品检测.结果 LAMP检测阪崎肠杆菌,优化后的条件选择为:Mg²⁺浓度6 mmol/L,dNTP浓度0.6 mmol/L,甜菜碱浓度0.8 mol/L,外引物与内引物的浓度比1:4,扩增温度58℃60min;细菌纯培养检测灵敏度为101cfu/mL;对11种细菌共26株菌进行LAMP扩增,仅8株阪崎肠杆菌得到阳性扩增结果,证明引物具有很高的特异性;对实际样品进行增菌检测,采用试剂盒提取DNA,从样品处理到报告结果,耗时26 h;并采用传统检测方法验证,正确性为100%.结论 该方法检测阪岐肠杆菌特异性强、灵敏度高,并且操作简便、检测成本低、耗时短,有望成为快速检测阪岐肠杆菌的有效方法.     

33911例新生儿听力联合耳聋基因筛查及随访结果的分析

目的通过分析新生儿听力联合耳聋基因筛查的结果,以及对阳性病例的随访和管理,提高遗传性耳聋的检出率。方法收集33911例新生儿听力联合耳聋基因筛查的结果,应用Sanger测序对听力未通过或基因筛查提示阳性的患儿进行验证。结果听力初筛通过率为93.32%,复筛为87.01%。耳聋基因筛查阳性率为4.18%。GJB2、SLC26A4、GJB3和12SrRNA基因变异的检出率分别为1.98%、1.58%、0.37%和0.25%。共检出126例迟发性耳聋,84例药物性耳聋,4例GJB2纯合/复合杂合变异,5例SLC26A4纯合/复合杂合变异。联合筛查发现GJB2、SLC26A4、GJB3和12SrRNA单杂合变异者听力初筛和复筛未通过的比例分别为6.75%和2.61%、3.3%和1.2%、0.72%和0.14%、0.36%和0%。纯合/单基因复合杂合变异、单基因杂合变异、多基因复合杂合以及GJB3纯合变异组听力筛查未通过率明显高于阴性组,差异具有统计学意义。结论基因检测是对新生儿听力筛查很好的补充。对阳性患儿的追踪管理能够有效提高耳聋的诊断率,但基因筛查不能等同于诊断,应综合分析基因检测、听力筛查和影像学的结果,Sanger/二代测序可作为重要的补充检查手段。     

Vimentin基因敲除HIV-1 gp120转基因小鼠模型的构建

目的 构建波形蛋白（VIM）基因敲除和gp120转基因（gp120 Tg）小鼠模型。方法 将VIM基因敲除小鼠（VIM-/-）和gp120 Tg小鼠杂交（F0代）,然后在产生的子代（F1）中,取分组为VIM+/-/gp120Tg的小鼠一公一母杂交,得到基因型分别为VIM+/+、 VIM+/-、VIM-/-和VIM+/+/gp120 Tg、VIM+/-/gp120 Tg、VIM-/-/gp120 Tg的6组小鼠。其中VIM+/+、VIM-/-、VIM+/+/gp120Tg和VIM-/-/ gp120这4组小鼠互为对照。用PCR法鉴定这上述6组小鼠的基因型,免疫印迹法检测小鼠脑组织中VIM和gp120的表达情况。结果 4组基因型VIM+/+、VIM-/-、VIM+/+/gp120Tg和VIM-/-/gp120Tg小鼠的PCR结果符合预期,免疫印迹结果显示VIM-/-/ gp120Tg小鼠VIM无表达,gp120过表达（P<0.001）,符合预期结果。结论 成功构建了VIM基因敲除gp120转基因小鼠模型,为深入研究波形蛋白在gp120神经毒性作用中的作用机制提供了坚实的研究基础。     

重症高血压脑出血手术治疗时机及方式分析

目的：探讨分析重症高血压脑出血手术治疗的最佳时机与方式。方法重症高血压脑出血患者162例,根据患者病症发生到手术治疗时间,随机分为三组, A组65例为超早期手术组（出血后7 h内）, B组53例为早期手术组（出血后8~24 h内）, C组44例为延迟手术组（出血24 h后）;然后根据患者出血部位、出血量及血肿是否破入脑室而选择不同的手术方法并观察其疗效,分别为小骨窗开颅血肿清除术、开颅血肿清除并去除骨瓣减压术、单侧或双侧脑室外引流术。结果通过日常生活能力分级法（ADL）评价方法对三组患者术后2年内的预后情况进行评价, A组1级、2级、3级比例明显高于B组与C组,4级、5级及死亡率比例明显低于B组与C组（P〈0.05）。结论想要有效的降低高血压脑出血患者的致残率及死亡率,要对患者尽早的进行手术干预,并根据患者不同的情况选择最合适的手术方法,从而提高患者的治疗效果及预后恢复。