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选择腊质休法将人转化生长因子(TGF-β1)基因转移至NIH/3T3中,经G418(450ug/ml)筛选,随机挑选出13个表达克隆;其培养上清经体外斌活(加热或酸化)处理,用水貂肺上皮细胞株CCL-64生长抑制法测定TGF。用活性,证明绝大多数表达克隆的TCF-β1表达量均超过了100ng/ml.48h,最高克隆表达量为156ng/ml·48h。选择高表达克隆经Southernblot、Northernblot鉴定,证实外源人TGF-β1基因稳定重组人NIH/3T3细胞中,有mRNA表达。PC… 相似文献
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转化生长因子(TGF-β1)mRNA在放射性间质性肺炎中的表达 总被引:1,自引:1,他引:1
为探讨TGF-β1在放射性间质性肺炎中的意义和作用,揭示其发病机理。方法雄性Wistar大鼠48只分对照和照射组用60Coγ射线照射,吸收剂量30Gy,于照后不同时间活杀,取肺组织做常规病理观察和原位杂交。结果照射组大鼠肺组织TGF-β1和正常对照组比较表达增高,且以照射后3~6个月(纤维增生期)显著。结论TGF-β1可能参与了放射性间质性肺炎的发生发展 相似文献
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转化生长因子β1(TGFβ1)是一种多功能的细胞生长因子,它几乎参与了体内所有的病理和生理过程,同时还在创伤愈合、肿瘤抑制、免疫调节、神经营养等多方面具有广泛的应用前景。TGFβ1的研究具有十分重要的理论和应用意义。我们在完成了对TGFβ1cDNA的克隆和鉴定之后,对其在哺乳动物细胞COS-7中的表达做了进一步的研究。 相似文献
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为了解慢性病毒性肝炎肝组织中转化生长因子β_1(TGFβ_1)及TGFβ_1mRNA的表达情况及其与肝脏病理改变的关系,本文用免疫组织化学法检测了45例慢性病毒性肝炎患者肝脏TGFβ_1表达,并做其中21例TGFβ_1mRNA原位杂交。结果TGFβ_1肝组织表达阳性率为88.89%,主要为间质细胞、汇管区及纤维化发生活跃部位阳性,且随肝纤维化程度加重而表达增强(r=0.73,P<0.05);TGFβ_1mRNA表达阳性率为57.14%,不仅定位于单核细胞、窦细胞,某些肝细胞也有表达。结果表明TGFβ_1与肝纤维化密切相关,不仅间质细胞能够产生TGFβ_1促进肝纤维化,肝细胞本身可能也参与TGFβ_1分泌环路,在肝纤维化发病机制中起一定作用。 相似文献
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目的:寻找改进羟基磷灰石类骨修复材料生物活性的方法.方法:用固相法合成了多肽P19和P18,测定了P19与羟基磷灰石的结合特性,测定了P19对于成骨细胞附着的影响以及在P18与P19存在的条件下,成骨细胞的增殖特性,并用扫描电镜观察了附着在碳磷酸钙骨水泥(calcium carbonated phosphate cement,CPCC)材料表面的成骨细胞形态,并用DNA测量法测定了细胞在材料表面增殖特性.结果:P19铺板后能增强P18促进细胞增殖的作用.多肽分子P19对于成骨细胞的作用与纤维连接蛋白类似,多肽和CPCC结合后仍然保持其各自的生物活性,吸附在材料表面的P19能够促进成骨细胞在材料表面的附着,经过P19多肽修饰的CPCC表面能够明显增加成骨细胞吸附的数量,并能够促进成骨细胞的增殖.P18和P19之间存在一定的协同作用.结论:合成的P19融合肽可以作为HA类骨损伤修复材料的生物活性添加成分以及种植体涂层的修饰,这一方法和技术在HA骨修复材料的改进以及种植体涂层修饰方面有着潜在的临床应用前景. 相似文献
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目的 观察TGFβ1正、反义基因转染6 0 Coγ射线照射的HELF后对其TGFβ1mRNA及Ⅰ型前胶原mRNA表达调控的影响。方法 采用脂质体介导法进行基因稳定转染 ,转染细胞经PCR ,DNAdotblot鉴定和RNAdotblot分析。结果 选择 5Gy照射细胞 ,采用LipofectAMINE将TGFβ1正、反义基因表达载体pMAMneo TGFβ1和pMAMneo AntiTGFβ1转入HELF ,转染细胞经G418抗性筛选出来 ,并且在糖皮质激素地塞米松诱导下培养。提取培养细胞的RNA和染色体DNA ,转染细胞DNA与地高辛标记的neo特异探针杂交阳性 ,且可用neo基因特异的PCR引物扩增出 2 76bp的阳性片段。对提取的RNA用地高辛标记的TGFβ1探针和α1(Ⅰ )寡核苷酸探针经RNAdotblot分析表明 ,转染pMAMneo AntiTGFβ1的细胞其TGFβ1mRNA水平下降 ,而转染pMAMneo TGFβ1的细胞其TGFβ1mRNA水平则升高。对于Ⅰ型前胶原mRNA ,前者表达水平比未转染细胞低 ,后者则略高。 结论 TGFβ1反义基因转染6 0 Coγ射线照射的人胚肺成纤维细胞后可以使细胞中TGFβ1mRNA含量水平减少 ,使Ⅰ型前胶原mRNA表达水平降低 相似文献
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目的 调查几种细胞因子及其受体在放射性肺纤维化(RPF)发生中的作用。方法 采用免疫组织化学、细胞免疫化学和原位杂交的方法对RPF大鼠肺组织细胞进行了研究。结果 正常大鼠肺组织有TGFβ1和TGFβR的弱表达,照射动物肺脏TGFβ1的表达于照射后2周开始增高,从第8周直到3月表达水平最高,肺脏表达TGFβ1的部位主要是支气管上皮细胞、肺泡巨噬细胞、肺泡上皮细胞、支气管和血管平滑肌细胞以及成纤维细胞等,TGFβ2的表达变化规律除了比TGFβ1稍弱外类似于TGFβ1。TGFβR表达增强的时间比TGFβ1稍晚,于第8周开始增强,直到1年也保持较高水平的表达,bFGF和PDGF在照射后2~3个月表达水平明显增高。对支气管肺泡灌洗液中的细胞TGFβ1免疫细胞化学研究表明:其中的细胞,特别是巨噬细胞表达时间的出现得较早,于 相似文献
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通过PCR和体外重组技术对TGFβ1基因5'和3'非翻译区进行了改造,在此基础上,通过构建缺失突变体,采用双脱氧终止法,利用pUC/M13系统测定了人TGFβ1cDNA的全长序列。这为今后研究不同长度非翻译区对TGFβcDNA表达水平的影响并实施其高效表达奠定了基础。 相似文献
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目的探索TGFβ1反义基因和脂质体混合物以及重组腺病毒转移载体进行放射性肺纤维化体内基因治疗的可行性.方法通过支气管插管与滴注的方式进行.结果检测分析表明,转基因后1.5 d,肺组织DNA用neo基因特异引物PCR扩增阳性;第5.5天,PCR扩增67%(2/3)阳性.RNA dot blot分析表明,转染TGFβ1反义基因的肺组织TGFβ1 mRNA含量降低.转染35 d后取动物肺组织测定其羟脯氨酸含量表明,尽管转染TGFβ1反义基因的动物其肺组织羟脯氨酸含量比正常对照组高(P<0.01),但它比生理盐水治疗对照组动物和转染TGFβ1正义基因的动物其肺内羟脯氨酸含量低(均为P<0.01).用含有荧光素酶基因的复制缺陷型腺病毒感染大鼠,其肺脏均检测到了有荧光素酶活性蛋白的表达.结论由聚阳离子脂质体介导的TGFβ1反义基因进行的肺纤维化体内基因治疗是一个简单易行的方法,它可以减缓肺纤维化的发生;用复制缺陷的重组腺病毒进行肺脏的基因治疗是一种较为理想的方法,有望成为治疗肺纤维化的有效的新途径. 相似文献