大鼠损伤脊髓提取液对新生大鼠DRNGs体外培养的影响

目的：探讨损伤脊髓提取液对新生大鼠DRGNs（Dorsal Root Ganglion neuron,背根节神经元）轴突生长和延长的影响。方法：将正常、假手术及全瘫脊髓提取液同新生大鼠DRGsN共同培养,观察神经轴突平均长度和轴突远端微管（TubulinβIII）荧光表达。结果：全瘫组DRGNs平均轴突长度明显缩短,生长锥塌陷,轴突远端和生长锥的TubulinβIII表达明显减弱,与空白组比较有显著统计学差异;假手术组DRGNs平均轴突长度比空白组略缩短,但生长锥无塌陷,轴突远端和生长锥TubulinβIII表达强;正常组DRGNs平均轴突长度与空白组比较无差异,轴突远端TubulinβIII表达明显。结论：完全瘫痪脊髓提取液能明显抑制DRGNs轴突生长,导致生长锥塌陷;假手术脊髓提取液能轻度抑制轴突生长,但生长锥无明显塌陷;正常脊髓提取液不影响轴突生长。     

肾神经在缺血再灌注性肾损伤室旁核电活动变化中的作用

目的:观察保留和去除大鼠肾神经后,肾缺血再灌注性肾损伤过程中室旁核电活动的变化,了解肾神经在缺血再灌注性肾损伤时室旁核电活动变化中的作用。方法:20只SD大鼠(250±30g)随机分为二组(n=10):①神经组:分离出左侧肾神经,夹闭肾动脉缺血30min,再灌注30min。②去肾神经组:分离并剪断左侧肾神经,夹闭肾动脉缺血30min,再灌注30min。参照大鼠脑立体定位图谱(George Paxinos,Charles Watson),用微电极全程记录各组肾缺血30min,再灌注30min室旁核放电活动。结果:保留肾神经组大鼠缺血和再灌注瞬间室旁核电活动明显减少(P<0.05)。随着缺血和再灌注时间的延长,室旁核放电活动逐渐增强(P<0.05)。去肾神经组大鼠缺血和再灌注瞬间时室旁核放电未出现快速性变化。在缺血和再灌注过程中,室旁核放电进行性增加,与保留肾神经组比较,去神经组缺血和再灌注期间各观察时间点室旁核放电均显著性增强(P<0.05)。结论:急性肾缺血再灌注可引起室旁核放电活动增强;肾缺血再灌注过程中室旁核放电活动的快速性变化与肾神经有关;肾神经具有抑制肾缺血再灌注时室旁核紧张性的作用。     

Y27632对脊髓损伤微环境下新生大鼠背根节神经元轴突再生的影响

目的:探讨Rho蛋白激酶Ⅱ(Rho-associated coiled-coil-containing protein kinase Ⅱ,ROCK Ⅱ)特异性抑制剂Y-27632对脊髓损伤微环境下新生大鼠背根节(dorsal root ganglion,DRG)神经元轴突冉生和延长的影响.方法:取新生(<5d)SD大鼠胸腰段DRG神经元进行原代培养、提纯和鉴定.将健康雌性SD成年大鼠15只随机分为脊髓损伤组、假手术组和正常组,每组5只;用WD法制成T9平面脊髓损伤动物模型,造模7d后取T8～T10节段脊髓制作脊髓提取液.将新生大鼠DRG神经元分为5组进行培养:A组,DRG神经元+PBS;B组,DRG神经元+正常组脊髓提取液;C组,DRG神经元+假手术组脊髓提取液;D组,DRG神经元+损伤脊髓提取液;E组,DRG神经元+损伤脊髓提取液+不同浓度(5、10、20、30、40、50μmol/L)Y27632.培养2d后观察并比较各组新生大鼠DRG神经元轴突平均长度和微管(Tubulin βⅢ)荧光表达强度.结果:A、B和C组平均神经轴突长度及轴突远端tubulin βⅢ表达强度比较无统计学差异(P>0.05);D组明显减小,与A、B和C组分别比较有统计学差异(P<0.05).5、10μmol/L Y27632治疗组平均轴突长度以及轴突远端和生长锥tubulin μⅢ表达强度比D组有所增加(P<0.05),10μmol/L Y27632治疗组增加更明显,但小于A、B和C组(P<0.05).20～50μmol/L Y27632治疗组平均轴突长度以及轴突远端和生长锥tubulin βⅢ表达强度三组间比较无统计学差异(P>0.05);与5～10μmol/L Y27632治疗组、D组比较明显增加(P<0.05);与A、B、C组比较平均轴突长度无统计学差异(P>0.05),平均荧光密度明显增加(P<0.05).结论:损伤脊髓提取液能明显抑制新生大鼠DRG神经元轴突生长,导致轴突回缩.加入5～10μmol/L Y27632能促进轴突生长,20～50μmol/L Y27632更能明显促进轴突生长.     

脊髓损伤后轴突再生抑制分子信号传导的研究进展

为什么周围神经损伤后轴突可以再生并恢复功能,而中枢神经系统(CNS)损伤后却不能再生并留下永久性功能障碍?早在100年前Xajal就观察到:家兔脊髓切断后2 d,近侧端的轴突膨大,第5～6天像发育阶段神经轴突的形成一样,呈管样开始出芽,但很快塌陷,形成球状末端.     

创伤性颈脊髓中央综合征的治疗观察

目的：观察创伤性颈脊髓中央综合征的治疗效果。方法：分析我院2007年1月至2008年12月收治的创伤性颈脊髓中央损害综合征患者25例。伤后7-10天内手术17例（A组）,伤后1-3月手术8例（B组）;无骨折脱位17例、伴颈椎骨折脱位8例、伴颈椎管狭窄11例。结合手术前颈椎X线、CT、MR／检查及术前和术后第6月ASIA（American Spinal InjuryAssocia—tion）评分进行分析。结果：所有患者术后均获随访,平均随访8月。①经手术治疗后,所有患者脊髓神经功能均得到了明显恢复。评分有统计学意义（P〈0．05）;②伤后7-10天内手术组患者术后6月ASIA评分明显高于伤后1-3月手术组,评分有统计学意义（P〈0．05）。结论：①因无骨折脱位型CCS伴颈椎管狭窄的患者缺乏明显的X线、CT表现,容易漏诊与误诊;②CCS患者早期手术解除颈脊髓压迫,稳定颈椎,有助于脊髓神经功能的恢复。     

葡萄糖原合成酶-3β抑制剂促进大鼠脊髓损伤后轴突再生与下肢功能恢复的研究

目的 探讨葡萄糖原合成酶-3β(GSK-3β)的抑制剂噻二唑-8(TDZD-8)对大鼠脊髓损伤后轴突再生与下肢功能恢复的影响. 方法 健康成年雌性SD大鼠108只,均制作T9平面完全性截瘫的脊髓损伤动物模型,并在L4平面蛛网膜下腔插入注药导管后随机分为3组(n=36):TDZD-8治疗组(A组)经注药导管注入1 mg/(kg·d)的TDZD-8,PBS治疗组(B组)经注药导管注入60 μL/d的磷酸盐缓冲液,C组为空白对照组.各组均在瘫痪后lh开始注射,连续注射3周.注射后2 h、4h、8h、24 h、7 d,TUNEL法观察神经元细胞凋亡的表达;注射后7、14、28 d,兔抗生长相关蛋白-43(GAP-43)的表达;注射后1、2、3、6、8、12周,Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分评估下肢运动功能恢复情况;注射后8周,采用免疫荧光法观察损伤节段轴突再生情况. 结果 脊髓损伤后2h观察到凋亡细胞,注射后2h、4h、8h、24 h、7 dA组的神经元细胞凋亡数明显低于B、C组,各组细胞凋亡表达在注射后8h达到高峰,此后逐渐减少,差异均有统计学意义(P＜0.05);注射后7、14、28 d,A组的GAP-43表达面积明显高于B、C组,各组GAP-43表达在损伤后14 d达到高峰,此后逐渐减少,差异均有统计学意义(P ＜0.05);从注射后3周开始,A组的BBB评分明显高于B、C组,差异有统计学意义(P＜0.05).A组有较多再生神经纤维穿过损伤部位,而B、C组只有少许再生神经纤维穿过损伤部位,注射后8周A组阳性标记的皮质脊髓束纤维面积明显高于B组、C组,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 TDZD-8能够抑制细胞凋亡,减少继发性脊髓损伤,上调GAP-43的表达,促进轴突再生、延长,促进大鼠后肢功能恢复.     

TDZD-8对新生大鼠背根节神经元轴突再生影响的体外实验研究

目的:探讨葡萄糖原合成酶-3β(glycogen synthase kinase 3B,GSK-3β)的抑制剂TDZD-8对新生大鼠背根节(dorsal root ganglion,DRG)神经元轴突生长和延长的影响.方法:取新生(<5d)SD大鼠胸腰段背根节进行原代培养、提纯和鉴定.用WD法制成健康成年雌性SD大鼠T9平面完全性截瘫的脊髓损伤动物模型.造模7d后取T8～T10节段脊髓制作脊髓提取液.将不同浓度TDZD-8与成年大鼠脊髓提取液和新生大鼠DRG神经元分组培养:A组,DRG神经元+磷酸缓冲液(phosphate-bufered saline,PBS);B组,DRG神经元+正常脊髓提取液;C组,DRG神经元+假手术脊髓提取液:D组,DRG神经元+全瘫脊髓提取液;E组,DRG神经元+全瘫脊髓提取液+不同浓度TDZD-8.培养2d后观察并比较各组新生大鼠DRG神经元轴突平均长度和微管(Tubulin 8Ⅲ)荧光表达强度.结果:A组、B组和C组之间平均神经轴突长度及轴突远端Tubulin βⅢ表达强度比较,无统计学意义,D组明显减小,与A、B和C组分别比较,有统计学意义(P<0.01).0.5～3μM TDZD-8处理组平均轴突长度及Tubulin βⅢ荧光表达强度均明显高于A、B、C组,与D组比较,更为显著,差异均具有统计学意义(P<0.01).5～25μM TDZD-8处理组平均轴突长度与A、B、C组分别比较,明显缩短且有统计学意义(P<0.01),与D组比较无统计学差异(P>0.05);轴突远端Tuburn βⅢ表达比A、B、C、D组及0.5～3μM TDZD-8处理组明显增强,有统计学意义(P<0.01).结论:完全瘫痪脊髓提取液明显抑制DRG神经元轴突生长,轴突回缩.低浓度TDZD-8能促进轴突生长.形成多个轴突或轴突分支,而高浓度TDZD-8明显抑制轴突生长,导致轴突回缩.     

联合应用Y27632和TDZD-8促进大鼠DRG神经元轴突再生

目的 探讨联合应用ROCK II(Rho-associated coiled-coil-containing protein kinase II,ROCK II)和糖元合成酶-3β(glycogen synthase kinase,GSK-3β)抑制剂对新生大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元轴突再生和延长的影响.方法 (1)取新生SD(Sprague-Dawley,SD)大鼠(<5 d)2只,显微操作下取胸腰段背根节,进行原代培养.(2)健康雌性成年SD大鼠15只,随机数字表法分为:手术瘫痪组(5只)、假手术对照组(5只)和正常组(5只),瘫痪组用WD(weight-drop,WD)法制成SD大鼠T9平面完全性截瘫的脊髓损伤动物模型,假手术组仅做椎板切除,造模7 d后取T8-10节段脊髓制作脊髓提取液.(3)将Y27632(ROCK II抑制剂)、TDZD-8(GSK-3B抑制剂)及伤后7 d全瘫脊髓提取液与新生大鼠DRG神经元分组培养2 d.A组:DRG神经元+PBS,B组:DRG神经元+全瘫脊髓提取液,C组:DRG神经元+全瘫脊髓提取液+不同浓度的Y26732,D组:DRG神经元+全瘫脊髓提取液+不同浓度的TDZD-8,E组:DRG神经元十全瘫脊髓提取液+Y26732+TDZD-8,观察并比较各组新生大鼠DRG神经元轴突平均长度和微管蛋白βⅢ(TubulinβⅢ)荧光表达强度.结果 (1)与A组比较,B组轴突长度明显减小(P<0.01),轴突远端TubulinβⅢ表达强度明显减弱(P<0.01).(2)C组中,5、10μmol/L Y27632治疗组轴突长度以及轴突远端和生长锥TubulinβⅢ表达强度比B组有所增加,但小于A组(P<0.05);20～50μmoL/L Y27632治疗组轴突长度以及轴突远端和生长锥TubulinβⅢ表达强度较B组增加明显(P<0.01),其中30 μmol/L Y27632治疗组最明显.(3)D组中,0.5～3 μmol/L TDZD-8治疗组轴突长度比A和B组明显增加(P<0.01),其中1μmol/L TDZD-8治疗组轴突长度最长;而5～25μmol/L TDZD-8治疗组轴突长度明显缩短,与B组比较,差异无统计学意义,且明显小于A组(P<0.01);TDZD-8各浓度组轴突干和生长锥TubulinβⅢ表达均明显增强,与A和B组比较差异有统计学意义(P<0.01).(4)E组联合应用30 μmol/LY27632和1 μmot/LTDZD-8,其轴突长度明显长于B组(P<0.01)和A组(P<0.01),且轴突的分枝更多;与A组比较,E组轴突干和生长锥TubulinβⅢ表达更强(P<0.05).结论 完全瘫痪脊髓提取液能明显抑制DRG神经轴突生长,导致生长锥塌陷;高浓度比低浓度的Y27632能明显促进轴突生长,形成细长的生长锥;低浓度比高浓度的TDZD-8能促进轴突生长,形成粗大的生长锥;适当浓度的Y27632和TDZD-8联合应用可促进轴突延长与轴突分枝形成,有利于形成神经环路.

Abstract：

Objective To explore the effect on effect of combined use of Y27632 (ROCK II inhibitor)and TDZD-8(GSK-3β inhibitor)on axonal regeneration of dorsal root ganglion (DRG) neurons in neogenetic rats. Methods All the thoracolumbar DRGs of two neogenetic Sprague-Dawley (SD)rats(<5 days)were harvested under the stereopsis raicrostat,and then the DRG neurons were cultured,purified and indentified.Fifteen adult female SD rats were randomly divided into three groups,ie,complete paraplegia group(5 rats),sham operation control group(5 rats)and normal group(5 rats)respectively.The T8-10 spinal cord extracts (SCEs) were harvested in the complete paraplegia group,sham operation control group and normal group respectively at day 7 after spinal cord injury.The experiment was divided into group A(DRG neurons + PBS),group B(DRG neurons + complete paralysis SCE),group C(DRG neurons + complete paralysis SCE + different concentration Y27632),group D(DRG neurons + complete paralysis SCE + different concentration TDZD-8)and group E(DRG neurons + complete paralysis SCE + proper concentration Y27632 and TDZD-8).The average axonal length and expression intensity of Tubulin βⅢ at distal end of neuronal axons were observed after two days of co-culture respectively in intro. Results (1)The average axonal length and expression intensity of Tubulin βⅢ at axon shaft and growth cone in the group B were significantly shorter and weaker than that in the group A,with statistical difference.(2)In the group C,the average axonal length and expression intensity of Tubulln βⅢ at axon shaft and growth cone in 5-10 μmol/L Y27632 treatment groups were more than that in the group B but lower than that in the group A.The average axonal length and expression intensity of Tubuhn βⅢ at axon shaft and growth cone in 20-50 μmol/L Y27632 treatment group were longer and stronger than that in the group A and the group B,especially the group B.Among different concentration Y27632 treatment groups,there was a longest average axonal length and strongest expression intensity of Tubulin βⅢ in 30 μmol/L treatment group.(3) In the group D,there was a longer average axonal length in 0.5-3 μmol/L TDZD-8 treatment group than that in the group A and the group B,with the longeat average axonal length in l μmool/L TDZD-8 treatment group.In 5-25 μmol/L TDZD-8 treatment groups,the average axonal length showed no difference compared with the group B but wns shorter than that in the group A.In all different concentration TDZD-8 treatment groups,the expression intensity of Tubulin βⅢ at axon shaft and growth cone was significantly stronger than that in the groups A and B.(4) In the group E,although the average axonal length was increased in the group E,there was no statisilcal difference compared with the group A,30 μmol/L Y27632 treatment group and l μmol/L TDZD-8treatment group.There was a significantly longer average axonal length in the group E than it in the group B and the expression intensity of Tubulin βⅢ at axon shaft and growth cone was stronger in the group E compared to the group A,30 μmol/L Y27632 treatment group and l μmol/L TDZD-8 treatment group.Conclusion The complete paralysis SCEs obviously inhibits DRG axonal growth,induces axonal retraction and growth cone collapse.High concentration of Y27632 can more obviously promote the axon growth compared with the low concentration,while the low concentration of TDZD-8 can obviously promote the axon growth.Combined use of appropriate concentration of TDZD-8 and Y27632 can promote the axon growth and induce the axons branching,as facilitates the formation of the axon circuit.     

地震中颈椎骨折伴颈脊髓损伤和(或)肺部并发症患者救治体会

目的 分析四川大地震中颈椎骨折伴颈脊髓损伤患者肺部并发症的发生原因并总结救治体会.方法 回顾性分析泸州医学院附属医院神经外科自2008年5月12日至2008年8月6日收治的9例颈椎骨折伴颈脊髓损伤患者的临床资料.结果 颈椎骨折伴颈脊髓损伤患者均采取手术治疗,其中6例伤后5 d内发生肺部并发症,其中肺炎3例,通气障碍2例,肺水肿和血气胸1例,经积极的呼吸道管理等非手术治疗,肺部并发症都得到有效控制.结论 颈椎骨折伴颈脊髓损伤急性期(<5 d)常发生严重肺部并发症.以高位损伤(C4>以上)、合并胸部损伤、高龄、有肺部疾患史与吸烟史者更易发生,早期发现后内科治疗效果好.