阻断Pannexin-1 可减轻肾脏组织炎症细胞浸润和缓解顺铂诱导的急性肾损伤

目的探讨阻断pannexin-1在顺铂致急性肾损伤中的作用。方法将26只6~8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、顺 铂模型组、顺铂+Carbenoxolone 处理组。顺铂模型组、顺铂+Carbenoxolone 处理组予顺铂20 mg/kg 腹腔注射1 次,顺铂+ Carbenoxolone处理组于顺铂处理前30 min、处理后24、48 h分别腹腔注射Carbenoxolone 20 mg/kg,所有组于顺铂处理72 h处 死小鼠,留取血浆及肾组织样品进行下一步检测。RT-qPCR及Western blot 检测肾组织内pannexin-1 的表达水平;检测血浆 BUN、Scr水平评估肾功能;PAS 染色评估肾组织病理学改变;免疫组化检测肾损伤分子1（KIM-1）表达水平及RT-qPCR检测肾 损伤分子1与中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）mRNA水平评估肾小管损伤情况;免疫荧光检测肾组织F4/80+巨噬 细胞及CD4+ T细胞浸润水平;RT-qPCR及Western blot检测肾组织pannexin-1的mRNA及蛋白表达水平;用终浓度50 μmol/L 顺铂刺激人近端小管上皮细胞株HK-2 细胞4、6、12、18、24 h 构建体外顺铂致急性肾损伤模型;RT-qPCR及Western blot 检测 HK-2细胞pannexin-1的表达水平。结果与对照组相比,顺铂模型组肾组织pannexin-1蛋白水平及mRNA水平表达上调（P< 0.005）;体外实验结果显示,与对照组相比,顺铂模型组的pannexin-1蛋白水平及mRNA水平表达水平上调（P<0.005）;与顺铂 模型组相比,体内应用pannexin-1抑制剂Carbenoxolone处理后,可减轻顺铂所致的肾脏损伤,肾小管损伤程度明显减轻,顺铂+ Carbenoxolone处理组的血浆BUN、Scr水平回降（P<0.01）,肾组织KIM-1、NGAL表达减少（P<0.05）,肾组织浸润的F4/80+巨噬 细胞（P<0.01）及CD4+ T 细胞（P<0.05）减少。结论在顺铂所致急性肾损伤小鼠模型中,Pannexin-1 表达显著上调,阻断 pannexin-1减少炎症细胞浸润,可减轻肾损伤。     

Palbociclib可诱导人肾小管上皮细胞周期阻滞及衰老

目的 探讨Palbociclib药物对肾小管上皮细胞周期进展及细胞增殖的影响。方法 体外培养肾小管上皮细胞HK-2分别给予不同浓度（0、1、5、10、20 μmol/L）的Palbociclib进行处理，通过细胞计数和CCK8法检测不同浓度及时间下Palbociclib对HK-2细胞增殖及细胞活力的影响。EDU染色检测不同浓度下Palbiciclib对HK-2细胞作用5 d后的细胞增殖情况。流式分析检测Palbociclib对HK-2细胞生长周期分布的影响。采用SA-β-Gal、C12FDG等衰老染色技术检测不同浓度下Palbociclib作用于HK-2细胞5 d后其对衰老表型的诱导情况。RT-PCR检测P16、P21、P53及衰老相关分泌表型的mRNA相对表达水平，Western blot检测P16、P21和P53的蛋白表达情况。结果 Palbociclib抑制HK-2细胞增殖并诱导细胞周期阻滞于G1期。相比于对照组而言，高剂量（10 μmol/L）的 Palbociclib 可明显抑制 HK-2 细胞增殖活性，且在第 5 天时增殖抑制效果最为明显（P<0.01）。Palbociclib诱导HK-2细胞生长周期主要阻滞于G1期，而进入S期的细胞数相比于对照组来说明显减少（P<0.01）。Palbociclib可诱导HK-2细胞发生衰老，通过SA-β-Gal和C12FDG衰老染色检测，结果表明在Palbociclib作用下，HK-2细胞的胞内衰老相关半乳糖苷酶活性明显升高。RT-PCR及Western blot结果显示Palbociclib可明显上调HK-2细胞中P16、P21、P53等衰老相关因子的基因和蛋白表达水平（P<0.01）。与对照组相比，RT-PCR检测Palbociclib作用下的HK-2细胞中衰老相关分泌因子的基因表达水平也升高（P<0.01）。结论 Palbociclib可通过抑制HK-2细胞生长并阻滞其细胞周期进程进而诱导HK-2细胞发生衰老。