甘露醇与甘油果糖联合治疗脑出血的Meta分析

目的：评价甘露醇与甘油果糖联合治疗脑出血的临床疗效及不良反应是否与单用甘露醇存在差异,为指导临床治疗脑出血提供相关循证依据。方法通过对中国期刊全文数据库（CNKI）、中国生物医学文献数据库、维普中文科技期刊数据库、万方数据知识服务平台中相关文献进行检索,以及进行手工检索,并制定相应的纳入和排除标准筛选文献,并应用Jadad质量评分法对已纳入的文献进行严格的质量评价,同时进行异质性检验。若多个研究结果的效应一致,则采用固定效应模型;反之,采用随机效应模型。结果甘露醇联合甘油果糖能更加有效地改善患者的神经功能状态,与单用甘露醇差异明显（ R R＝1．12,95％CI：1．03～1．22,P＜0．01）;甘露醇联合甘油果糖能减少对患者肾功的损害,减少患者并发症（RR＝0．34,95％ CI：0．25～0．47, P＜0．01）;甘露醇联合甘油果糖能减少患者用药后的电解质紊乱情况（RR＝0．31,95％ CI：0．19～0．49,P＜0．01）。结论甘露醇与甘油果糖联合使用相比单用甘露醇能更有效改善脑出血患者预后,且不良反应较小。     

Twist基因逆转录病毒载体的构建及其诱导正常乳腺上皮细胞发生上皮间质转化

目的 构建Twist基因逆转录病毒载体,研究其对人正常乳腺上皮细胞MCF10A的影响.方法 酶切pcDNA3/myc-Twist获得myc-Twist,克隆到逆转录病毒载体pBABE-puro中,构建重组质粒pB AB E-myc-Twist.通过酶切、测序鉴定Twist基因正确后,在体外将质粒pBABE-myc-Twist和其对照分别与包装质粒pAmpho共同转染人胚肾上皮细胞系293T细胞,进行逆转录病毒的包装,并感染人正常乳腺MCF10A上皮细胞,用嘌呤霉素(puromycin)筛选,获得成功转入Twist的MCF10A-Twist细胞和MCF10A-Vector对照细胞.通过RT-PCR和Western blot法验证Twist细胞在MCF10A-Twist和MCF10A-Vector细胞内的表达.免疫荧光技术和Western blot法检测细胞内上皮间质转化(EMT)标志蛋白的表达.Transwell(R)法检测细胞的迁移和侵袭能力.结果 重组逆转录病毒载体质粒pBABE-myc-Twist经酶切和测序鉴定构建正确;Twist基因被逆转录病毒成功导入MCF10A细胞,并在靶细胞内稳定表达,RT-PCR检测到Twist mRNA在MCF10A-Twist细胞中表达,Western blot法检测发现myc-Twist蛋白在MCF10A-Twist细胞中表达;免疫荧光和Western blot法检测显示在MCF10A-Twist细胞中E-cadherin表达显著下调、vimentin表达明显上调;与MCF10A-Vector细胞相比,Transwell(R)法检测发现MCF10A-Twist细胞迁移和侵袭能力明显增加(P＜0.01).结论 Twist诱导MCF10A细胞发生EMT转化,并促进其迁移和侵袭.     

转录因子Twist基因慢病毒质粒构建及其促进乳腺肿瘤上皮细胞MCF-7上皮间质转化

目的：构建转录因子Twist基因的慢病毒质粒,其高表达促进乳腺肿瘤上皮细胞MCF-7上皮间质转化（epithelial to mesenchymal transition,EMT）。方法：pcDNA3/myc-tagged-Twist质粒扩增并亚克隆至载体pLVX-puro中构建成pLVX-puro-myc-tagged-Twist慢病毒质粒。将其转染人胚肾细胞HEK293T,收取病毒上清感染乳腺癌MCF-7细胞。免疫荧光法和蛋白质印迹法（Western blot）检测转录因子Twist 蛋白、上皮标志蛋白E-钙黏蛋白（E-cadherin）、间质标志蛋白波形蛋白（Vimentin）的表达。Transwell法检测细胞侵袭能力。结果：pLVX-puro-myc-tagged-Twist慢病毒质粒酶切及测序结果完全正确;相对于对照细胞（MCF-7-Vector细胞）,转染Twist基因的MCF-7细胞（MCF-7-Twist细胞）Twist蛋白、间质标志蛋白Vimentin表达水平明显升高,上皮标志蛋白E-cadherin表达水平明显降低（P<0.05）,侵袭能力显著增强（P<0.05）。结论：pLVX-puro-myc-tagged-Twist慢病毒质粒构建成功,转录因子Twist通过MCF-7细胞上皮间质转化促进了乳腺肿瘤侵袭能力增强。