微小RNA-155反义寡核苷酸对乳腺癌MDA-MB-157细胞及裸鼠移植瘤的作用

目的 ：探讨微小RNA-155（microRNA-155,miR-155）反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide, ASO）对乳腺癌MDA-MB-157细胞增殖、凋亡及裸鼠移植瘤的作用。方法：设计合成化学修饰的miR-155 ASO,通过LipofectamineTM 2000转染MDA-MB-157细胞,激光共聚焦检测转染率,real-time PCR测定转染后miR-155表达水平的变化,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,观察miR-155 ASO对裸鼠成瘤能力的影响,免疫组织化学法检测瘤体组织Caspase-3的表达。结果：激光共聚焦检测转染率达80%以上。转染miR-155 ASO后,miR-155表达明显下降,细胞增殖能力降低,凋亡增加。miR-155 ASO能明显抑制裸鼠移植瘤生长,抑制率为52.98%,并且能显著增加Caspase-3的表达。结论：miR-155 ASO能显著下调miR-155的表达水平,继而抑制乳腺癌MDA-MB-157细胞的增殖,促进其凋亡;并且通过增加靶基因Caspase-3的表达,抑制裸鼠移植瘤的生长,为miR-155作为乳腺癌治疗靶点提供了实验依据。     

微小RNA-155反义寡核苷酸对乳腺癌MDA—MB-157细胞及裸鼠移植瘤的作用

目的：探讨微小RNA-155（microRNA．155,miR-155）反义寡核苷酸（antisenseoligonucleotide,AS0）对乳腺癌MDA-MB-157细胞增殖、凋亡及裸鼠移植瘤的作用。方法：设计合成化学修饰的miR-155ASO,通过Lipofectamine^TM 2000转染MDA-MB-157细胞,激光共聚焦检测转染率,real-timePCR测定转柒后miR-155表达水平的变化,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,观察miR-155ASO对裸鼠成瘤能力的影响,免疫组织化学法检测瘤体组织Caspase-3的表达。结果：激光共聚焦检测转染率达80％以上。转染miR-155AS0后,miR-155表达明显下降,细胞增殖能力降低,凋亡增加。miR-155AS0能明显抑制裸鼠移植瘤生长,抑制率为52．98％,并且能显著增加Caspase-3的表达。结论：miR-155AS0能显著下调miR-155的表达水平,继而抑制乳腺癌MDA-MB-157细胞的增殖,促进其凋亡;并且通过增加靶基因Caspase-3的表达,抑制裸鼠移植瘤的生长,为miR-155作为乳腺癌治疗靶点提供了实验依据。     

乳腺癌组织中CC3/Tip30蛋白的表达及其临床意义

目的:探讨CC3/Tip30在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法:应用免疫组化方法检测112例乳腺癌组织与36例正常乳腺组织CC3/Tip30蛋白的表达情况,分析其与乳腺癌临床病理特征及预后的关系。结果:CC3/Tip30在乳腺癌组织中的阳性表达率为44.64%,明显低于在正常乳腺组织中的表达,乳腺癌组织中CC3/Tip30蛋白表达与TNM分期(χ2=3.902,P=0.048,r=-0.187)、淋巴结转移(χ2=5.508,P=0.019,r=-0.222)和Her-2(χ2=4.908,P=0.027,r=0.209)相关,而与患者年龄、肿瘤大小以及ER、PR表达状态无关;CC3/Tip30表达阳性组和阴性组的5年特异生存率分别为68.00%和43.50%,差异有统计学意义(P=0.001)。结论:CC3/Tip30蛋白在乳腺癌组织中表达下调,其缺失与乳腺癌的发展有关,且预后不良,可能为乳腺癌综合治疗提供依据。     

miR-155反义寡核苷酸对乳腺癌HS578T细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨微小RNA 155(microRNA-155,miR-155)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO)对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响.方法:设计合成全硫代磷酸化修饰的miR-155 ASO,通过LipofectamineTM2000(Invitrogen)转染于乳腺癌HS578T细胞.CCK-8法检测乳腺癌细胞转染后的增殖情况,流式细胞仪分析转染率并检测细胞凋亡情况.结果:流式细胞仪检测转染率达70.5%.CCK-8试验结果显示转染miR～155 ASO后.HS578T细胞存活数明显低于空白组和脂质体组.流式细胞仪检测显示转染miR-155ASO后,HS578T细胞凋亡数明显增加.结论:miR-155 ASO可抑制乳腺癌HS578T细胞增殖,并促进其凋亡.提示miR-155可能成为乳腺癌治疗的靶基因.     

miR-155在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨miR-155在乳腺癌中的表达及其临床意义.方法 收集2009年2月至6月乳腺癌手术切除标本45例,应用实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肿瘤组织及正常乳腺组织标本中miR-155的表达水平,探讨其表达与乳腺癌临床病理参数间的关系.结果 茎环RT-PCR检测miR-155表达的敏感性和特异性良好;miR-155在乳腺癌中相对表达量的中位值为0.360,显著高于其在正常乳腺组织中的表达(中位值0.135,P<0.05);miR-155的表达增高与TNM分期较晚(Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期的中位值分别为0.316、0.358和0.417)、淋巴结转移(转移组和非转移组的中位值分别为0.383和0.355)、高增殖指数(Ki67≤10%组和>10%组的中位值分别为0.353和0.387)、雌激素受体阳性(阳性组和阴性组的中位值分别为0.367和0.318)及孕激素受体阳性(阳性组和阴性组的中位值分别为0.398和0.335)有关(P值均<0.05).结论 miR-155在乳腺癌组织中表达增高,尤其是在雌、孕激素受体阳性的乳腺癌组织中表达增高更为明显.miR-155与乳腺癌的增殖、侵袭及转移密切相关,其可能成为乳腺癌治疗、预后判断的潜在生物学指标.     

Anti-HER2 ScFv-GFP融合蛋白在大肠杆菌中的表达及其靶向结合乳腺癌细胞的初步分析

目的：构建原核表达系统诱导获得携带绿色荧光的抗人表皮生长因子受体2（human epidermalgrowth factor receptor 2,HER2）单链抗体,分析其靶向结合HER2阳性肿瘤细胞的功能,探讨其应用于HER2阳性肿瘤分子诊断与靶向治疗的可能性。方法：将绿色荧光蛋白基因与鼠源性人抗HER2单链抗体基因拼接成融合基因anti-HER2 ScFv-GFP,构建原核表达载体重组子pBAD His B/anti-HER2-ScFv-GFP,转入大肠杆菌E.coli TOP10诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot法鉴定,Ni2＋-NTA亲和层析法纯化获得目的融合蛋白。将不同浓度的融合蛋白anti-HER2 ScFv-GFP分别与HER2阳性的乳腺癌细胞SKBR3、HER2阴性的MCF7混合,观察绿色荧光在不同癌细胞表面的分布。结果：成功获得长度为1 539 bp的融合基因,原核表达系统pBAD His B/anti-HER2-ScFv-GFP/TOP10成功构建并表达携带绿色荧光的抗HER2单链抗体,融合蛋白相对分子量大小约60 kDa。HER2阳性的SKBR3细胞表面有明显绿色荧光,细胞有皱缩现象,而HER2阴性MCF7被洗脱后无荧光。结论：携带绿色荧光的抗HER2单链抗体能牢固结合在HER2阳性的乳腺癌细胞SKBR3表面,绿色荧光可以起到报告作用。     

153例老年性乳腺癌的个体化治疗临床观察

目的：：探讨老年性乳腺癌的个体化治疗,为老年性乳腺癌患者提供循证医学证据。方法：回顾性总结153例70岁以上老年性乳腺癌的临床诊治及随访资料。结果：153例老年乳腺癌占同期乳腺癌的3.16%,47.06%的患者合并其他疾病,其中浸润性导管癌70.59%,激素受体(HR)阳性者58.82%,5年总生存率为68.46%,10年总生存率为58.17%。手术治疗137例,其中31例选择保乳手术,35例行前哨淋巴结活检术,另接受辅助化疗58例,占37.91%,接受内分泌治疗86例,占56.21%。结论：老年乳腺癌具有独特的临床和病理特点,保证患者依从性和治疗的完整性是老年乳腺癌综合治疗的关键,对于老年乳腺癌的治疗应在综合治疗的基础上遵循个体化的原则,从而提高老年乳腺癌患者的生存率及生活质量。     

乳腺癌组织中Crk蛋白的表达及其临床意义

目的探讨Crk在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化方法检测Crk在125例乳腺癌和20例乳腺良性肿瘤组织中的表达,分析其与乳腺癌临床病理特征及预后的关系。结果Crk在乳腺癌组织中的阳性表达率为39.2%,明显高于在乳腺良性肿瘤中的表达（χ^2=6.447,P=0.011）,Crk表达与乳腺癌组织学分级（χ^2=4.965,P=0.026）有关,与TNM分期（r=0.258,P=0.004）、淋巴结转移（r=0.261,P=0.004）和HER-2（r=0.287,P=0.021）呈正相关;Crk表达阳性组和阴性组的5年特异生存率分别为38.4%和63.4%,差异有统计学意义（P=0.018）。结论Crk蛋白在乳腺癌组织中表达上调,其高表达提示乳腺癌生物学恶性度较高,预后不良。对乳腺癌患者组织标本进行Crk检测,有助于指导乳腺癌患者的个体化治疗。     

融合蛋白anti-HER2-ScFv-GFP在昆虫细胞中的表达及其靶向结合乳腺癌细胞的功能分析

目的:利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达获得携带绿色荧光蛋白(GFP)的抗人表皮生长因子受体2(HER2)的单链抗体可变区片段(ScFv),分析其靶向结合乳腺癌细胞表面受体HER2的功能。方法: 构建融合基因anti-HER2-ScFv-GFP,重组获得真核表达载体重组子pFAST Bac-to-Bac HT A/anti-HER2-ScFv-GFP,转化DH10Bac,收集重组病毒bacmid,分别转染、感染粉纹夜蛾细胞Tn-5B1-4,SDS-PAGE及Western blotting分析融合蛋白表达产物。Ni²⁺-NTA 亲和层析法纯化anti-HER2-ScFv-GFP融合蛋白后分别滴入乳腺癌细胞HER2阳性的SKBR3和HER2阴性的MCF7,对比携带绿色荧光的抗HER2单链抗体靶向结合乳腺癌细胞表面HER2受体情况。结果: 获得长度约1 539 bp的融合基因anti-HER2-ScFv-GFP,感染重组病毒的Tn-5B1-4细胞膜附近有明显绿色荧光,SDS-PAGE、Western blotting法检测到60 kD的特异性条带。 结合实验显示HER2阳性的SKBR3细胞表面有明显绿色荧光,而HER2阴性的MCF7细胞表面荧光易被洗脱。结论: 在Tn-5B1-4中成功表达携带绿色荧光的融合蛋白anti-HER2-ScFv-GFP,该携带绿色荧光的抗HER2单链抗体具有靶向结合乳腺癌细胞表面HER2受体的效能。     

乳腺乳头状癌17例的诊断与治疗

目的 探讨乳腺乳头状癌的临床特征、病理和诊治.方法 回顾性分析温州医学院附属第一医院收治的17例乳腺乳头状癌的临床资料.结果 乳腺乳头状癌发病率占同期收治所有乳腺癌的0.64％.患者均可触及肿块.12例患者行乳腺癌改良根治术,2例行单纯乳房切除术,2例行保乳手术,1例行乳房单纯切除+前哨淋巴结活检术.术后15例行辅助化疗,其中5例另行放射治疗.术后随访时间1个月～8年,中位随访时间为32.5个月.1例发生骨转移于术后2年死亡,1例发生多器官转移于术后7年死亡.结论 乳腺乳头状癌患者的治疗及预后与其病理类型密切相关.对导管内乳头状癌的治疗宜选择低创伤的手段,对浸润性乳头状癌及浸润性微乳头状癌须按浸润性导管癌治疗原则处理.