寄生虫的粘膜免疫研究进展

粘膜免疫是机体抗感染的第一道免疫屏障，寄生虫的粘膜免疫，对于寄生虫病发病机制的了解及免疫预防方法的优选有重要的意义。本文着重对弓形虫、隐孢子虫、血吸虫的粘膜免疫及粘膜疫苗的研究进展进行综述。     

日本血吸虫在大鼠体内的发育及其引起的病理变化

目的　观察日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)在大鼠体内的发育及其引起的病理变化。方法　以小鼠为对照 ,光镜下比较感染后第 4d、7d、14d大鼠与小鼠体内童虫的形态学及第 4 5d虫卵肉芽肿反应 ,用电镜观察两种鼠系肺内 4d龄童虫的体表特征。结果　感染后 4～ 7d ,大鼠肺期童虫周围出现严重的炎症反应 ,虫体体壁可见不同程度的损伤 ;感染后第14d ,大鼠体内童虫的形态及大小与小鼠体内的童虫相似 ,炎症反应减轻。感染后第 4 5d大鼠体内的雌虫比雄虫小 ,但雌雄虫均显著小于相应小鼠体内的成虫 (P <0 0 0 1)。经测定 ,大鼠肝内单个虫卵引起的肉芽肿平均直径明显小于小鼠肝内的相应病变 (P <0 0 1)。结论　Sj在大鼠体内发育差 ,引起的病理损害较小 ,这些特征可能与大鼠先天抗血吸虫感染免疫有关。     

日本血吸虫三个新跨膜蛋白基因的克隆和分析

目的　克隆并分析日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)新的抗原基因 ,为血吸虫病防治提供有效的疫苗候选分子。方法　以旋毛虫感染鼠血清为探针 ,筛选Sj成虫cDNA文库 ,对获得的阳性克隆进行PCR鉴定及测序。通过互联网对测序获得的核苷酸序列进行同源性分析 ,并预测新基因编码蛋白质的结构与功能。结果　共筛选出 9个阳性克隆 ,其插入SjcDNA片段大小在 0 .6～ 2 .1kb之间。测序分析获 5个新基因 ,其中Sj Ts1,Sj Ts3及Sj Ts5 (登录号为AY0 0 5 816 ,AF2 990 80 ,AY0 2 4 35 2 )分别编码 83,83,2 33个氨基酸组成的跨膜蛋白。Sj Ts1蛋白含 1个潜在的跨膜区 ,2个蛋白激酶C磷酸化位点、1个酪氨酸激酶磷酸化位点和 1个N 肉豆蔻酸化位点。Sj Ts3蛋白含两个跨膜区 ,1个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点。Sj Ts5蛋白为具有 5个跨膜区的跨膜蛋白 ,含 1个N 糖基化位点、2个cAMP与cGMP依赖的蛋白激酶磷酸化位点、4个蛋白激酶C磷酸化位点、1个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和 1个N 肉豆蔻酸化位点。结论　Sj Ts1、Sj Ts3与Sj Ts5基因编码的蛋白质均为受磷酸化激活控制的跨膜蛋白 ,可能为潜在的血吸虫病疫苗候选分子     

大鼠抗感染血清筛选日本血吸虫成虫cDNA文库

目的　探讨大鼠抗日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)感染的分子机制 ,为血吸虫病疫苗的研制提供新的抗原分子。方法　用Sj感染大鼠血清筛选Sj成虫cDNA文库 ,对阳性克隆cDNA插入片段进行PCR扩增及测序分析。 结果　对cDNA文库中约 3× 10 5个噬菌斑进行筛选 ,获 7个阳性克隆 ,其插入基因片段大小为 0 9kb～ 2 0kb。初步测序获 5个部分序列 ,其中R3与Sj线粒体基因明显同源 ;R5为新基因序列 ,命名为Sj-Cs2 (GenBank的登录号为AY0 36 5 80 ) ,经计算机分析该基因片段编码 2 0 6个氨基酸组成的跨膜蛋白 ,Sj-Cs2蛋白含有 3个蛋白激酶C磷酸化位点和 6个N -肉豆蔻酸化位点 ;其余序列亦为新基因片段 ,但无完整编码框。结论　筛选获得了与大鼠抗Sj感染有关的基因克隆 ,相关克隆cDNA全长的获取、新基因的结构与功能以及免疫学特性值得深入研究     

重组日本血吸虫胞质氨基肽酶粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染保护力的研究

目的　探讨重组日本血吸虫胞质氨基肽酶粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染的保护力。　方法　实验小鼠分成 4组 ,每组 11只 ,包括CTB、rSjGST2 6+CTB、rSjGST -CA +CTB滴鼻免疫组和PBS滴鼻免疫为对照组。在第 3次免疫后 2周 ,每只经腹部感染 (4 0± 1)条尾蚴。 45d宰杀动物 ,观察减虫率和减卵率。在初次免疫前和攻击感染前采集唾液和尾静脉采血 ,ELISA检测血清及唾液内特异抗体水平。　结果　血清特异IgA和IgG及唾液内sIgA水平升高。rSjGST -CA +CTB和rSjGST2 6+CTB滴鼻免疫组减虫率分别为 2 9 62 %和 3 1 5 5 %。每克肝减卵率分别为 45 0 0 %和63 3 4%。　结论　重组日本血吸虫胞质氨基肽酶粘膜免疫可诱导小鼠产生部分抗攻击感染的保护力     

寄生虫的粘膜免疫研究进展

粘膜免疫是机体抗感染的第一道免疫屏障 ,寄生虫的粘膜免疫 ,对于寄生虫病发病机制的了解及免疫预防方法的优选有重要的意义。本文着重对弓形虫、隐孢子虫、血吸虫的粘膜免疫及粘膜疫苗的研究进展进行综述     

重组血吸虫GST-Sj31蛋白对小鼠的免疫保护性研究

目的 在大肠杆菌中高效表达日本血吸虫组织蛋白酶B（Sj31）b、c片段蛋白，并对表达产物进行免疫保护效果测定。方法 分别将重组质粒pGEX-Sj31b、pGEX-Sj31c转化感受态大肠杆菌ER2566，在IPTG诱导下进行表达，表达产物GST-Sj31b、GST-Sj31c蛋白分别免疫小鼠，免疫第3次后进行攻击感染，观察其免疫保护效果。结果 在IPTG诱导下，表达载体中的SjGST基因与重组Sj31b和Sj31c基因获得了高产融合表达，用这两种融合蛋白免疫小鼠，分别诱导产生了22.71%和13.6%的减虫率；减卵率分别为54.21%和45.01%。结论 重组质粒pGEX-Sj31b，pGEX-Sj31c可在大肠杆菌中高效表达，表达的融合蛋白GST-Sj31b能诱导小鼠产生一定程度的抗Sj保护性免疫力，而GST-Sj31c的减虫率为13.6%。     

核酸疫苗PcDNA3.1/SjTs-1粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染保护力的研究

目的探讨日本血吸虫核酸疫苗pcDNA3.1/SjTs-1粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染的保护力.方法小鼠随机分为5组,每组12只,包括单磷脂A(MPL)、pcDNA3.1、pcDNA3.1 MPL、pcDNA3.1/SjTs-1和pcDNA3.1/SjTs-1 MPL组.滴鼻免疫.第3次免疫后2周,每只经腹部感染(40±1)条尾蚴.45 d宰杀动物,以观察减虫率和减卵率.在初次免疫前和攻击感染前尾静脉采血和收集粪便,ELISA检测血清内特异性IgA和IgG及粪内sIgA水平.结果pcDNA3.1/Sjs-1滴鼻免疫可诱导小鼠产生全身和粘膜免疫应答,且疫苗加佐剂组诱导小鼠产生的抗体水平高于不加佐剂组.pcDNA3.1/SjTs-1和pcDNA3.1/SjTs-1加MPL滴鼻免疫诱导小鼠产生的减虫率分别为24.98%和25.57%,减卵率分别为61.44%和64.59%.两者的减虫率和减卵率差异无显著性(P＞0.05).结论pcDNA3.1/SjTs-1滴鼻免疫可诱导小鼠产生全身和粘膜免疫应答及部分抗攻击感染的保护力.     

日本血吸虫核酸疫苗pcDNA3．1／SjMfl粘膜免疫小鼠的保护力研究

目的　探讨日本血吸虫核酸疫苗pcDNA3 1/SjMf1粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染的保护力。　方法　按常规方法构建pcDNA3 1/SjMf1。粘膜免疫采用滴鼻方法。供试小鼠随机分为 5组 ,每组 12只 ,包括MPL、pcDNA3 1、pcDNA3 1 MPL、pcDNA3 1/SjMf1和pcDNA3 1/SjMf1 MPL组。第 3次免疫后 2周 ,每只经腹部感染 ( 4 0± 1)条尾蚴。45d宰杀小鼠 ,以观察减虫率和减卵率。在初次免疫前和攻击感染前尾静脉采血的收集粪便 ,ELISA检测血清内特异性IgA和IgG及粪内sIgA水平。　结果　pcDNA3 1/SjMf1滴鼻免疫可诱导小鼠血清内特异性IgA和IgG及粪内sIgA水平。pcDNA3 1/SjMf1和pcDNA3 1/SjMf1加MPL滴鼻免疫诱导小鼠产生的减虫率分别为 2 7 97%和 3 4 75 % ,减卵率分别为 3 8 64 %和 43 3 7%。二者的减虫率和减卵率差异无显著性 (P >0 0 5 )。　结论　pcDNA3 1/SjMf1滴鼻免疫可诱导小鼠产生全身和粘膜免疫应答及部分抗击感染的保护力     

核酸疫苗VR1012/Sj31粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染的研究

目的　探讨日本血吸虫核酸疫苗VR10 12 /Sj3 1粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染的保护力。　方法　将实验小鼠随机分为 5组 ,每组 12只。A组为单磷脂 (MPL)组 ,B组为VR10 12组 ,C组VR10 12 MPL组 ,D组为VR10 12 /Sj3 1组 ,E组为VR10 12 /Sj 3 1 MPL组。滴鼻免疫。在第 3次免疫后 2周 ,每只鼠经腹部感染 40± 1条尾蚴 ,45d后宰杀 ,观察减虫率和减卵率。在初次免疫前和攻击感染前尾静脉采血并收集粪便 ,ELISA检测血清内特异性IgA、IgG及粪内sIgA水平。　 结果　与对照组相比 ,VR10 12 /Sj 3 1及VR10 12 /Sj 3 1加MPL滴鼻免疫均可引起小鼠血清IgG、IgA和粪内sIgA升高 ,且VR10 12 /Sj 3 1加佐剂滴鼻免疫组抗体的增幅 >不加佐剂组。VR10 12 /Sj3 1和VR10 12 /Sj3 1加MPL滴鼻免疫诱导小鼠产生的减虫率分别为 2 1.70 %和 2 8.82 % ,减卵率分别为 2 7.98%和 40 .72 %。二者的减虫率差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,但减卵率后者显著高于前者 (P <0 .0 5 )。　结论　VR10 12 /Sj3 1滴鼻免疫可引起小鼠产生全身和粘膜免疫应答及部分抗攻击感染的免疫保护力。