慢性乙型肝炎患者外周血CD8^＋T细胞亚群分布和PD-1表达特征研究

目的分析慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血中CD8^＋T细胞及其亚群表面程序性死亡受体-1（PD-1）表达的变化特征及其临床关联性。方法用流式细胞术检测14例CHB患者和15例健康对照者外周血中CD8^＋T细胞及其亚群初始T细胞（TN）、中央记忆T细胞（TCM）、效应记忆T细胞（TEM）、终末效应记忆T细胞（TEMRA）的频数及细胞表面PD-1的表达水平,同时收集患者一般资料、生化指标和乙型肝炎病毒（HBV）病毒学指标等临床资料。使用SAS 9.1统计软件分析数据,应用Mann-Whitney U test分析组间差异,应用Spearman秩相关进行相关性分析,P〈0.05为差异有统计学意义。结果与健康对照组相比,CHB患者的TEMRA亚群在CD8^＋T细胞中的频数显著降低（P=0.012）,总CD8^＋T细胞（P=0.018）及其TEM亚群（P=0.004）表面PD-1的表达水平显著上升。相关性研究显示,CD8^＋TEM细胞表面PD-1的表达水平与HBV DNA载量呈显著正相关（r=0.554,P=0.040）。结论 CHB患者外周血中PD-1阳性的CD8^＋TEM频数升高,且与外周血中HBV DNA载量呈正相关,提示慢性乙型肝炎患者机体内HBV复制的活跃性可能与外周血中CD8^＋T细胞的活化状态,特别是其TEM亚群上PD-1的高表达关联。     

基于流式细胞术评价单核细胞介导的抗体依赖性细胞介导的细胞毒效应的方法学建立和应用

目的：建立基于流式细胞术的评价单核细胞介导的抗体依赖性细胞介导的细胞毒效应的检测方法。方法 PKH26和CFSE染色的P815细胞为靶细胞，与P815特异性抗体孵育形成抗原抗体复合物，加入外周血单个核细胞作为效应细胞，共同孵育后流式细胞术检测 CD3－CD14＋PKH26＋CFSE－细胞群的百分比，并确定最佳效靶比及效应细胞和靶细胞的孵育时间。运用上述方法对23例HCV慢性感染者和22例健康人的单核细胞介导的抗体依赖性细胞毒作用（ antibody depend-ent cellular cytotoxicity ， ADCC）进行比较分析。结果可通过流式细胞技术检测CD3－CD14＋PKH26＋CFSE－细胞群来评价单核细胞介导的ADCC效应，最佳效靶比为10∶1，最佳杀伤孵育时间为4 h。慢性HCV感染者单核细胞介导的ADCC效应较健康对照明显降低（ P＝0．009）。结论本研究建立了基于流式细胞术的单核细胞介导的ADCC效应的检测方法，为病毒感染及药物研发中免疫学评价提供快速、敏感、安全的检测手段。