幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统cagM基因的克隆、表达及抗体制备

目的:构建表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H.pylori) NCTC 11637 IV型分泌系统cagM(HP0537)全长编码基因的原核表达载体,分析其抗原性并制备抗体.方法:应用PCR技术从H.pylori基因组扩增 cagM基因片段,TA克隆后测序分析,并构建表达载体pET-28a(+)-cagM,转化 E.coli BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE及鉴定表达蛋白,表达蛋白以 Ni2+-NTA 柱进行纯化,用软件分析其抗原性后,免疫家兔制备多克隆抗体,ELISA检测多克隆抗体效价.结果:测序结果表明cagM基因全长1 131 bp(基因库登录号为GU269568),编码376个氨基酸,与基因库中已知菌株J99,26695和G27的氨基酸同源性为98%～99%;诱导表达后经SDS-PAGE检测表明,在43 700处发现一条新生条带,Ni2+-NTA柱纯化后为单一条带,软件分析表明其抗原性较强,免疫家兔制备的多克隆抗体效价为1∶ 1.6×105.结论:首次成功克隆并表达了H.pylori pNCTC 11637 cagM基因,并制备了其抗体,为以后进一步研究其生物学功能以及H.pylori相关疾病的检测与治疗奠定了基础.     

浙江省衢州市首例输入性基孔肯雅热病毒基因特征分析

目的对1例有孟加拉国旅行史的基孔肯雅热病例进行病毒基因特征分析。方法采集患者血清,采用实时荧光定量PCR（real-time PCR）检测基孔肯雅热病毒（CHIKV）和登革热病毒核酸,反转录PCR（RT-PCR）扩增CHIKV结构基因C-E3-E2-6K-E1片段并测序,计算机软件分析处理基因序列。结果患者血清real-time PCR检测为CHIKV核酸阳性,病毒株编号为QZ0823。 对病毒株QZ0823病毒进行测序拼接后共获得CHIKV 5个结构基因全长,包含3 747 bp核苷酸序列,编码1 248个氨基酸,与参考序列核苷酸和氨基酸同源性分别为98.9% ~ 99.9%和99.0% ~ 99.9%,对E1和C-E3-E2-6K-E1核苷酸进行系统进化分析,病毒株QZ0823株与孟加拉国、印度、巴基斯坦的东中南非洲遗传谱系流行株进化关系最近。结论来自病例的CHIKV病毒株QZ0823属于东中南非洲遗传谱系,该病例为输入性病例。     

2015-2017年浙江省衢州市H3N2亚型流感病毒血凝素基因分子进化特征分析

目的 了解浙江省衢州市2015－2017年H3N2亚型流感病毒血凝素（HA）基因分子进化特征,为流感防控提供科学依据。方法 选取衢州市2015－2017年分离到的H3N2亚型流感病毒18株,通过RT-PCR扩增病毒HA基因片段并测序,采用生物信息学软件分析其分子进化特征。结果 18株H3N2亚型流感病毒HA基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为97.36%~100.00%和96.76%~100.00%,与同年度疫苗株HA基因的核苷酸平均遗传距离分别为0.008 2、0.007 1和0.011 2,氨基酸平均遗传距离分别为0.009 2、0.003 1和0.010 0。分离株的HA基因分支从3C.3a转变为3C.2a支系,其HA氨基酸序列与同年度疫苗株比较,变异位点共涉及HA蛋白的5个抗原表位（A、B、C、D和E区）,2个受体结合位点（T131K、T135N/K）,6个潜在糖基化位点（122NES、126NWT、133NGT、135NSS、144NSS、158NYT）。结论 2015－2017年衢州市H3N2亚型流感病毒可能出现了抗原漂移,当前疫苗株A/HongKong/4801/2014的免疫效果需重新评估。     

2013－2018年浙江省衢州地区外环境禽流感病毒监测分析

目的了解浙江省衢州地区外环境禽流感病毒流行特征,为该地区人禽流感疫情的防控和预测预警提供科学依据。方法采集2013 — 2018年衢州地区外环境禽流感监测标本,采用实时荧光反转录–聚合酶链式反应方法对采集的外环境标本进行禽流感病毒核酸检测,并进行统计学分析。结果2013 — 2018年共采集禽流感外环境标本5 290份,检出流感病毒A型（FluA）阳性标本1 809份,阳性率为34.20%;其中以H9亚型和A型未分型为主,分别占44.50%和29.13%。 开化县检出阳性率最高（54.85%）,龙游县最低（17.25%）。 5类场所中,城乡活禽市场检出阳性率最高（45.94%）。 6种类型标本中,宰杀或摆放禽肉案板表面的擦拭标本检出阳性率最高（58.96%）。第一季度（38.06%）和第四季度（37.23%）检出阳性率较高。 不同时间、地区、场所、标本类型的标本阳性检出率差异均具有统计学意义（P＜0.001）。结论衢州地区外环境中存在多种亚型及混合型禽流感病毒,应加强外环境禽流感监测力度,同时采取有效的防控措施降低人群感染的风险。     

幽门螺杆菌Cag致病岛hp0540基因的克隆表达及其多克隆抗体的制备

目的：构建幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）Cag致病岛（Cag—pathogenicity island,Cag—PAI）编码的hp0540基因的原核表达系统,并制备其多克隆抗体。方法：应用PCR技术从Hp11637基因组DNA中扩增hp0540基因片段,克隆至pMD18-2T载体后,进行序列测定,并对其序列进行生物信息学分析;构建pET-28a—hp0540原核表达载体,转化表达宿主菌BL21DE3;经IPTG诱导表达后,SDS—PAGE法鉴定目的蛋白的表达,并以Ni^2＋-NTA柱分离纯化目的蛋白;将纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体并测定抗体效价。结果：成功克隆了hp0540基因,全长1086bp,编码361个氨基酸,与基因库公布的其他坳菌株基因序列的核苷酸同源性为98％。工程菌诱导后SDS—PAGE显示新生表达蛋白带,相对分子质量约为39000,经Ni^2＋NTA柱纯化后可获得重组蛋白,重组蛋白免疫新西兰大白兔后获得效价为1：160000的多克隆抗体。结论：成功构建了hp0540基因的原核表达系统并制备了其多克隆抗体,为研究该基因的功能奠定了基础。     

浙江省衢州市1例输入性登革热病例分子流行病学研究

目的调查浙江省衢州市1例登革热输入性病例流行病学特征及病原体分子溯源,为登革热的防控提供依据。方法对2017年输入性登革热病例进行流行病学调查,采集病例血清进行登革热病毒核酸和抗体检测,提取病毒核酸后扩增E基因并测序,利用生物信息学软件进行多序列比对并构建进化树。结果该病例登革热病毒核酸及IgM抗体检测结果均为阳性,基因序列比对及进化分析,病毒株为登革热病毒1型Ⅰ亚型,与东南亚病毒株(登录号KY586429.1、KJ806941.2)亲缘关系最近,核苷酸和氨基酸同源性分别为99.1%和99.7%。结论衢州市登革热病毒1型病例可能为来自东南亚的1例输入性病例。     

苦瓜MAP30基因的克隆表达及对BGC-823细胞形态的影响

目的:克隆苦瓜蛋白MAP30基因,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,初步研究MAP30蛋白对BGC-823细胞的影响.方法:应用PCR技术从苦瓜基因组中扩增出MAP30基因片段,将其TA克隆和双酶切鉴定,再进行测序分析,并构建重组表达载体pET-28a-MAP30,转化到表达菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,用 NTA-Ni2+ 树脂分离纯化所表达的 MAP30 融合蛋白,并经 SDS-PAGE 电泳鉴定;纯化的蛋白作用于 BGC-823 细胞后通过光镜和电镜进行形态学观察. 结果:成功扩增出MAP30基因为861 bp, 与基因库中公布的DQ643967同源性为100%,与DQ643968和S79450的同源性为99%;成功构建 pET-28a-MAP30原核表达重组质粒;通过NTA-Ni2+树脂分离纯化目的蛋白,获得原核表达的大小约为30 000的MAP30融合蛋白,与预测一致;蛋白作用细胞后,细胞形态有明显变化.结论:成功构建pET-28a-MAP30表达载体并获得原核表达的MAP30融合蛋白;重组MAP30蛋白能引起BGC-823细胞明显的形态学变化.     

2016年-2021年衢州地区手足口病病原体流行病学特征分析

目的 了解衢州地区手足口病(HFMD)流行现状及病原学特征,为该地区HFMD防控提供依据。方法 采用实时荧光逆转录-聚合酶链式反应(real-time RT-PCR)方法对2016年—2021年采集的衢州地区手足口病监测样本进行手足口病相关肠道病毒核酸检测,并采用χ2检验进行病原学流行特征分析。结果 2016年—2021年共采集手足口病样本2 294份,检出阳性1 658份,阳性率为72.28%;其中以CA6和CA16为主,分别占48.31%和26.06%。衢江区阳性率最高(89.79%),龙游县最低(51.52%)。在病例收集期间,衢州地区手足口病发病于夏秋季较多。在手足口患儿中,男性阳性检出高于女性,散居儿童发病人数最高。结论 衢州地区HFMD流行呈现明显的季节性、地域性和人群分布特征,且存在病原体交替流行,提示应继续加强监测力度,尤其是加强对重点人群的防控力度。     

住院精神分裂症患者人性化康复模式

本院自 1974年开院起 ,实行住院精神病人男女分开管理 ,活动严格隔离 ,其用意是为了防范意外事件发生。自 2 0 0 0年 10月开始 ,由于新建病房楼启用 ,实行住院病人男女日常一起共同活动劳作。60岁以上的老年区患者男女混合生活 ,一起就餐、居住分室不分区 ,门不加锁 ,随时可互相往来 ,互相帮助、互相照顾 ,在一起聊天。经过两年半以来的实践 ,不但没有发生任意外事件 ,而且对病区管理、护理、治疗、康复工作都起到良好作用 ,初具完整鲜明的“人性化康复模式”。1　资料与方法1 1　住院精神病患者中符合CCMD -3精神分裂症诊断标准的患者男…