黄连素调控GRP78表达对内皮细胞新生血管的抑制作用

目的探讨葡萄糖调节蛋白78（GRP78）在内皮细胞新生血管中的表达及黄连素的干预作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,利用4-苯基丁酸（4-PBA）5mmol/L,毒胡萝卜素（TG）300nmol/L,TG300nmol/L联合低、中、高剂量（50、75、100滋mol/L）黄连素分别作用24h,对照组为正常培养的HUVEC。采用噻唑蓝（MTT）法、划痕法、MatrigelMatrix胶法分别检测细胞增殖、迁移、成血管能力,qRT-PCR法、Westernblot法分别检测HUVEC中血管内皮生长因子（VEGF）、GRP78、缺氧诱导因子1α（HIF-1α）mRNA和蛋白表达,免疫荧光法观察GRP78在细胞内的定位。结果≤100滋mol/L的黄连素对HUVEC增殖无明显影响（P＜0.05）。与对照组比较,4-PBA组细胞迁移、成血管能力均明显减弱（均P＜0.05）;TG组细胞迁移、成血管能力均明显增强（均P＜0.05）,HUVEC中VEGF、GRP78、HIF-1αmRNA和蛋白相对表达量均明显升高（均P＜0.05）。与TG组比较,黄连素低、中、高剂量干预组细胞迁移、成血管能力均明显减弱（均P＜0.05）,HUVEC中VEGF、GRP78、HIF-1αmRNA和蛋白相对表达量均明显降低（均P＜0.05）。在荧光显微镜下观察,GRP78分布于内皮细胞的细胞膜上。结论GRP78在HUVEC新生血管过程中发挥重要作用,黄连素可能通过抑制GRP78表达从而抑制内皮细胞血管新生。