STUDY ON THE MECHANISM AND EFFECTS OF GLY-TYR-NH2 AND GLY-TYR-LYS ON RAT LUTEAL CELLS IN VITRO

The action of Gly-Tyr-NH2,(GY-NH2) and Gly-Tyr-LYS(GYK) on ^125I-LH binding,cAMP accumulation and progesterone production was investigated.Incubation of rat luteal cells for 2.5h with GH-NH2 and GYK at dosage of 0.2mmol/L caused a significant inhibition of basal and gonadotropin-stimulated steroidogenesis.GYNH2 and GYK were also foumnd to reduce cAMP formation in response to hCG.The activity of adenylate cyclase of luteal cells was inhibitd by 0.2mmol/LGY-NH2 and GYK.GY-NH2 and GYK at a concentration of 0.2mmol/L were not found to have an inhibitory effect on 8Br-cAMP-stimulated progesterone production.GY-NH2 and GYK did not affect ^125I-LH binding to LH receptors on the luteal cellsurface.These results suggest that GY-NH2 and GYK inhibit steroidogenesis at the step of gonadotropin-stimulated c AMP for mation in luteal cells.Adenylate cyclase in luteal cells was also inhibited.     

人抑制素βA亚基单克隆抗体的制备和鉴定

目的：制备人抑制素βＡ（ＩＮＨβＡ） 亚基多肽单克隆抗体（单抗,ＭｃＡｂ）。方法和结果：用固相多态合成法合成了人抑制素βＡ亚基１ － ２８,８２ － １１４ 多肽片段。以粗提的猪卵泡液抑制素（ＩＮＨ） 和合成肽段纯品作为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠,经细胞融合与筛选,获得４ 株杂交瘤细胞株,ＥＬＩＳＡ检测腹水效价为１×１０－ ４ ～１ ×１０－ ５ ,抗体特异性试验表明与α亚基片段及其他多肽激素无交叉反应。表位分析表明３ 株ＭｃＡｂ（ 抗ＩＮＨβＡ（８２－ １１４）） 可能针对同一抗原位点。相对亲和力试验表明４Ｇ３＞ ３Ｂ７＞ ６Ｃ５ ＞２Ａ３。抗原竞争试验表明腹水中抗体能明显被人卵泡液和猪卵泡液中和, 而绝经期妇女血清不能中和抗体活性。结论：成功制备抗ＩＮＨβＡ亚基ＭｃＡｂ     

人卵促性腺激素释放肽（hF－GRP）及其类似物合成和生物活性初探

用固相法合成了ｈＦ－ＧＲＰ及其１５个类似物。全部裂解均用三氟甲磺酸完成。产物总收率６０％～８０％。对所有合成肽进行了影响离体的小鼠垂体分泌ＬＨ的活性筛选。结果表明，当合成肽的浓度为０．０５ｍｍｏｌ／Ｌ时：（１）将ｈＦ－ＧＲＰ的Ｃ端ＣＯＯＨ变成ＣＯＮＨ２，活性变化不大；（２）Ｃ端残基Ａｓｎ１４被Ｐｈｅ替换后刺激垂体分泌ＬＨ的活性明显高于ｈＦ－ＧＲＰ；（３）Ｔｈｒ３被Ｔｙｒ替换后片段ｈＦ－ＧＲＰ（３～１３）有抑制ＬＨ分泌的活性；（４）其余类似物与空白对照相似。     

固相法合成心肌兴奋肽及其类似物

用Boc-和Tos-基团分别保护氨基和侧链胍基,以1%交联度聚苯乙烯二苯甲氨基树脂为载体,用DCC固相法合成肽,HF断裂肽树脂键和去除侧链保护基团,粗产物经高效液相层析纯化,合成了心肌兴奋肽Phe-Met-Arg-Phe-NH_2及其类似物Phe-Pro-Arg-Phe-NH_2,并观察了此二种肽对大鼠血压和心率的影响。     

生长激素释放多肽在体外对人分泌生长激素腺瘤和胎儿垂体分泌生长激素的影响

生长激素释放多肽(GHRP)是具有刺激各种动物垂体分泌GH的六肽。本研究应用自行合成的六肽,已发现在体外对胎儿垂体和分泌GH的垂体腺瘤同样具有刺激垂体细胞分泌GH的作用。对1例垂体瘤的实验证明这种刺激作用是一种剂量依赖关系。GHRP的这种功能可被低浓度生长激素释放抑制因子(10~(-7)M)所部分抑制。电镜观察显示1例垂体瘤受GHRP刺激后,细胞内高尔基器及未成熟分泌颗粒明显增加,提示GH合成增加的事实。     

人抑制素α亚基单克隆抗体的制备和鉴定

目的：建立分泌抗人抑制素α亚基３７ － ６５ 片段单克隆抗体（ 单抗） 细胞株,并对单抗进行免疫学鉴定。方法：以猪卵泡液粗提物为免疫原,免疫ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠,取其脾细胞与ＮＳ１ 小鼠骨髓瘤细胞融合。杂交瘤细胞用人工合成的人抑制素α亚基３７ －６５ 片段包被,间接ＥＬＩＳＡ法筛选。结果：获得稳定分泌抗人抑制素α亚基３７ － ６５ 片段单抗细胞３ 株,ＥＬＩＳＡ 检测腹水效价为１×１０－ ５～１×１０ －３ ,与α亚基１ －３２ 及其他多肽激素无交叉反应,３ 株识别同一抗原位点。相对亲和力为ⅠＡ５ ＞ Ⅳ３Ｃ＞ Ⅴ５Ｇ。腹水中的抗体能明显地被人卵泡液和猪卵泡液和α（３７ － ６４）中和。结论：３ 株细胞有特异性、敏感性和实用性。抗体可用于人的正常组织及部分肿瘤组织免疫组化研究     

猪脑钠素及其类似物的合成

以固相多肽合成方法合成了猪的二十六肽脑钠素(BNP)和它的一个类似物(Mpr⁴,D-Ala^6,13)-BNP(4-24)-NH₂,保护肽用HF裂解除去保护基、在碱性条件下空气氧化形成二硫桥后,粗产物经凝胶过滤和高效液相色谱分离纯化,均有与天然脑钠素相同的活性。合成肽相对于树脂初始取代量的产率分别为9.56%和11.03%。     

人抑制素βA亚基片段的合成及抑制素α亚基、βA亚基单克隆抗体的制备

目的　合成人抑制素α亚基1个片段和βA亚基两个片段βA(1-28) (GLECDGKVNICCKKQFFVSFK-DIGW-NDW), βA(82-114) (VPTKLRPMSMLYYDDGQNIIKKDIQNMIVEECG)并制备了相应的单克隆抗体。方法应用固相多肽合成法人工合成了1个抑制素α亚基片段和2个βA亚基片段,以化学合成的片段作为半抗原,经抗原和单抗的制备获得7株杂交瘤细胞株。测定了单抗的滴度、特异性和相对亲和力。结果　单抗的鉴定及特异性分析实验表明这些单克隆抗体具有特异性、敏感性和实用性。结论　在这些实验的基础上建立测定血清抑制素水平的方法是可能的。     

甘氨酰-酪氨酰胺和甘氨酰-丝氨酰-赖氨酸抑制黄体细胞孕酮生成机制的研究

在筛选12种人工合成小分子肽影响大鼠离体黄体细胞孕酮生成的活性研究中,我们曾发现二肽甘氨酰—酪氨酰胺(Gly-Tyr-NH_2)和三肽甘氨酰—丝氨酰—赖氨酸(GlySer-Lys)有很强的抑制孕酮生成的作用。本文研究了这两种小肽的可能作用途径。实验观察到:蛋白质合成抑制剂放线菌酮(Cyx)和放线菌素D(ActD)对两种小肽拮抗孕酮分泌的作用没有影响;此两种小肽对孕酮合成的关键酶3 β-HSD活性也没有影响;但这两种小肽对腺苷酸环化酶激动剂Forskolin引起的孕酮分泌有抑制作用。提示这两种小肽可能抑制腺苷酸环化酶活性或影响cAMP以后的过程。     

酪氨酸相关肽的合成及抗孕酮生成活性

利用固相法合成了二十个含羟基氨基酸的小肽。其中,以0.5mol·L^-1二甲二氯硅烷/1.5mol·L^-1苯酚/DCM*为脱除Boc试剂,以TFMSA为切除树脂试剂。经C-18反相柱纯化后,全部产物均通过氨基酸分析要求。体外黄体细胞分泌孕酮实验表明有八个肽化物GlyTyrAlaLys,(SarSer)₂Lys及其申酯,TyrLys,HisTyr-NH₂,ThrProTyrLys-NH₂,TyrThrProArgLys,AspHisProThr-PheLys显示较强的抑制hCG致孕酮分泌的活性,而且前三个肽还能显著抑制基础孕酮的分泌,相反,GlySerTyr能刺激基础孕酮的分泌。目前尚未建立合理的结构一活性关系。