基于动物物质与能量代谢检测评价3种肾阴虚证模型建立方法

目的:通过对动物物质与能量代谢相关指标的检测,比较3种肾阴虚证动物模型的科学性与可靠性。方法:40只小鼠按照体质量均衡原则分为正常组、氢化可的松组、甲状腺素联合利血平组及热性中药组,每组10只。正常组每天给予生理盐水灌胃,氢化可的松组隔日皮下注射氢化可的松50 mg·kg~(-1),甲状腺素联合利血平组灌胃甲状腺素150mg·kg-1加肌肉注射利血平1 mg·kg~(-1),热性中药组灌胃热性中药煎煮液按生药量为15 g·kg~(-1),建立3种肾阴虚证模型小鼠。分别观察动物采食量、饮水量、体质量、自主活动情况、呼吸耗氧量、体温、体能耐力、血清环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)与环磷酸鸟苷(cyclic guanosine monophosphate,cGMP)及其比值等指标,考察3种肾阴虚证模型小鼠体质及自身能量代谢的差异。结果:造模后3种肾阴虚证模型小鼠饮水量与饮食量均增加,体质量均降低。此外,氢化可的松组小鼠呼吸耗氧量降低、四肢体温及肛温明显升高,cAMP/cGMP比值明显升高,与正常组比较,有显著性差异(P0.05)。自主活动、体能耐力及肾脏系数变化不明显,与正常组比较,无显著性差异;甲状腺素联合利血平组小鼠肾脏系数、单位时间耗氧量与正常组比较,明显降低,自主活动及体能耐力及有降低趋势,但与正常组比较,无显著性差异。四肢体温、肛温及血清cAMP与cGMP水平明显升高,与正常组比较,有显著性差异(P0.05);热性中药组小鼠单位时间耗氧量明显降低,自主活动次数增加,与正常组比较,有显著性差异,肾脏系数、四肢体温、肛温、体能耐力及血清cAMP与cGMP水平及其比值变化均不明显,与正常组比较,无显著性差异。结论:皮下注射氢化可的松、灌胃甲状腺素联合肌肉注射利血平混悬液可在短时间内建立肾阴虚证模型小鼠,灌胃热性中药在短时间内无法成功建立肾阴虚证模型小鼠。     

两古方在改善POI大鼠卵巢微环境作用机制的差异初探＊

目的 本文旨在探究毓麟珠与养精种玉汤在改善卵巢微环境进而改善早发性卵巢功能不全（Premature ovarian insufficiency，POI）的作用机制差异。方法 选择SPF级雌性大鼠24只，分为4组，每组6只，除空白组外，其余各组通过腹腔注射去氧乙烯基环己烯（VCD）构造POI模型，造模成功后，空白组与模型组给予生理盐水灌胃，毓麟珠组与养精种玉汤组分别给与相应中药灌胃6周。通过HE染色确立模型构造成功；通过小动物多普勒超声系统检测卵巢血流及形态；通过ELISA检测血清激素水平；通过氧化应激因子超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）、丙二醛（Malondialdehyde，MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione Peroxidase，GSH-Px）检测卵巢氧化应激水平。结果 HE染色结果显示，模型组大鼠卵泡数减少，透明带损伤，卵母细胞形态畸形，造模成功；超声数据显示与模型组相比，毓麟珠组卵巢面积明显增加（P < 0.05），毓麟珠组与养精种玉汤组血流动力指数（PI）与阻力指数（RI）值明显降低，养精种玉汤组降低效果更明显；血清激素结果显示，与空白组相比，E2、AMH明显降低，FSH明显升高（P < 0.05），给药后E2、AMH明显升高，FSH明显降低（P < 0.05），毓麟珠改善效果更明显；氧化应激结果显示，模型组SOD、GSH-PX明显降低，MDA明显升高（P < 0.05），给药6周后，养精种玉汤组SOD明显升高，MDA明显降低（P < 0.05）；毓麟珠组GSH-PX明显升高，MDA明显降低（P < 0.05），养精种玉汤组改善更明显。结论 毓麟珠组改善激素水平以及卵巢状态效果更明显，养精种玉汤组在改善卵巢血流以及氧化应激效果更好，说明中医同病异治理论有其充分的科学依据，为不同证型药物防治POI的机制探索提供思路。     

基于网络药理学及实验验证毓麟珠改善早发性卵巢功能不全大鼠的潜在机制

目的:基于网络药理学及动物实验验证探讨毓麟珠改善早发性卵巢功能不全（POI）大鼠的潜在作用机制。方法:采用中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）数据库筛选毓麟珠中5味核心药物——菟丝子、杜仲、熟地黄、当归、人参的入血活性成分及预测作用靶点,进一步获取药物成分对应靶点及POI靶点,利用微生信平台获取交集靶点,构建蛋白质-蛋白质相互作用网络并筛选出核心靶点,通过DAVID数据库对核心靶点进行基因本体（GO）富集分析及京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析;依据KEGG通路分析结果,选择缺氧诱导因子1（HIF1）信号通路进行动物体内实验验证。结果：筛选出的活性成分主要包括槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇、β-胡萝卜素、豆甾醇、芝麻素等。与疾病相关的候选作用靶点共103个,关键靶点涉及蛋白激酶（AKT1）、窖蛋白（CAV1）、雌激素受体1（ESR1）、Ras同源基因家族成员A（RHOA）等,主要参与细胞增殖、介导雌激素发挥生物学作用、细胞信号转导等生物过程。动物实验验证了毓麟珠干预后可改善POI大鼠的血清激素水平,降低HIF1α的蛋白表达水平。结论:毓麟珠通过多靶点、多途径作用于POI,且毓麟珠可能通过HIF1通路改善POI大鼠的卵巢功能。