漆黄素通过调控TLR4/NF-κB通路减轻大鼠肝细胞缺氧/复氧损伤北大核心CSCD

目的探讨漆黄素对大鼠肝细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用及其机制。方法构建BRL-3A大鼠肝细胞H/R模型,并给予漆黄素处理。CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,微板法检测细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;ELISA检测细胞上清液肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的水平,实时定量PCR检测BRL-3A细胞Toll样受体4(TLR4)、核因子κBp65(NF-κBp65)mRNA水平,Western blot法检测TLR4、NF-κBp65蛋白水平。结果 H/R处理的BRL-3A细胞存活率下降,细胞凋亡增多,培养细胞上清中ALT、AST水平和IL-1β、TNF-α升高;漆黄素处理可提高细胞存活率,减少细胞凋亡,降低ALT、AST水平,抑制IL-1β、TNF-α的释放,同时抑制H/R诱导的TLR4、NF-κBp65水平升高。结论漆黄素可能通过调节TLR4/NF-κB信号通路减轻大鼠肝细胞H/R损伤。     

探讨中央型肝占位病变“华西分型”的临床应用价值

目的：　探讨中央型肝脏占位性病变“华西分型”的临床应用价值。方法：　回顾性分析2014年7月至2019年12月在重庆医科大学附属第一医院收治的中央型肝占位性病变行开腹肝中叶切除术186例患者临床资料。按照四川大学华西医院关于中央型肝占位性病变的“华西分型”,对每一型肝占位性病变手术时间、出血量、住院时间、并发症发生率等指标进行比较。应用SPSS 16.0统计软件进行分析,率的比较采用卡方检验;计量资料以M_d（P₂₅,P₇₅）表示,采用Kruskal-Wallis H检验。检验水准α=0.05。结果：　纳入的186例患者中,原发性肝癌120例,转移性肝癌40例,良性病变26例。按照“华西分型”,Ⅰ型55例,Ⅱ型33例,Ⅲa型36例,Ⅲb型18例,Ⅳ型44例。全组无死亡病例,术后总体并发症发生率为17.7％,术后平均住院时间为（10±4） d。Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲa型、Ⅲb、Ⅳ型各型的中位手术时间分别是225 min、285 min、182 min、290 min、355 min,出血量分别是445 mL、550 mL、320 mL、600 mL、1 100 mL,输红细胞悬液分别是1.0 U、2.0 U、1.5 U、3.0 U、5.0 U。术后并发症发生率分别是7.3%、6.1%、8.3%、11.1%、27.2%。与其他四型相比,IV型具有手术时间长、术中出血量多、术后并发症发生率高等特点（均P<0.05）。结论：　术前对肝脏中央型占位性疾病进行“华西分型”诊断,有利于对每一型肝中叶切除术患者诊疗的个体化、规范化,减少患者术后并发症。     

癌旁circWDR25与肝细胞癌根治性切除术后的预后相关

目的 探讨癌旁组织中肝星状细胞（HSCs）分泌表达的circWDR25（hsa-circRNA-0004310）与肝细胞癌（HCC）患者行根治性切除术后的预后关系。方法 肝星状细胞系LX-2分别与3种肝癌细胞系Hep3B、SMMC-7721、HCCLM3行transwell小室法共培养,建立肿瘤细胞活化的HSCs,收集HSCs上清分离外泌体,提取RNA后检测circRNA基因表达谱;收集2014年1月~2015年10月在重庆医科大学附属第一医院肝胆外科接受根治性切除手术的288例HCC患者的癌旁肝组织,行原位杂交,检测circWDR25与α-SMA的阳性表达量,预后单因素分析和多因素分析分别采用Log-rank检验和Cox回归分析。结果 基因表达谱发现肿瘤活化的LX-2所分离出的外泌体中circWDR25表达上调最显著;癌旁circWDR25和HSCs呈正相关（r=0.156,P=0.008）。术前AST>36 g/L、肿瘤多发、肿瘤>5 cm、HSC>70、circWDR25>190为影响HCC患者根治性切除术后总体生存率的独立危险因素;术前AST>36、肿瘤多发、肿瘤>5 cm、有癌栓、HSC>70、circWDR25>190为肝癌患者无瘤生存的独立危险因素。结论 癌旁circWDR25和HSCs是HCC患者根治性肝切除术后预后的影响因素,二者在癌旁组织中的高表达与预后差密切相关。     

乙肝病毒X蛋白通过Wnt/β-catenin信号通路调控Gankyrin表达

目的：研究乙肝病毒X蛋白（hepatitis B virus X protein,HBX）对Gankyrin表达水平的影响以及Wnt/β-catenin信号通路在HBX基因调控Gankyrin表达中的作用。方法：HBX腺病毒表达载体（Ad-HBX-GFP）感染转染2种人肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721细胞,Si-HBX分子（Si-HBX oligo）用 LipofectamineTM 2000转染入HepG2.2.15细胞,用RT-PCR和Western blot法检测HBX与Gankyrin的表达情况;β-catenin腺病毒载体转染HepG2、SMMC-7721细胞,用Western blot法检测β-catenin与Gankyrin的表达情况;在沉默β-catenin表达的HepG2、SMMC-7721细胞中过表达HBX基因,Western blot法检测β-catenin与Gankyrin的表达情况。结果：①HepG2.2.15细胞中Gankyrin mRNA与蛋白表达水平均高于HepG2细胞（P＜0.05）。②HepG2与SMMC-7721细胞系中Ad-HBX-GFP组Gankyrin mRNA与蛋白表达水平均高于绿色荧光蛋白腺病毒表达载体（Ad-GFP）组（P＜0.01）。③HepG2.2.15细胞中Si-HBX组Gankyrin mRNA与蛋白表达水平均低于Si-阴性对照（Si-NC）组（P＜0.01）。④在HepG2与SMMC-7721细胞系中过表达HBX后,Ad-HBX-GFP组β-catenin的蛋白表达水平均高于Ad-GFP组（P＜0.01）。⑤在HepG2与SMMC-7721细胞系中过表达β-catenin后,β-catenin腺病毒表达载体（Ad-β-catenin-GFP）组Gankyrin的蛋白表达水平均高于Ad-GFP组（P＜0.01）。⑥在HepG2与SMMC-7721细胞系中沉默β-catenin后,过表达HBX基因,Si-β-catenin腺病毒表达载体（Ad-si-β-catenin-RFP）组与红色荧光蛋白腺病毒表达载体（Ad-RFP）组相比,Gankyrin的蛋白表达水平未见升高（P＜0.01）。结论：HBX-Wnt/β-catenin-Gankyrin信号转导通路存在与肝癌细胞中,抑制β-catenin的功能可阻遏HBX对Gankyrin的上调作用,本结果将可能为肝癌的治疗提供新的思路。     

射频消融联合经肝动脉化疗栓塞治疗肝癌的疗效与安全性系统评价

目的：系统评价射频消融（radiofrequency ablation,RFA）联合经肝动脉化疗栓塞（transcatheter arterial chemoemboliza－tion,TACE）治疗肝细胞性肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）的有效性与安全性。方法：计算机检索PubMed、Cochrane Li－brary、EMBase及CNKI数据库中1978至2013年间的数据,只纳入比较RFA+TACE与单独RFA治疗HCC的随机对照试验。结果：按照入选标准,有9 项临床试验纳入本研究。与单独RFA治疗HCC相比,RFA+TACE能显著提高患者1、3、5年总生存期（OR1年=2.34,95%CI＝1.54～3.57,P＝0.000;OR3年=1.99,95%CI＝1.43～2.77,P＝0.000;OR5年=2.26,95%CI＝1.03～4.95,P=0.04）和1、3年无肿瘤复发生存期（OR1年=1.74,95%CI＝1.16～2.63,P=0.008;OR3年=2.47,95%CI＝1.61～3.80,P＝0.000）。２组之间主要并发症发生率无明显差别（OR=1.24,95%CI＝0.79～1.95,P=0.36）。亚组分析显示：RFA+TACE治疗能明显提高直径在3～5 cm之间的HCC患者的1、3年总生存期。结论：RFA+TACE能显著延长HCC患者的无肿瘤复发生存期及总生存期,尤其适合于直径介于3～5 cm之间的HCC患者。     

设计特异性结合HBV X基因启动子的人工锌指蛋白以抑制HepG2.2.15细胞中HBV的转录

目的：设计人工锌指蛋白（zinc finger protein,ZFP）特异性结合于乙型肝炎病毒X蛋白（hepatitis B virus X protein,HBX）基因启动子,观察ZFP在体外对乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）转录的抑制。方法：将pcDNA3.1-ZFP转染入HepG2.2.15细胞24 h后,用Western blot检测HBX蛋白的含量;用ELISA和real-time PCR检测上清液中乙型肝炎核心相关抗原（hepatitis B e antigen,HBeAg）和HBV DNA含量,用RT-PCR检测胞内HBV mRNA水平。结果：ZFP可抑制HepG2.2.15细胞中HBX的表达;相比空质粒组,ZFP组细胞培养上清液中HBV DNA 拷贝量和HBeAg 含量分别下降了51.7%（t=23.079,P=0.000,９５％CI=44.98%～58.52%）、33.8%（t=3.887,P=0.003,９５％CI=12.12%～55.48%）;细胞内HBV mRNA也明显减少（t=3.616,P=0.022）。结论：人工设计的可特异性结合于HBX的ZFP可于HepG2.2.15细胞中有效抑制HBV转录。     

新辅助化疗治疗晚期鼻咽癌的系统评价

目的：新辅助化疗（neoadjuvant chemotherapy,NACT）被广泛应用于晚期鼻咽癌的治疗,但其疗效却受到争议。因此,本系统评价旨在评估NACT的有效性及安全性。方法：计算机检索Pubmed,Emabse,Cochrane Library数据库2013年4月1日之前的数据。只纳入以NACT为变量的随机对照试验。结果：7篇随机对照试验共1 463名患者进入本系统评价。Meta分析显示NACT能明显延长患者的无瘤生存期[风险比（hazard ratio,HR）：0.74,95%置信区间（confidence interval,CI）（0.64,0.86）,P<0.001]及总生存期[HR：0.81,95%CI（0.68,0.96）,P=0.013],降低肿瘤局部复发率[相对风险比（relative risk,RR）：0.80,95%CI（0.67,0.97）,P=0.022]及远处转移率[RR：0.70,95%CI（0.58,0.85）,P<0.001]。但NACT不明显增加治疗相关的死亡率（P=0.806）。NACT过程中3～4级并发症发生率较高的是脱发（46.4%）、恶心/呕吐（20.1%）、中性粒细胞减少（35.9%）,但NACT并不明显增加放疗或同期放化疗后的严重并发症发生率。结论：NACT对于晚期鼻咽癌患者是安全有效的。     

白藜芦醇在缺氧/复氧诱导的肝细胞损伤中的保护作用及与TLR4/NF-kB通路的关系

目的 探讨白藜芦醇(resveratrol,RES)在缺氧/复氧(hypoxia reoxygenation,H/R)诱导的大鼠肝细胞损伤中的保护作用及其相关分子机制.方法 建立BRL-3A细胞(大鼠肝细胞株)H/R模型.建模前分别用RES和TLR4抑制剂(HTA125)预处理细胞.建模完成后,检测细胞存活率及细胞凋亡,观察细胞形态变化,检测细胞培养液中谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)及炎症因子含量,检测细胞TLR4、NF-kB p65基因mRNA及蛋白水平表达及NF-kB p65入核情况.结果 H/R条件使细胞存活率明显降低,细胞凋亡率增加(P＜0.01),受损细胞明显增多,ALT、IL-1β含量增多(P＜0.01),TLR4和NF-κB p65表达水平显著提高(P＜0.01),p65入核细胞比例提高(P＜0.01).经RES及HTA125预处理后,细胞存活率显著提高,细胞凋亡比例显著缩小(P＜0.01),受损细胞减少,ALT、IL-1β含量降低(P＜0.01),TLR4和NF-kB p65表达水平明显降低(P＜0.01),p65入核细胞比例下降(P＜0.01).结论 RES可以减轻H/R诱导的BRL-3A肝细胞损伤,该作用可能与抑制TLR4/NF-kB信号通路有关.     

外泌体在肝细胞癌肿瘤微环境中作用的研究进展

肝细胞癌肿瘤微环境的复杂性决定了其高度异质性和肿瘤的发生发展。外泌体是肝细胞癌肿瘤微环境中的重要组成之一,是一种富含蛋白质、核酸等物质的膜性囊泡,直径40~160 nm,能在细胞间进行信号传递。肝细胞癌来源的外泌体在肿瘤微环境中的信息调控作用对肝细胞癌的恶性生物学行为产生重大影响。近几年外泌体在肝细胞癌的检测、治疗、预...