大叶茜草素诱导黑色素瘤B16F10凋亡

目的 研究大叶茜草素对黑色素瘤B16F10细胞的作用机制。方法 使用MTT法(其中大叶茜草素浓度为0、40、80、160和320μmol/L)、平板克隆(其中大叶茜草素浓度为0、10、20和40μmol/L)来检测B16F10的增殖能力,用划痕实验(其中大叶茜草素的浓度为0、75、150和300μmol/L)来检测B16F10的迁移能力,使用凋亡与坏死检测试剂盒(其中大叶茜草素的浓度为0、75、150和300μmol/L)来检测大叶茜草素是否诱导B16F10凋亡,使用蛋白免疫印迹法(其中大叶茜草素的浓度为0、75、150和300μmol/L)来检测B16F10细胞中MTA1基因蛋白水平的表达。结果 大叶茜草素可剂量依赖性抑制B16F10细胞的增殖和迁移,诱导B16F10凋亡;经大叶茜草素处理后B16F10细胞中MTA1具有下调趋势,且呈剂量依赖性。结论 大叶茜草素可以通过下调MTA1来抑制B16F10细胞的增殖、迁移并诱导凋亡。     

黄腐酚对人皮肤鳞癌A431细胞恶性生物学行为的抑制作用

目的 探究黄腐酚对人皮肤鳞癌A431细胞增殖、迁移侵袭和凋亡的影响及作用机制。方法 给予不同浓度梯度的黄腐酚(0、10、20、40、60、80、100μmol/L)处理A431细胞,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖活性;利用细胞划痕实验、Transwell小室迁移实验、Transwell小室侵袭实验检测黄腐酚处理后A431的迁移能力、侵袭能力;利用Western blot检测A431中STAT3、JAK2和Bcl-2蛋白的表达。结果 黄腐酚可呈剂量依赖性抑制A431细胞的增殖、迁移和侵袭;A431细胞中STAT3、JAK2和Bcl-2有下调趋势,且均呈剂量依赖性。结论 黄腐酚可呈剂量依赖性的抑制A431细胞的增殖和侵袭迁移,有望作为潜在的抗皮肤鳞癌药物应用到临床。     

肿瘤转移相关基因1短式在大肠杆菌中的表达

目的 构建肿瘤转移相关基因1短式(MTA1s)原核表达载体并诱导其蛋白表达,为后续MTA1s的相关研究奠定基础。方法 取对数生长期的乳腺癌MCF-7细胞,提取细胞总RNA并反转录成cDNA,并以此为模板扩增MTA1s基因的蛋白编码区。采用一步克隆的方法将目的片段插入表达载体pET-28a(+)中并构建重组原核表达载体(命名为：pET-28a-MTA1s),将构建的重组载体用双酶切、菌液聚合酶链式反应(菌液PCR)、和测序进行鉴定。将pET-28a-MTA1s导入细菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达MTA1s重组蛋白,通过SDS-PAGE进行鉴定重组蛋白(MTA1s)表达情况以及蛋白免疫印迹分析(Western blot)鉴定重组蛋白(MTA1s)表达量。结果 以MCF-7乳腺癌细胞为模板扩增出大小位置正确的片段;构建的pET-28a-MTA1s重组载体经双酶切、菌液PCR验证正确,DNA测序证实序列正确。考马斯亮蓝染胶和Western blot结果显示IPTG诱导表达的重组蛋白分子量正确且条带单一。结论 成功构建pET-28a-MTA1s原核表达...     

β-榄香铜酸对人食管癌细胞Eca-109的抑制作用

目的 探究β-榄香铜酸对人食管癌细胞Eca-109增殖、迁移、侵袭的影响及作用机制。方法 使用不同浓度的β-榄香铜酸(0、20、40、60μmol/L)处理Eca-109细胞,首先进行MTT、平板克隆、细胞划痕、transwell迁移、transwell侵袭实验检测β-榄香铜酸对Eca-109的细胞增殖、迁移、侵袭的影响;之后在60μmol/L浓度组使用铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1)干预探索其作用机制。使用试剂盒检测Eca-109细胞中Fe²⁺、ROS、lipid ROS、GSH、MDA含量,使用Western blot实验检测Eca-109细胞中GPX4、PTGS2和4-HNE的蛋白表达。结果 β-榄香铜酸可呈剂量依赖性抑制Eca-109的细胞增殖、克隆形成、迁移、侵袭,激活Eca-109中铁死亡通路蛋白PTGS2和4-HNE,导致GPX4失活,出现铁依赖性的脂质过氧化。Ferrostatin-1可抑制整个进程,从而减少Eca-109细胞的铁死亡。结论 β-榄香铜酸可通过铁死亡通路抑制人食管癌细胞Eca-109,有望成为潜在抗食管癌的药物。